人IL-24基因的克隆、 表达、 纯化及体外诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的:克隆人白细胞介素-24(IL-24)基因,在大肠杆菌中融合表达,纯化复性,研究此融合蛋白的抗肿瘤活性。方法:分离人外周血单个核细胞,ConA刺激培养,提取细胞总RNA,RT-PCR技术克隆人IL-24基因。将IL-24插入到pET32a( )中,构建重组表达载体IL-24/pET32a,IPTG诱导在E.coli表达。Edman法N端测序,将鉴定正确的蛋白亲合层析纯化。MTT比色法体外分析杀伤肿瘤细胞的活性。结果:获得人IL-24基因,序列分析与GenBank公布一致。表达载体用双酶切和PCR鉴定正确。重组工程菌经IPTG诱导后表达相对分子质量(Mr)约为35000的融合蛋白。N端测序正确,鉴定该蛋白以包涵体形式表达。包涵体经洗涤、溶解后,亲合纯化得到纯度大于95%的融合蛋白。复性后表达产物能显著诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡(P<0.05)。结论:IL-24融合蛋白在原核细胞中高效表达,并获得高纯度、在体外明显诱导乳腺癌细胞凋亡的重组蛋白,为后续的研究提供实验基础。     

高渗盐溶液对失血性休克大鼠红细胞几何形状的影响

目的:采用微管吸吮技术,观察高渗盐溶液对失血性休克大鼠红细胞几何形状的影响。方法:Wistar大鼠随机分为0.9%NaCl(NS)、7.5%NaCl(HS)、5%NaCl-3.5%NaAc(HSA)3组。10min内放血使平均动脉压降至5.3kPa,维持90min。休克模型复制完成后,分别按4mL/kg体重静脉注入NS、HS、HSA,5min内输完。取血测定休克前、后及给药后的红细胞几何形状。结果:休克后红细胞表/体比值、球度指数无明显变化,红细胞直径较休克前下降非常显著。治疗后,HS组与NS、HSA组比较,表/体比值降低非常显著;HS组和HSA组球度指数非常显著高于NS组,HSA组球度指数非常显著低于HS组。HS组和HSA组红细胞直径非常显著低于NS组。结论:HS和HSA不利于失血性休克大鼠红细胞几何形状的改善。HSA对红细胞几何形状的不利影响低于HS。     

LT质粒的新法提取及无毒突变体LTS63K的构建和序列分析

目的：获取野生型产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素（LT）基因、构建LTS63K突变体并进行序列分析。方法：用改进的细菌基因组提取含野生型LT基因质粒，用PCR技术扩增LT的DNA，并亚克隆至pMD18-T中进行点突变和序列分析。结果：从野生型大肠杆菌提取大质粒的新法可行，所克隆的LT基因与GenBank公布的完全一致，点突变正确。结论：所克隆的基因和突变基因可用于重组表达和 免疫佐剂的相关研究。     

基质细胞衍生因子-1及其受体CXCR4在肿瘤转移中的作用

基质细胞衍生因子-1(Stromal cell-derived factor-1,SDF-1)及其受体CXCR4与人类多种肿瘤转移密切相关,CXCR4在一些肿瘤细胞系、原发肿瘤组织均呈高表达。SDF-1在肿瘤细胞潜在转移靶器官的表达量比非常规转移靶器官高,肿瘤细胞利用CXCR4与其天然配体间的趋化效应实现远距离转移。SDF-1/CXCR4驱动癌细胞转移模式的提出及其相互作用机制的深入研究对于肿瘤治疗具有重要的指导意义。     

成纤维细胞生长因子(FGFs)促进血管形成的研究进展

血 管新生 (angiogenesis)又称为新血管形成 ,是时常发生的生理和病理现象 ,如妇女子宫内膜的周期性重建 ,伤口愈合 ,慢性心肌和肢体缺血等都存在新血管形成现象 ,其形成过程非常复杂。新血管形成通常是在原有血管网络的基础上形成新的血管分支 ,这些分支再相互连接形成成熟的血管。其形态学变化包括如下几步 :(1)释放血管生长因子 ,内皮细胞表达蛋白酶使细胞基底膜断裂 ;(2 )内皮细胞粘附解体 ;(3)内皮细胞迁移至基膜 ;(4)内皮细胞增殖 ;(5 )管腔形成 ;(6 )基膜再生 ,募集外膜细胞 ,形成成熟血管。无论是生理的或病理的血管形成 ,血管生长…     

