肿瘤微环境中间充质干细胞的相关生物学特性分析

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)在肿瘤微环境中是否获得肿瘤细胞的相关生物学特性而导致恶性转化。方法通过6孔板结合Transwell小室建立间充质干细胞和大鼠C6胶质瘤细胞的共培养体系,以共培养组为实验组,另设单独培养的间充质干细胞作为对照组。于相差显微镜下观察培养后两组细胞的形态学改变;采用流式细胞术(FCM)分析细胞周期变化;采用荧光定量PCR和免疫荧光法检测间充质干细胞mdm2、p53mRNA水平及共培养后两组细胞中p53突变蛋白和mdm2癌蛋白的表达。结果共培养后实验组细胞表现为胶质瘤细胞样形态。细胞周期检测结果显示共培养7d后,对照组G1期细胞占90.48%±6.62%,实验组占82.22%±2.74%,两组间差异无统计学意义(P>0.05);对照组S期细胞占4.66%±4.16%,实验组占7.35%±1.93%,两组间差异亦无统计学意义(P>0.05)。定量PCR及免疫荧光检测显示,实验组p53mRNA水平明显降低,为对照组的0.24倍(P<0.05);部分实验组细胞(24.8%)中表达突变型p53蛋白,而对照组无突变p53蛋白表达(P<0.05)。实验组mdm2mRNA及其蛋白的表达水平...     

血清降钙素原联合C反应蛋白对儿童川崎病并发冠状动脉损害的预测价值

目的探讨儿童川崎病急性期血清降钙素原(PCT)水平联合血清C反应蛋白(CRP)水平,对并发冠状动脉损害(CAL)的预测价值。 方法选取2015年11月1日至2016年12月31日,于重庆医科大学附属儿童医院确诊为川崎病后,接受规范化治疗,并且符合本研究纳入、排除标准的217例川崎病患儿为研究对象。采用回顾性分析方法,收集所有患儿的性别、年龄等一般临床资料,血清PCT、CRP水平检测结果,以及川崎病发病后30 d内的超声心动图检查结果。根据217例患儿川崎病急性期是否并发CAL,将其分别纳入CAL组(n＝72)和非CAL组(n＝145)。采用Mann-Whitney U检验,比较2组患儿的血清PCT、CRP水平。采用χ²检验,比较2组患儿的血清PCT、CRP阳性率。采用二元logistic回归分析方法,构建血清PCT与CRP水平预测川崎病患儿并发CAL的联合预测因子L。绘制联合预测因子L及血清PCT、CRP水平预测川崎病患儿并发CAL的受试者工作特征(ROC)曲线,计算ROC曲线下面积(ROC-AUC),根据约登指数最大原则,确定联合预测因子L及血清PCR与CRP水平预测川崎病患儿并发CAL的最佳临界值,同时计算预测川崎病患儿并发CAL的敏感度、特异度。2组患儿性别构成比、年龄等一般临床资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。 结果①CAL组与非CAL组患儿血清PCT水平中位数分别为1.16 μg/L与0.04 μg/L,血清CRP水平中位数分别为25.0 mg/L与16.4 mg/L,2组患儿血清PCT、CRP水平比较,差异均有统计学意义(Z＝－2.454,P＝0.046;Z＝－6.412,P<0.001)。2组患儿血清PCT、CRP阳性率分别比较,差异均无统计学意义(χ²＝1.222,P＝0.269;χ²＝0.665,P＝0.415)。②以川崎病患儿是否并发CAL作为二分类结局变量,血清CRP、PCT水平作为自变量,建立二元logistic回归方程的结果显示,血清CRP、PCT水平升高,均为川崎病患儿并发CAL的独立危险因素(OR＝1.077,95%CI：1.027～1.190,P<0.001;OR＝1.046,95%CI：1.015～1.078,P＝0.003)。构建的联测预测因子L的表达式为：L＝x₁＋0.608x₂,其中x₁、x₂分别是指血清CRP、PCT水平。③ROC曲线分析结果显示,联合预测因子L及血清PCT、CRP水平,对预测川崎病患儿并发CAL的ROC-AUC分别为0.773(95%CI：0.700～0.845,P<0.001),0.560(95%CI：0.475～0.645,P＝0.148)和0.767(95%CI：0.695～0.839,P<0.001)。根据约登指数最大原则,联合预测因子L及血清PCT、CRP水平,预测川崎病患儿并发CAL的最佳临界值分别为23.068、2.32 μg/L和22.0 mg/L,此时其预测川崎病患儿并发CAL的敏感度分别为68.1%、30.6%、68.1%,特异度分别为83.4%、86.9%、80.7%。 结论监测儿童川崎病急性期血清PCT、CRP水平及其联合预测因子L值(L＝x₁＋0.608x₂,其中x₁、x₂分别是指血清CRP、PCT水平),对儿童川崎病急性期并发CAL具有预测价值。     

