白藜芦醇对动脉粥样硬化兔血脂及血清中抗氧化酶水平的影响

目的：研究白藜芦醇对动脉粥样硬化（AS）兔血脂及血浆抗氧化酶水平以及对核因子‐κB（NF‐κB）、MAPKs信号通路的影响。方法将雄性纯种日本大耳白兔分为5组,对照组（A 组）,高脂模型组（B 组）,白藜芦醇干预组（C 、D 、E 组）。收集血样测定血脂总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL‐C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL‐C）水平及抗氧化酶谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽过氧化物（GSH‐PX）、谷胱甘肽硫基转移酶（GST ）、γ‐谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ‐GCS）、过氧化氢酶（CAT ）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平。蛋白质免疫印迹（Western blot）检测促分裂原活化蛋白激酶（MAPKs）、核因子‐κB （NF‐κB）蛋白表达。结果与 A 组相比,B 组血脂水平升高,抗氧化酶总体呈下降趋势,MDA 水平增加,MAPKs 、NF‐κB 蛋白磷酸化增强;C 、D 、E 组可减低血脂,升高 HDL‐C ,提高抗氧化酶活力,降低 MDA 水平,抑制 MAPKs 、NF‐κB 蛋白磷酸化。结论白藜芦醇可以降低 AS 兔的血脂水平,升高血清抗氧化酶活力,降低血清 MDA 水平,抑制 MAPKs 和 NF‐κB 信号通路的激活。     

白藜芦醇通过上调脂肪变性HepG2细胞Sirt3表达改善线粒体功能

目的 探讨白藜芦醇(resveratrol,RSV)对脂肪变性肝细胞线粒体功能的影响,以及沉默信息调节因子3(sirtuin 3,Sirt3)在其中的重要作用.方法 用0.2 mmol/L棕榈酸(palmitic acid,PA)处理HepG2细胞24 h建立肝细胞脂肪变性模型,再用40 μmol/L RSV和/或50 μmol/L Sirt3抑制剂3-TYP处理24 h.实验分为对照组、PA组、PA+ RSV组、PA+ RSV+ 3-TYP组、PA+ 3-TYP组.用相关试剂盒检测甘油三酯(TG)含量、沉默调节蛋白3(sirtuin 3,Sirt3)活性、ATP合酶活性、ATP生成量以及线粒体基础呼吸率,使用DCFH-DA荧光探针检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,Westernblot检测Sirt3蛋白表达.Sirt3 siRNA处理HepG2细胞后再用PA和/或RSV处理,分析ROS和甘油三酯含量.结果 相对于PA组,PA+RSV组HepG2细胞的甘油三酯、ROS含量明显降低(P＜0.05),ATP合酶活性、ATP生成量和基础呼吸率明显提高(P＜0.05).而3-TYP或Sirt3 siRNA处理后,RSV的上述作用被削弱(P＜0.05).结论 RSV通过上调脂肪变性肝细胞Sirt3的表达与活性而改善其线粒体功能.     

虎杖发酵液中白藜芦醇的分离纯化工艺研究

目的 分离纯化虎杖发酵液中的白藜芦醇。方法 利用大孔树脂结合聚酰胺柱色谱从虎杖发酵液的提取液中纯化白藜芦醇,并研究了大孔树脂和聚酰胺对白藜芦醇的吸附动力学 。结果 大孔树脂和聚酰胺对白藜芦醇的表观静态吸附量分别为11.70 mg/g和57.9 mg/g,表观动态吸附量分别为12.47 mg/g和58.98 mg/g,吸附行为符合Langmuir动力学。利用大孔树脂结合聚酰胺两步柱色谱纯化提取液中的白藜芦醇,使其纯度达到95.8%,总收率达69.8%。结论 此方法操作简单,成本低廉,白藜芦醇的纯度和收率高,有工业化应用前景。     

