荧光定量PCR用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度检测的研究

目的：建立一种高效﹑简便的荧光实时定量PCR方法，用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度的检测。方法：利用Bac-to-Bac载体系统在昆虫细胞中构建含人IL-18基因的重组杆状病毒，收获的病毒母液以10倍梯度系列稀释后，提取病毒基因组DNA。以10倍梯度稀释的重组杆状病毒穿梭质粒（bacmid）作为标准模板，进行荧光定量PCR反应扩增IL-18基因片段并绘制标准曲线，然后以上述的重组杆状病毒基因组DNA作为模板，采用同样体系进行实时PCR反应检测，同时用琼脂糖空斑法测定病毒母液的滴度。结果：成功构建了重组杆状病毒并建立了病毒滴度的实时荧光PCR检测方法。运用标准模板进行的PCR反应显示该方法的线形范围为101-108拷贝，病毒母液的DNA拷贝浓度（vg/mL）值约为空斑检测的滴度 pfu/mL值的10倍。结论：荧光定量PCR方法可灵敏快速地鉴定重组杆状病毒，并在较大的线形范围内检测重组杆状病毒滴度，较之空斑法更准确地反映了重组杆状病毒的实际数量。     

围手术期腹腔区域化疗对晚期胃癌复发的影响

目的研究围手术期腹腔区域化疗对晚期胃癌复发的影响,为胃癌治疗和改善预后提供指导。方法86例晚期胃癌患者按患者意愿分为对照组（42例）和观察组（44例）,两组手术前后均采用PCF方案进行辅助化疗,观察组联合使用术中腹腔区域化疗,对照组单纯外科手术治疗,方法与观察组一致。比较两组的治疗效果和复发情况。结果对照组有效率为76．2％（32／42）,明显低于观察组的93．2％（41／44）,差异有统计学意义（P〈0．05）。两组不良反应发生情况比较差异无统计学意义（P〉0．05）。随访3～36个月,观察组6例复发,对照组14例复发。两组患者远期（〉24个月）复发率比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论围手术期联合腹腔区域化疗对于抑制胃癌的复发具有良好的防治作用。     

布地奈德对哮喘大鼠肺泡巨噬细胞GITR/GITRL信号系统表达的调控作用

目的：通过观察布地奈德对大鼠肺泡巨噬细胞（Mφ）GITR/GITRL表达的影响,探讨GITR/GITRL信号系统参与哮喘炎症反应的机制。方法：将30只SD大鼠随机分为哮喘组、对照组、布地奈德组,每组10只,卵白蛋白建立哮喘模型。行支气管肺泡灌洗分离提纯肺泡Mφ,分别采用实时荧光定量PCR法和细胞免疫化学法测定肺泡MφGITR/GITRL mRNA和蛋白的表达。结果：哮喘组肺泡MφGITR/GITRL mRNA△CT值（11.05±0.23,9.82±1.24）和蛋白OD值（0.64±0.08,0.71±0.05）表达水平显著高于对照组△CT值（12.79±1.28,11.88±1.37）和蛋白OD值（0.37±0.09,0.39±0.04）（P均〈0.05）;布地奈德组肺泡MφGITR/GITRL mRNA△CT值（12.97±0.97,11.16±1.42）和蛋白OD值（0.40±0.06,0.40±0.07）表达量显著低于哮喘组（P均〈0.05）,但与对照组比较差异无统计学意义（P均〉0.05）。结论：哮喘大鼠肺泡MφGITR/GITRL的表达升高,肺泡Mφ可能通过GITR/GITRL信号系统起到促进哮喘气道炎症的作用,而糖皮质激素布地奈德可能通过抑制肺泡MφGITR/GITRL信号通路在哮喘治疗中起作用。     