基于神经网络的川崎病并发冠状动脉病变预测模型

建立川崎病并发冠状动脉病变预测模型。从电子病历数据库中收集1 000例(343例患冠状动脉病变)川崎病患儿的人口学资料、实验室检验数据、超声心动图数据,对数据进行预处理后用关联规则筛选川崎病并发冠状动脉病变的危险指标,划分训练集和测试集分别为总样本集的70%和30%,分别建立神经网络模型和Logistic回归模型,并用灵敏度及特异性等指标对模型的预测效果予以评估。结果显示,神经网络模型的灵敏度=0.718,特异性=0.746,准确率=0.737及AUC(ROC曲线下面积)=0.796,优于Logistic回归模型[灵敏度=0.175,特异性=0.893,准确率为0.647及AUC=0.624]。研究结果表明,神经网络模型对川崎病并发冠状动脉病变的预测效果优于Logistic回归模型。     

葛根芩连汤配方颗粒和传统汤剂的HPLC的指纹图谱对比研究

目的:采用高效液相(HPLC)比较研究葛根芩连汤配方颗粒剂和传统汤剂的指纹图谱差异。方法:首先选择3家不同医院A、B、C的葛根芩连汤配方颗粒剂和传统汤剂,配制对照品溶液和供试品溶液后,以优化的色谱条件进行HPLC指纹图谱研究。结果:HPLC中间精密度试验、重复性试验和稳定性试验均显示良好。葛根芩连汤颗粒剂HPLC指纹图谱发现前5 min K1、K2和K3的谱图差异较大,5 min后3家不同医院葛根芩连汤颗粒剂HPLC指纹图谱有10个相似的特征峰,其中K3特征峰的成分含量与K1和K2存在较大差异,尤其是1号峰和4号峰。K1和T1、K2和T2、K3和T3颗粒剂和传统汤剂的比较中,颗粒剂特征峰的含量较传统汤剂高。结论:葛根芩连汤配方不同医院颗粒剂和传统汤剂的HPLC指纹图谱存在一定差异。     

心肌细胞肥大过程中心脏发育相关转录因子及下游心脏肥大标志基因的时序性表达规律研究

目的 观察在心肌细胞肥大过程中心脏发育相关转录因子及下游心脏肥大标志基因时序性表达规律,为心肌肥大机制研究提供线索.方法 用异丙肾上腺素(ISO)干预心肌细胞,用CCK-8、细胞计数仪、免疫组化分别检测细胞存活率、细胞直径及表面积,用RT-PCR、Western blotting分别检测相关基因mRNA及蛋白表达水平.结果 用ISO成功构建心肌细胞肥大模型.ISO干预后,GATA结合蛋白4(GATA4)、肌细胞增强因子2C(MEF2C)、GATA5、脑钠肽(BNP)、心房利钠因子(ANP)于24h开始升高,P300、α-肌球蛋白重链(α-MHC)、T-框蛋白5(TBX5)于12h开始升高,血清应答因子(SRF)、β-MHC mRNA于6h开始升高(P＜0.05);其中GATA4、d-MHC、β-MHC、SRF、P300 mRNA表达呈先升后降的趋势,至干预72h GATA4、SRF、α-MHC、β-MHC、P300 mRNA表达仍高于正常(P＜0.05),而MEF2C降至正常(P＞0.05);GATA5、TBX5、ANP、BNP mRNA表达与对照组相比持续升高(P＜0.05),而NKX2.5 mRNA(P＞0.05)无明显变化.ISO干预48h后,GATA4蛋白表达水平升高,HEY2蛋白表达水平降低(P＜0.05).结论 在心肌细胞肥大过程中,MEF2C的时序表达规律与心脏发育过程相似,而GATA4、GATA5、SRF、TBX5的时序性表达规律与心脏发育过程不完全一致,提示其在心肌细胞肥大由代偿转为失代偿过程中的重要作用.同时GATA4、MEF2C、SRF与乙酰化酶P300的时序性表达规律相似,提示在心肌细胞肥大过程中其时序性表达可能受P300调控.     

