香加皮三萜类化合物对甲基苄基亚硝胺诱导的食管癌大鼠调节性T细胞功能的影响

目的：探讨香加皮三萜类化合物（triterpenes compound of cortex periplocae,TCCP）对甲基苄基亚硝胺（N_nitrosomethylbenzylamine,NMBA）诱导的食管癌大鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞功能的影响。方法：健康雄性F344大鼠40只,随机分为模型组（0.5mg/kg NMBA皮下注射）、治疗组（0.5mg/kg NMBA皮下注射及10mg/kg TCCP肌肉注射）、大豆油对照组（肌肉注射大豆油1ml/kg）和正常对照组,每组10只。各组每周给受试物3次,连续5周。分别在给受试物后第9周和第15周抽取4组大鼠外周血各1ml。用流式细胞仪检测大鼠外周血中CD4^＋T细胞和CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Tr细胞）的水平。另留取血清用ELISA法检测大鼠外周血白细胞介素IL-2、IL-10和转化生长因子TGF_β1的含量。结果：与正常对照组相比,NMBA给药后第9周和第15周,模型组外周血中CD4^＋T细胞比例均显著降低（P均〈0.05）,而CD4^＋CD25^＋Tr细胞比例均显著升高（P均〈0.05）。与同时期模型组比较,TCCP治疗组在给药后第9周和第15周外周血中CD4^＋T细胞比例升高,CD4^＋CD25^＋Tr细胞比例降低,差异均具有统计学意义（P均〈0.05）。NMBA给药后第9周和第15周,模型组大鼠外周血中IL-10、TGF-β1水平显著高于正常对照组（P均〈0.05）,经TCCP治疗后显著下降（P均〈0.05）;大鼠外周血中IL-2水平则呈现与之相反的趋势。结论：NMBA诱导大鼠食管癌后外周血中CD4^＋CD25^＋Tr细胞水平增加,TCCP可以通过抑制CD4^＋CD25^＋Tr细胞活化来纠正食管癌发生、发展过程中所致免疫细胞抑制状态,改善NMBA诱导的食管癌大鼠细胞免疫功能紊乱。     

H1299细胞中P1k3对p73转录活性的影响

背景与目的:研究表明蛋白激酶P1k3可以增加肿瘤抑制因子p53的转录活性,但对p73转录活性的影响尚不清楚,因此本实验旨在研究蛋白激酶P1k3对p73转录活性的影响.方法:选用p53缺失型人类肺癌细胞系H1299,采用荧光素酶报告剂分析、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及克隆形成实验的方法研究蛋白激酶P1k3及激酶活性缺失的P1k3(K52R)对p73转录活性的影响.结果:荧光素酶报告剂分析结果显示,单独转染p73基因可以增加p21~(WAF1)和Bax启动子介导的荧光素酶的表达(P<0.05);共转染p73基因和P1k3基因,p21~(WAF1)和Bax启动子介导的荧光素酶的表达与单独转染p73基因组相比显著降低(P<0.05),且呈浓度依赖性;而激酶活性缺失的Plk3(K52R)对p21~(WAF1)和Bax启动子介导的荧光素酶的表达没有显著影响(P>0.05).RT-PCR检测结果也显示,p73诱导p2~(WAF1)和Bax的mRNA表达(P<0.05),P1k3降低了p73诱导的p21~(WAF1)和Bax的mRNA表达水平(P<0.05);而激酶活性缺失的P1k3(K52R)对p73诱导的p21~(WAF1)和Bax的mRNA表达水平无显著影响(P>0.05).克隆形成实验结果显示,p73抑制了H1299细胞克隆的形成(P<0.05),P1k3降低了p73对H1299细胞克隆形成的抑制(P<0.05),而激酶活性缺失的P1k3(K52R)对p73抑制H1299细胞克隆形成无显著影响(P>0.05).结论:P1k3可以抑制p73的转录活性,而激酶活性缺失的P1k3(K52R)对p73的转录活性无明显影响.     

香加皮三萜类化合物抑制食管癌Eca109细胞裸鼠成瘤及其机制

目的： 研究香加皮三萜类化合物（triterpenes compound extracted from cortex periplocae,TCCP）对荧光素酶（luciferase）标记的人食管鳞癌细胞株Eca109（Eca109-luc细胞）在裸鼠体内成瘤的作用及其机制。 方法： Eca109-luc细胞经皮下接种裸鼠,构建Eca109-luc细胞裸鼠移植瘤模型,观察TCPP治疗后移植瘤体积和质量的变化,应用活体成像系统观察移植瘤生长情况,H-E染色观察移植瘤组织形态学变化,流式细胞仪检测移植瘤细胞的凋亡,Western blotting检测移植瘤组织中survivin的表达。 结果： TCPP在体内能明显抑制裸鼠Eca109-luc移植瘤的生长,移植瘤体积和质量明显减少,抑瘤率为40.7%。TCPP 治疗组小鼠移植瘤组织出现明显炎性细胞浸润及肿瘤细胞坏死,移植瘤细胞的凋亡率明显高于大豆油对照组（P<005）,移植瘤组织中survivin蛋白表达水平明显下降（P<0.05）。 结论： TCCP在体内能抑制人食管癌Eca109细胞的生长,其作用机制可能与下调survivin的表达诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