白藜芦醇对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用及其与Sirt1-p53通路的关系

目的 探讨白藜芦醇(resveratrol,RES)对大鼠肝脏缺血再灌注损伤(hepatic ischemia reperfusion injury,HIRI)的保护作用及其具体分子机制.方法 雄性6周龄SD大鼠20只[体质量(200 ±20)g]随机数字法分为4组(n=5):假手术组、缺血再灌注组、RES预处理组、RES预处理+抑制剂组.建立大鼠肝脏70％热缺血再灌注模型(缺血1h,再灌注6h),并提前1h给予RES及Sirt1抑制剂(EX527).建模后检测血清标本中ALT活力及肝组织SOD活性,HE染色观察肝组织病理损伤,TUNEL法检测肝细胞凋亡,实时荧光定量PCR和Western blot检测肝组织Sirt1、乙酰化p53、Bax表达水平.结果 RES能够显著降低由HIRI引起的ALT活力升高(P＜0.01)并增加SOD活性(P＜0.01),显著缓解由HIRI引起的肝脏病理学改变(P＜0.01)和减少肝细胞凋亡(P＜0.01),显著提高Sirt1和Bax mRNA表达水平(P＜0.01,P＜0.01),提高Sirt1和Bax蛋白表达水平(P＜0.01,P＜0.01)并降低乙酰化p53蛋白表达水平(P＜0.01).结论 RES能减轻缺血再灌注诱导的肝脏损伤,该保护作用部分是通过激动Sirt1-p53通路实现.     

白藜芦醇通过内质网应激抑制心肌细胞肥大及凋亡

目的探讨白藜芦醇（resveratrol,Res）通过内质网应激介导心肌细胞肥大的作用机制。方法利用异丙肾上腺素（isoproterenol,ISO）建立心肌细胞肥大模型,Res干预后通过检测心肌细胞表面积和ANP基因表达评价心肌细胞肥大程度;检测各组心肌细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性和丙二醛（MDA）含量变化和心肌细胞凋亡率,Real time-PCR检测心肌细胞ERS相关基因GRP 78和CHOP表达。结果与ISO组比较,Res显著抑制ISO诱导的心肌细胞肥大（P〈0.05）,降低肥大心肌细胞LDH和MDA释放量（P〈0.05）;下调GRP78和CHOP基因表达（P〈0.05）,并抑制心肌细胞凋亡率（P〈0.05）。结论 Res对ISO诱导的心肌细胞肥大和凋亡具有保护作用,其机制是通过抑制内质网应激和CHOP介导的凋亡通路实现的。     

白藜芦醇对人甲状腺乳头状癌IHH4细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察白藜芦醇对人甲状腺乳头状癌细胞(IHH4)增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的机制?方法:采用CCK-8法检测白藜芦醇对IHH4细胞增殖的影响;倒置显微镜?透射电镜?DAPI染色观察细胞的形态学变化;细胞免疫荧光和Western blot法检测细胞内cleaved caspase-3蛋白的表达;应用流式细胞技术(flow cytometry,FCM)观察细胞周期和凋亡的改变?结果:①白藜芦醇可以呈时间和浓度依赖性抑制IHH4细胞增殖;②与正常对照相比,加入白藜芦醇后IHH4细胞皱缩?变圆?脱落,细胞质中出现大小不等的空泡,胞质内容物增多;透射电镜下细胞核的染色质高度凝聚?边缘化;DAPI染色后荧光显微镜下观察,细胞核呈致密浓染;③细胞免疫荧光和Western blot显示,随着白藜芦醇作用浓度和时间的增加cleaved caspase-3蛋白的表达明显增加;④流式Annexin V-FITC/PI双染检测显示白藜芦醇呈浓度依赖性诱导IHH4细胞凋亡?白藜芦醇可引起细胞S期阻滞?结论:白藜芦醇可抑制人甲状腺乳头状癌IHH4细胞增殖,诱导IHH4细胞凋亡?白藜芦醇阻滞细胞于S期,可能是抑制IHH4细胞增殖?促使其凋亡的原因之一?     