布地奈德、沙丁胺醇、沐舒坦联合雾化吸入治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期的临床观察

目的 研究布地奈德混悬液联合沙丁胺醇及沐舒坦氧气驱动气雾吸入治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)的临床疗效.方法 将60例慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者随机分成治疗组及对照组,治疗组在常规治疗基础上加用布地奈德联合沙丁胺醇及沐舒坦氧气驱动气雾吸入治疗,对照组则是加用沙丁胺醇及沐舒坦氧气驱动气雾吸入治疗,记录两组患者用药7 d前后的临床症状、体征、祛痰及肺功能.结果 治疗组有效率明显优于对照组(P<0.05).结论 布地奈德联合沙丁胺醇及沐舒坦氧气驱动气雾吸入治疗AECOPD能促进排痰、畅通呼吸道、改善肺功能,是一种安全有效的方法.     

先天性心脏病发生机制的体内实验研究方法

对于先天性心脏病的研究需依赖于体内实验,而体内实验的成功必须借助于准确、有效的实验方法.近年来,随着新理论的发现,不断有新的实验方法应用于体内实验.该文就近年常用的及新出现的应用于研究先天性心脏病发生机制的体内实验方法作一综述.     

HIF-1α在青紫型先天性心脏病患儿心脏慢性缺氧适应机制中的作用

目的 探讨慢性缺氧对先天性心脏病患儿心脏缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)表达的影响.方法 收集非青紫型先天性心脏病患儿16例、青紫型先天性心脏病患儿12例,体外循环前留取右心耳组织,采用半定量RT-PCR方法 检测右心耳组织中HIF-1α mRNA水平,用免疫组织化学方法 检测右心耳组织中HIF-1α蛋白的表达.结果 青紫型先天性心脏病患儿心脏组织HIF-1α mRNA相对表达量与非青紫组比较差异无统计学意义(P>0.05),青紫型先天性心脏病患儿心脏组织HIF-1α蛋白表达量与非青紫组比较差异有统计学意义(P<0.001).结论 慢性缺氧上调先天性心脏病患儿心脏组织HIF-1α蛋白表达,该作用可能参与介导青紫型先天性心脏病患儿心脏慢性缺氧适应的分子机制.     

射频消融术治疗小儿室上性心动过速的临床评价

目的 评价射频消融术治疗小儿阵发性室上性心动过速(PSVT)的临床安全性及疗效.方法 回顾性分析26例接受射频消融治疗患儿的临床资料.结果 除1例复发外,所有选择病例均消融成功,全部转为窦性心律,术后无并发症出现,远期随访观察无不良反应.结论 射频消融术治疗儿童室上性心动过速是安全有效的,对于条件适合的患儿可作为首选治疗方案.     

基于熵权法结合Box-Behnken响应面优化筋骨痛消液的制剂醇提工艺

目的 优化筋骨痛消液的制剂工艺。方法 采用熵权法结合Box-Behnken响应面法对筋骨痛消液中乳香、续断、龙血竭与红花及大黄与薄荷的醇提工艺进行优化。结果 11-羰基-β-乙酰乳香酸含量与乳香醇提液浸膏得率权重系数分别为0.5166,0.4834;川续断皂苷Ⅵ含量与续断醇提液浸膏得率权重系数分别为0.4790、0.5210。乳香、续断、龙血竭与红花、大黄与薄荷最优醇提条件乙醇浓度分别为95%,55%,80%,60%;加醇倍量分别为5倍，5倍，7倍，8倍；浸泡时间分别为48 h, 72 h, 24 h, 72 h。结论 通过熵权法结合响应面法设计优化筋骨痛消液的制剂提取工艺，为筋骨痛消液制剂质量提升及质量保证提供科学依据。