ALDH1和CD55表达在乳腺癌预后评估中的意义

目的探讨乳腺癌组织乙醛脱氢酶1（ALDH1）阳性表达及CD55高表达在乳腺癌患者预后评估中的价值。方法应用免疫组化法对65例随访5～8年的乳腺癌患者的组织标本进行ALDHl和CD55表达检测,判定ALDH1阳性表达及CD55高表达标本,分析各临床疾病特征与CD55高表达及ALDH1阳性表达的关系。计算患者的5年生存率,分析其与CD55高表达、ALDH1阳性的相关性;分析5年生存率与临床疾病特征的相关性,并进一步筛选影响患者预后的独立危险因素。结果65例乳腺癌组织标本中,ALDH1阳性表达占24．6％（16／65）,CD55高表达占33．8％（22／65）。ALDH1阳性表达和CD55高表达与乳腺癌患者绝经状况、肿瘤组织学类型、组织学分级、肿瘤直径、是否发生淋巴结转移、雌激素受体和孕酮受体表达情况、表皮生长因子受体2（Her2）表达情况、术后是否接受其他治疗均无关（P〉0．05）,与肿瘤是否复发密切相关（氏0．01）。与ALDHI阴性、CD55低表达患者相比,ALDH1阳性表达、CD55高表达患者的5g生存率显著降低（P〈0．001）。Logistic回归分析显示,ALDH1阳性表达、CD55高表达、肿瘤直径（〉5cm）、组织学分级（III级）、Her2表达阴性、术后未接受治疗是影响乳腺癌患者预后的独立因素。结论乳腺癌组织ALDH1阳性表达和CD55高表达可能是与乳腺癌患者预后相关的独立影响因素。     

鼻咽癌组织中UPA及UPAR蛋白的表达及其临床意义

鼻咽癌是一种上皮起源性的恶性肿瘤,具有明显的地区聚集性,高发于我国南方和东南亚地区,在广东、海南两地发病率最高^[1],其病因涉及EB病毒感染、遗传因素、环境因素、饮食因素等。鼻咽癌容易转移,甚至在原发病灶不明显时即发生颈部淋巴结转移或远处器官转移,鼻咽癌转移是鼻咽癌患者治疗失败和死亡的主要原因,     

脾源性酪氨酸激酶Syk的抗肿瘤作用

目的探讨脾源性酪氨酸激酶（spleen tyrosine kinase,Syk）的体内外抗肿瘤作用。方法经脂质体介导将全长Syk cDNA转入Syk阴性表达的高侵袭性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,应用MTT法、Transwell小室法分别检测SykcDNA体外抗肿瘤细胞增殖及侵袭迁移作用;采用BABL／c（nu／nu）裸鼠皮下移植瘤模型,检测转染及未转染肿瘤细胞的成瘤及肺转移情况。结果转染全长Syk cDNA的MDA—MB-231细胞与转染空载体及未转染MDA—MB-231细胞相比,体外增殖情况未见明显改变,而侵袭及迁移实验中的穿膜细胞数（总迁移细胞数／5HPF）却均明显减少（P〈0．05）;同样,接种不同肿瘤细胞的裸鼠皮下移植瘤成瘤情况未见明显差异,但接种转染组肿瘤细胞的肺转移率却显著低于未转染组及空载体转染组（P〈0．05）。结论Syk通过改变乳腺肿瘤细胞的侵袭迁移能力参与其抗瘤作用。     

杠柳苷对人食管癌细胞增殖的抑制作用及与Rb蛋白表达的关系

背景与目的： 分析中药香加皮醇提物杠柳苷(CPP)对食管癌细胞株TE_13的生长抑制作用,探讨其诱导细胞凋亡和周期阻滞与Rb蛋白表达的关系。 材料与方法： 取对数生长期的人食管癌细胞TE_13,接种于96孔培养板,分为实验组、阴性对照组和阳性对照组。实验组加入不同浓度的CPP,阴性对照孔加入完全培养基,阳性对照孔加入化疗药物羟甲基喜树碱,应用MTT法检测CPP对TE_13细胞的抑制作用;光镜下观察TE_13细胞的形态学变化;流式细胞技术检测细胞凋亡率;免疫组化法检测TE_13细胞经药物处理前后去磷酸化Rb蛋白表达的变化。 结果： CPP对TE_13细胞增殖具有明显的抑制作用(P<0.01),其药物浓度越大,作用时间越长,抑制效应越强;CPP作用48 h时,对TE_13细胞的半数抑制浓度(IC50)为0.61 μg/ml。出现亚二倍体和凋亡峰(Ap);CPP能提高TE_13细胞中Rb蛋白的表达(P<0.01)。 结论： CPP能显著抑制TE_13细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与CPP提高Rb蛋白的表达有关。     