头孢哌酮/舒巴坦联合克拉霉素治疗慢性阻塞性肺疾病合并下呼吸道感染的疗效观察

目的 观察头孢哌酮/舒巴坦联合克拉霉素治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并下呼吸道感染的临床疗效.方法 2010年1月-2011年1月78例COPD合并下呼吸道感染患者,按随机数字表法分为两组,观察组39例采用头孢哌酮/舒巴坦联合克拉霉素治疗,对照组39例仅采用头孢哌酮/舒巴坦治疗,比较观察两组的临床疗效及临床症状变化.结果 观察组的总有效率为94.9％,明显高于对照组的74.4％,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);观察组的平均退热时间、白细胞恢复正常时间、肺部湿啰音消失时间及住院时间分别为(3.43±1.23)h、(5.07±1.25)d、(5.62±1.06)d和(7.82±1.51)d,对照组为(4.62±1.67)h、(6.24±1.72)d、(7.08±1.53)d和(9.68±1.82)d,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);两组不良反应发生比较,差异无统计学意义.结论 头孢哌酮/舒巴坦联合克拉霉素,治疗慢性阻塞性肺疾病合并下呼吸道感染,能够明显提高疗效,改善患者临床症状,不良反应少,值得临床推广应用.     

中医外科护士核心能力框架的构建

目的：构建中医外科护士核心能力框架,推动中医外科护理全面发展。方法在文献回顾、半结构式访谈的基础上,采用德尔菲法进行2轮专家函询,最终确立了中医外科护士核心能力指标。结果2轮专家咨询问卷专家积极性系数为100％,专家权威系数0．896,专家协调系数检验P＜0．01。最终确立中医外科护士核心能力框架,包括5个一级指标和25个二级指标,其中一级指标包括临床护理实践、教育咨询能力、科研能力、管理能力和法律伦理实践能力。结论初步建立的中医外科护士核心能力框架体系具有较高的科学性和合理性,有助于为中级外科护士的选拔、培训及考评提供一定的理论依据。     

不同麻醉方法对老年患者术后认知功能的影响

目的探讨不同麻醉方法对老年患者术后认知功能的影响。方法96例患者随机分为观察组和对照组．前者采用硬膜外麻醉,后者采用全身麻醉,对比两组患者麻醉前和术后6h、24h及72h的MMSE评分、POCD发生率、麻醉药用量、术后疾病恢复时间。结果MMSE评分两组术后均较麻醉前降低,各组前后比较均有统计学意义（P〈0．01）;而术后各时段观察组均高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）,POCD发生率观察组明显低于对照组．疾病恢复时间短于对照组,差异有高度统计学意义（P〈0．01）;两组麻醉药用量比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论硬膜外麻醉对老年患者术后认知功能影响轻,POCD发生率低,疾病恢复快。且不增加麻醉药量．值得选用。     

毛细支气管炎和急性上呼吸道感染患儿血清可溶性TRAIL及其受体TRAILR1、TRAILR4的表达

【目的】 观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体(sTRAILR1和sTRAILR4)在毛细支气管炎和急性上呼吸道感染患儿中的表达,探讨它们在呼吸道感染炎症机制中的作用。 【方法】 ELISA 法检测毛细支气管炎和急性上呼吸道感染患儿及健康对照组儿童血清sTRAIL、sTRAILR1和sTRAILR4的蛋白浓度。 【结果】 毛细支气管炎组和急性上呼吸道感染组患者血清中sTRAIL、sTRAILR1和sTRAILR4的蛋白浓度分别为(85±38)、(71±19)、(167±97);(78±28)、(61±15)、(139±72) pg/mL均显著高于对照组(55±19)、(45±14)、(56±38) pg/mL(P均<0.01);毛细支气管炎组sTRAILR1的蛋白浓度显著高于急性上呼吸道感染组(P<0.05),两组sTRAIL和sTRAILR4的蛋白浓度相比差异无统计学意义(P均>0.05)。sTRAILR1分别与sTRAIL、sTRAILR4的蛋白浓度呈显著正相关(n=102,r分别为0.236和0.409,P均<0.01)。 【结论】 毛细支气管炎和急性上呼吸道感染患儿血清中可溶性TRAIL及其受体TRAILR1和TRAILR4的表达增加,它们可能参与了呼吸道感染的炎症过程,TRAIL可能主要通过TRAILR1起作用,它们的表达水平增高可能被视为病情活动的指标之一。     

