福泉市儿童手足口发病危险因素及外环境污染情况调查分析

手足口病是由多种人肠道病毒引起的儿童常见传染病，最常见为柯萨奇病毒A组16型（CA16）及肠道病毒71型（EV71），可引起发热和手、足、口腔等部位的皮疹、溃疡，个别重症患儿病情进展快，易发生死亡。2011年1月1日～6月1日，贵州省手足口病报告发病率为16．83／10万，福泉市报告发病率为177．21／10万，明显高于全省平均水平，在全省各区县位列第三。为了解福泉市手足口发病的危险因素及外环境手足口病毒污染状况，我们于2011年5月进行了本次调查。现报告如下。     

贵阳地区GⅡ.4型诺如病毒变异株的初步研究

目的 了解贵阳地区GⅡ.4型诺如病毒变异株的组成及其点突变.方法 监测2010年6-11月于贵阳地区哨点医院就诊的急性胃肠炎病例,收集粪便标本,采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real-time RT-PCR)初步鉴定,随机选取部分GⅡ型诺如病毒阳性标本,采用一步法RT-PCR对其VP1基因区克隆及测序,基因序列与国内外流行的GⅡ.4型诺如病毒进行系统进化及氨基酸位点的突变分析.结果 检测标本426份,有267份(62.68％)GⅡ型诺如病毒阳性,测序获得了9份GⅡ.4型诺如病毒VP1基因组序列,贵州省2010年流行的GⅡ.4型诺如病毒包括2个变异株(GⅡ.42008a和GⅡ.4 2008b新型变异株),亚型组闻的VP1基因的同源性为95.90％ ～ 96.72％,亚型组内同源性为99.45％ ～ 100％,有2个氨基酸位点易发生突变.结论 贵阳地区2010年夏秋季急性胃肠炎以诺如病毒GⅡ型为主,并且变异株具有多样性.     

汉坦病毒感染早期IRF-7及RANTES的表达

摘要：为检测汉坦病毒感染人淋巴细胞后人正常T 细胞表达分泌调节活化因子（RNATES）和干扰素调节因子-7（IFR-7）的情况,并为深入探讨其可能的致病机制奠定基础,本研究用汉滩病毒感染人淋巴细胞系LLC,取感染后不同时间点的细胞提取总RNA,半定量RT-PCR检测感染细胞中IFR-7及RANTES mRNA的变化情况。结果显示,在汉滩病毒感染人淋巴细胞早期,可诱导IRF-7和RNATES基因的转录,并随着感染时间的延长表达持续上调。上述结果说明,汉坦病毒可以感染人淋巴细胞,并在感染早期持续上调RNATES和IRF-7表达。这为进一步深入探讨汉坦病毒的致病机制和寻找HFRS的治疗药物靶位奠定基础。     

应用免疫荧光法检测华枝睾吸虫病特异性抗体的研究

用华枝睾吸虫成虫冰冻切片做抗原,以间接免疫荧光法检测了46份华枝睾吸虫病人血清中特异性IgG抗体。当血清1:10和1:20稀释时,阳性率分别为89.1%(41/46)和60.9%(28/46)。提示本法可能成为华枝睾吸虫病辅助诊断和流行病学调查的一种新方法。     

特异性单克隆抗体对肾综合征出血热病毒感染成年裸鼠保护作用的观察

研究证实抗肾综合征出血热病毒(HFRSV)血凝素单克隆抗体(McAb)对野鼠型HFRS病毒人工感染的小白鼠乳鼠有很好的保护作用。将McAb接种孕鼠后对新生子代乳鼠也可产生被动保护作用。本实验用该McAb对HFRS病毒攻击的成年裸鼠的保护作用进行了观察。     