细胞因子诱导的杀伤细胞对人宫颈癌HeLa-luc细胞荷瘤裸鼠模型的抗肿瘤作用

目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)抗肿瘤活性,及其作用机制.方法:人宫颈癌细胞HeLa-luc接种BALB/ C裸鼠建立动物模型.从健康人外周血单个核细胞诱导培养CIK细胞.CIK或PBS经瘤周注射入荷瘤鼠体内.应用活体生物发光成像技术观察肿瘤大小变化.观察肿瘤的体积和重量变化. ELISA法检测荷瘤鼠外周血中IFN-γ水平.HE染色观察肿瘤、肺脏、肝脏及脾脏的病理形态学变化.结果:CIK治疗后实验组(CIK)肿瘤明显比对照组(PBS)体积小,P<0.05.接种HeLa-luc细胞第5、8周的抑瘤率分别为47.18%、64.38%.接种HeLa-luc细胞第8周实验组血清中IFN-γ[(61.92±6.49) ρg/mL]明显高于对照组[(34.30±1.78) ρg/mL],P<0.01.实验组和对照组中,肿瘤组织形态学无明显差别.实验组肺脏、肝脏未见癌结节出现,但均有炎细胞浸润.对照组肺脏出现大量癌结节而肝脏未见癌结节出现.两组脾脏中均可见癌结节.结论:CIK细胞可以明显抑制肿瘤的生长,其机制可能与免疫细胞产生IFN-γ有关.该研究为肿瘤的临床过继免疫治疗提供了理论依据.     

香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ对食管癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ在体内外对人食管癌细胞Eca109的增殖抑制作用及其对细胞凋亡的影响。方法：采用柱层析和高效液相色谱等逐步分离法对香加皮抗肿瘤活性成分进行分离和纯化,应用薄层层析和电喷质谱分析进行成分鉴定;采用MTT法分析不同浓度宝藿苷Ⅰ对食管癌细胞株Eca109增殖的抑制作用;应用FCM分析细胞周期变化和凋亡率变化;皮下注射Eca109细胞建立裸鼠移植瘤动物模型,通过肌肉注射给药检测宝藿苷Ⅰ的体内抗肿瘤效果;Western印迹法检测移植瘤组织凋亡相关基因survivin的表达变化。结果：宝藿苷Ⅰ可明显抑制Eca109细胞的增殖（P〈0．05）,并呈浓度及时间依赖性。经宝藿苷Ⅰ作用48h后,随着药物浓度的增加（12．5、25．0和50．0μg／mL）,Eca109细胞G0／G1期明显增加（P〈0．05）,S期和G2／M期细胞明显减少（P〈0．05）;经宝藿苷Ⅰ作用后,Eca109细胞的凋亡率随药物作用时间的延长（24、48和72h）和宝藿苷浓度的增加（0、12．5、25．0和50．0μg／mL）而明显升高（P〈0．01）;Eca109裸鼠移植瘤经宝藿苷Ⅰ（15mg／kg）治疗后,肿瘤生长受到明显抑制（P〈0．01）,生长抑制率达（60．9&#177;0．16）％;survivin的蛋白表达明显降低（P〈0．05）。结论：香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ不仅在体外对Eca109细胞的增殖具有显著的抑制作用,在体内也有较好的抗食管癌效果。其抗瘤机制可能与阻滞Eca109细胞周期发展和诱导凋亡相关基因survivin的表达降低有关。     

Celecoxib下调NF-kB信号通路促进人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的体外研究

背景与目的:Celecoxib可以抑制多种肿瘤细胞增殖、诱导其凋亡,但具体的作用机制尚不明确.本研究探讨Celecoxib是否通过阻断NF-kB信号途径诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡.方法:RT-PCR法检测MDA-MB-231细胞中COX-2 mRNA的表达.MTT法检测Celecoxib、PGE2与Celecoxib联合应用对MDA-MB-231细胞增殖的影响.流式细胞术检测细胞周期、凋亡的变化.Westernblot法检测0、40、80、120 μmol/L Celecoxib作用MDA-MB-231细胞24 h后细胞中Caspase-3、p65蛋白的表达变化.结果:RT-PCR检测显示MDA-MB-231细胞中COX-2 mRNA的表达随着Celecoxib浓度的增加而逐渐降低.Celecoxib能够显著地抑制MDA-MB-231细胞增殖(P<0.05),但Celecoxib联合PGE2与单独应用Celecoxib对细胞增殖的影响差异无统计学意义(P>0.05).流式细胞术结果显示Celecoxib可使MDA-MB-231细胞阻滞在G0/G1期,并可诱发细胞凋亡.Western blot检测发现Celecoxib作用MDA-MB-231细胞24 h,随着Celecoxib浓度的增加,Caspase-3蛋白表达增加,P65蛋白表达下调.结论:Celecoxib可以通过下调P65蛋白的表达从而阻断NF-kB信号途径,抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,促进其凋亡.