Smad2／3和Smad7蛋白在血中性粒细胞中的表达与哮喘发病关系的实验性研究

目的：观察Smad2／3和Smad7蛋白在大鼠哮喘血中性粒细胞（PMN）中的表达,探讨PMN能否通过Smads体系参与哮喘气道炎症的发病过程。方法：卵白蛋白（OVA）诱导大鼠哮喘模型,20只SD大鼠随机分成哮喘组和正常对照组,分离纯化血PMN,免疫细胞化学法检测PMNSmad2／3和Smad7蛋白的表达水平。结果：哮喘组（0．142±0．021,OD值）Smad2／3蛋白的表达水平显著高于正常对照组（0．081±0．011,OD值）（P〈0．01）,而哮喘组（0．125±0．024,OD值）Smad7蛋白的表达水平显著低于正常对照组（0．257±0．047,OD值）（P〈0．01）。两者的表达呈显著负井目关（n=19,r=-0．891,P〈0．01）。结论：Smads体系在哮喘时处于失衡状态,受体调节型Smad占优势。哮喘时PMN合成Sinad2／3和Smad7蛋白的功能增加,PMN可能部分通过Smads体系参与哮喘的气道炎症过程。     

中性粒细胞弹性蛋白酶、髓过氧化物酶在大鼠哮喘中的变化及意义

目的：观察中性粒细胞（PMN）、中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）和髓过氧化物酶（MPO）在大鼠哮喘中的表达水平变化及意义。方法:18只大鼠被随机平均分成2组：哮喘组、正常对照组，以卵清白蛋白（OVA）致敏激发法复制大鼠哮喘模型，对血PMN进行分离纯化，免疫组化和比色法检测MPO的表达水平，ELISA法测定NE的蛋白浓度。 结果:（1）免疫组化法显示哮喘组血PMN和支气管壁中MPO的表达水平均显著高于对照组（P<0.01），比色法显示哮喘组支气管肺泡灌洗液（BALF）和肺组织中MPO的活性显著高于对照组（P<0.05，P<0.01）；（2）哮喘组PMN和BALF中NE蛋白浓度显著高于对照组（P<0.01）；（3）哮喘组BALF、支气管壁、肺组织中PMN的计数均显著高于对照组（P<0.01）。 结论:PMN 计数、NE和MPO的表达水平在此实验性哮喘中增加，PMN可能通过分泌NE、MPO参与哮喘炎症过程。     

基质金属蛋白酶9在哮喘大鼠中性粒细胞中的表达

目的：观察基质金属蛋白酶9（MMP-9）在哮喘大鼠血中性粒细胞（PMN）中的表达,探讨PMN能否通过合成MMP-9参与哮喘的发病。方法：健康雄性SD大鼠30只,随机分成哮喘组（A组）、布地奈德治疗组（B组）和正常对照组（C组）,用卵蛋白（OVA）致敏和激发的方法建立哮喘模型。分离纯化血PMN,免疫细胞化学法检测MMP-9的表达水平,ELISA法检测血清基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的浓度。结果：A组（0.196±0.011,OD值）PMNMMP-9的表达水平显著高于C组（0.100±0.010,OD值）（P〈0.01）,B组（0.135±0.008,OD值）PMNMMP-9的表达水平显著低于A组但高于C组（均P〈0.01）。A组血清TIMP-1为（34.96±4.54）ng/mL,表达水平显著高于C组的（26.14±3.43）ng/mL（P〈0.01）,B组血清TIMP-1的表达水平显著低于A组但高于C组（P〈0.05或P〈0.01）。MMP-9与TIMP-1的表达水平呈显著正相关（n=29,r=0.713,P〈0.01）。结论：哮喘大鼠PMN合成MMP-9的功能增加,PMN可能部分通过增加合成MMP-9参与哮喘的发病,这种功能可以部分被布地奈德所抑制。