碱性氨基酸对丙交酯/乙交酯共聚物体外降解时集酸程度的调节

背景：丙交酯/乙交酯共聚物在降解中会产生酸性单体乳酸和乙醇酸而使局部集酸，从而引起机体局部产生炎症反应。 目的：采用赖氨酸、组氨酸、精氨酸分别与丙交酯/乙交酯共聚物进行复合，考察它们对丙交酯/乙交酯共聚物降解时集酸程度的调节功效。 设计：重复测量实验。 时间及地点：实验于2006-07/2007-08在重庆大学生物工程学院完成。 材料：丙交酯/乙交酯共聚物（80:20）为美国Sigma公司产品，赖氨酸、组氨酸、精氨酸（纯度 >99%）为美国Sigma公司产品；壳聚糖（脱乙酰度85%）为成都科龙化工试剂厂产品；海藻酸钠（黏度1.05~1.15）为天津大茂化学试剂厂产品。 方法：将赖氨酸、组氨酸、精氨酸分别各按5%和10%的比例与丙交酯/乙交酯共聚物制成复合物，于体外在37 ℃下在三蒸水中进行降解2 个月。用pH计检测降解液pH 的变化；在检测点将试件从人工降解液中取出滤干后再真空干燥12 h 后进行称重以计算失重率。取相同种类的3 份试样的平均pH 值作为该监测点下此试样的pH 值；取相同种类的3 份试样的平均初始质量的平均值作为该此试样的初始质量，取该试样的终质量的平均值作为此试样的终质量。以上述实验结果为依据，将碱性氨基酸的调节效果与海藻酸钠、壳聚糖、碳酸氢钠的调节效果进行比较。 主要观察指标：降解液pH 的变化；复合物的失重率。 结果：各种碱性添加剂都有一定的缓解酸度的能力，NaHCO3的缓解能力最强，海藻酸钠和壳聚糖的缓解能力较低，而碱性氨基酸的缓解能力适中；赖氨酸的添加量为5%时能够得到较佳的综合调节效果。 结论：碱性氨基酸能有效地缓解丙交酯/乙交酯共聚物降解后的集酸程度。其中，赖氨酸的添加量为5%时能够得到较佳的综合调节效果。     

胆汁酸合成和代谢调节的研究

胆汁酸的生物合成受多种因素的调节 ,其核心是对胆汁酸合成关键酶的调控。最主要的酶是胆固醇 7α 羟化酶。该酶是细胞色素Ｐ 4 5 0酶 ,易受胆汁酸和胆固醇 ,可能还有激素的调节 ,它的活性涉及细胞色素Ｐ 4 5 0 ,还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 (还原型辅酶Ⅱ ) (ＮＡＤＰＨ)细胞色素Ｐ 4 5 0还原酶 ,ＮＡＤＰＨ和卵磷脂。该酶不被苯巴比妥诱导 ,半衰期为2～ 3ｈ。1　胆固醇 7α 羟化酶的反馈调节许多研究表明 ,胆汁酸合成具有负反馈机制 ,即门脉血中胆汁酸抑制胆固醇 7α 羟化酶活性。在完全解除胆管胆汁的作用后 ,胆汁酸合成增高 7倍 ,重…     

胰岛素抵抗高血压大鼠基因表达谱和糖脂消对其的影响

目的　利用基因芯片技术探讨胰岛素抵抗高血压大鼠基因表达谱及糖脂消治疗后的变化 ,研究胰岛素抵抗的分子发病机制及糖脂消治疗胰岛素抵抗高血压的作用机制。方法　用高果糖饲料诱发SD大鼠胰岛素抵抗模型 ,给予糖脂消口服后 ,用基因芯片分别检测高果糖组 ,治疗组 ,计算机软件分析后 ,观察基因表达的变化。结果　模型组表达差异的基因有 14 0条 ,新基因有 2 2条 ,已知基因 6 1条。治疗组表达差异的基因有 95条 ,新基因有 2 3条 ,已知基因 34条。结论　利用基因芯片技术检测胰岛素抵抗表达谱 ,证实糖脂消治疗可以改变其基因表达谱 ,为进一步探讨胰岛素抵抗和糖脂消治疗作用创造了条件     

血液净化对菌血症的治疗作用

革兰阴性菌所致的菌血症至今仍是治疗难题。尽管有许多新的治疗措施 ,但菌血症的病死率仍居高不下[1～ 3] 。吸附剂过去常用于口服 ,以除去胃肠道中的毒素或药物 ,而用于菌血症治疗的潜在价值却很少为人们注意。在用对特异感染介质的生物工程抗体等治疗失败后 ,吸附剂和腹膜外血液净化技术的治疗价值重新引起人们的注意 ,用不同的腹膜外附加治疗措施 ,如血浆置换、持续性肾透析、亲和吸附等治疗可以减少或去除血液中感染性介质[4 ] 。尤以特异性吸附剂血液灌流更有应用前景。1　菌血症的病理机制菌血症从病源微生物在感染部位的增殖开始 ,随…