抗HFRSV血凝素3G1单克隆抗体重链可变区基因的表达及初步鉴定

本文利用基因重组技术,在成功地克隆抗HFRSV血凝素抗原3G_1单抗重链可变区基因的基础上,对其在原核表达单域抗体进行了初步尝试。将3G_1单抗重链可变区基因亚克隆到原核高效表达质粒pBV220中,经转化E coli DH5a受体菌,42℃诱导6h后,在E、coli中有分子量约15kD的3G_1重链可变区基因产物表达。经测得表达产物占菌体总蛋白量的10％。IFA和ELTSA阻断试验表明,重组菌裂解上清对亲本鼠3G_1完整单抗与HFRSV抗原的结合有较明显的阻断作用。从而初步表明3G_1单抗重链可变区基因在E、coli DH5a中能表达有抗原结合活性的单域小抗体     

应用单克隆抗体治疗白血病和淋巴瘤

报告人讨论了单克隆抗体的临床试用研究和单克隆抗体结合物(免疫毒素)的实验室研究。主要讨论三方面的问题(1)注入抗T细胞或B细胞恶性肿瘤单克隆抗体的临床试用。(2)运用单克隆抗体体外消除自身骨髓移植的肿瘤细胞或同种异体骨髓移植时成熟的T细胞的临床试用。(3)评价免疫毒素在体外和在啮齿类及灵长类动物体内疗效的实验研究。     

重链可变区基因随机CDR3ScFv噬菌体抗体库的构建及筛选

目的构建VH 基因随机CDR3ScFv噬菌体抗体库 ,并筛选抗HFRS病毒NP抗原的噬菌体抗体。方法采用随机引物PCR法扩增抗HFRS病毒mAb1A8的VH 基因 ,并与1A8VL 基因共同克隆入噬菌粒表达载体 pHEN1后 ,构建VH 基因随机CDR3ScFv基因库。继用辅噬菌体VCSM13超感染后得到噬菌体抗体库 ,然后用HFRS病毒抗原进行筛选。随机挑取筛选的菌落超感染 ,用夹心ELISA检测超感染上清。结果获得库容量约为107 噬菌体抗体库。夹心ELISA的结果表明 ,筛选出的噬菌体抗体可与HFRS病毒NP抗原特异性结合。结论成功地构建了库容量较高的ScFv噬菌体抗体库 ,并获得可与HFRS病毒NP抗原结合的噬菌体抗体。     

抗汉滩病毒NP抗原mAb的ScFv-C_κ基因真核和原核表达载体的构建及鉴定

目的构建抗汉滩病毒HTNVNP抗原mAb的ScFvCκ基因原核和真核表达载体。方法将鼠源性抗HTNVmAb1A8的ScFv基因和人Cκ基因连接,分别克隆入原核表达载体pComb3和真核表达载体pCIneo中,并用间接免疫荧光和Westernblot检测其原核表达产物的活性。结果成功地构建了重组1A8ScFvCκ基因并克隆入原核和真核表达载体。间接免疫荧光和Westernblot分析表明,该基因在E.coliTG1中的表达产物可与HTNVNP抗原特异性结合。结论抗NP抗原mAb的ScFvCκ原核和真核表达载体的构建,为进一步研究细胞内抗体的功能奠定了基础。     

抗汉滩病毒 NP抗原 mAb的 ScFv－ Cκ基因真核和原核表达载体的构建及鉴定

目的构建抗汉滩病毒(HTNV)NP抗原mAb的ScFv-Cκ基因原核和真核表达载体。方法将鼠源性抗HTNVmAb1A8的ScFv基因和人Cκ基因连接,分别克隆入原核表达载体pComb3和真核表达载体pCI-neo中,并用间接免疫荧光和Western-blot检测其原核表达产物的活性。结果成功地构建了重组1A8-ScFv-Cκ基因并克隆入原核和真核表达载体。间接免疫荧光和Western-blot分析表明,该基因在E.coliTG1中的表达产物可与HTNVNP抗原特异性结合。结论抗NP抗原mAb的ScFv-Cκ原核和真核表达载体的构建,为进一步研究细胞内抗体的功能奠定了基础。