波叶大黄根茎中的云杉鞣酚通过激活BK_(Ca)通道产生血管舒张作用

云杉鞣酚是一种天然存在的白藜芦醇类似物,含有该化合物的波叶大黄 Rheum undulatum L.提取物已广泛用于治疗血瘀症和用作通便剂。云杉鞣酚对大鼠离体主动脉显示血管舒张作用,强度是白藜芦醇的10倍,但作用机制不清。因此采用离体大鼠胸主动脉环灌流模型,研究了波叶大黄根茎中云     

Caveolin-3在白藜芦醇改善高脂诱导骨骼肌胰岛素抵抗中的作用

 【目的】在高脂诱导的胰岛素抵抗大鼠模型上,探讨微囊蛋白3（CAV-3）在白藜芦醇改善骨骼肌胰岛素抵抗中的作用及机制。【方法】实验大鼠分三组:正常饮食组（NORM）,高脂饮食组（HFD）,高脂饮食加白藜芦醇干预组（HFD+ RSV）。通过腹腔糖耐量试验,空腹血糖和空腹血清胰岛素值以及2-脱氧-[3H] 葡萄糖的摄取,从整体上探讨白藜芦醇对胰岛素抵抗的保护作用。再通过免疫印迹检验微囊蛋白3(CAV-3)与葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）在以上过程中的表达情况。【结果】HFD能显著诱导胰岛素抵抗,补充RSV能抑制高脂的诱导作用。离体骨骼肌实验证实,RSV的保护作用与其促进胰岛素诱导的葡萄糖摄取有关。免疫印迹证实RSV能够增加骨骼肌CAV-3蛋白表达,促进GLUT4向细胞膜的转运。【结论】白藜芦醇能改善高脂诱导的胰岛素抵抗,其保护作用与其上调CAV-3蛋白表达,促进GLUT4向细胞膜转运,改善骨骼肌葡萄糖的摄取有关。     

白藜芦醇对裸鼠胃癌移植瘤中PDCD5蛋白表达及细胞凋亡的影响

目的探讨白藜芦醇(Res)对裸鼠胃癌移植瘤细胞凋亡相关基因PDCD5蛋白表达及细胞凋亡的影响。方法将BGC-823细胞复苏后,通过右前肢腋部皮下移植构建裸鼠胃癌移植瘤模型。建模成功后的荷瘤裸鼠随机分为空白对照组、Res组、顺铂组和联合用药组(白藜芦醇+顺铂),各组分别在成瘤部位皮下注射0.2ml相应的药物,每日1次,治疗1周。停药后将裸鼠处死,剥离肿瘤组织。采用免疫组织化学方法检测移植瘤组织中PDCD5蛋白表达,采用原位末端标记法(TUNEL)检测移植瘤组织中细胞凋亡情况。结果 Res组中PDCD5蛋白表达水平明显高于空白对照组,但低于顺铂组和联合用药组,上述各组两两相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。TUNEL法检测到胃癌移植瘤中凋亡细胞核呈棕褐色,染色深浅不一,染色质分布不均,空白对照组中仅见到少数凋亡细胞,Res组、顺铂组和联合用药组凋亡细胞数依次增加,上述各组两两相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论白藜芦醇可上调裸鼠胃癌移植瘤细胞中PDCD5的蛋白表达,表明其可能通过上调PDCD5的表达进而诱导细胞凋亡。     

白藜芦醇对缺氧诱导神经元凋亡的影响

目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,RES)对缺氧(hypoxia)诱导神经元凋亡的影响。方法:原代培养小鼠皮层神经元,置于2%O2,5%CO2和93%N2,37℃培养箱中培养12 h建立缺氧模型,采用DCFH-DA和显微荧光成像系统检测神经元活性氧(Reactive oxygen species,ROS)含量;碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)和Hoechst 33342染色检测神经元凋亡。结果:RES预处理60 min后再缺氧12 h,ROS含量和神经元凋亡率均显著低于缺氧组(P<0.01,N=3),且使用1 mM活性氧清除剂(N-acetyl-L-cysteine,NAC)也降低缺氧诱导的神经元凋亡率(P<0.01,N=6)。结论:RES抑制缺氧诱导皮层神经元凋亡,此作用可能与RES抑制缺氧所致神经元ROS增多有关。