ADAM28基因原核表达载体的构建和在大肠杆菌中的融合表达

目的:利用消减杂交技术克隆出牙齿发育相关基因ADAM28。方法:本研究为构建ADAM28基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导其表达并纯化出ADAM28蛋白;采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增出ADAM28基因的蛋白编码序列,克隆到中间载体pMD18-TVector中产生pMD18-T-ADAM28,再经双酶切得到ADAM28片段定向克隆到pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-ADAM28;在大肠杆菌中利用IPTG进行诱导表达,得到GST-ADAM28融合蛋白,并经SDS-PAGE电泳初步纯化。结果:①成功构建融合表达载体pGEX-4T-ADAM28,并经酶切鉴定、PCR鉴定和测序验证显示插入的ADAM28序列正确,阅读框架完整,未发现突变。②得到初步纯化的GST-ADAM28融合蛋白。经IPTG诱导后出现一条约35.3×103的新蛋白带。结论:ADAM28基因编码蛋白质能够在原核细胞中表达并纯化,为进一步研究该蛋白质的功能打下基础。     

牙冠延长术的疗效及影响因素分析

目的 观察牙冠延长术的疗效及影响手术成功的因素,探讨牙冠延长术的适应证。方法 对27颗患牙行牙冠延长术,依手术完成情况分为满意组和姑息组,比较其术前条件、术后4-6周效果,观察在修复后即刻、术后3、6个月的效果及(?)力值。结果 满意组患牙去骨后骨嵴顶至牙断端距离≥4 mm,100％的手术患牙和位点得以暴露。姑息组患牙术前均有位于龈下4-5 mm的位点,去骨后骨嵴顶至牙断端距离<3 mm,术后有29％的手术患牙和16％的位点仍位于龈下,71％(12/17)的患牙术后出现松动,修复后功能恢复不如满意组(P<0.05)。结论 术中暴露4 mm牙体结构,才能获得满意的疗效;患牙断端若位于龈下4-5 mm且有不利的解剖因素等,则不是牙冠延长术的良好适应证。     

牙齿发育相关基因adam28多克隆抗体的制备及鉴定

目的制备及鉴定抗ADAM28的多克隆抗体。方法采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增出adam28基因的蛋白编码区序列,克隆到中间载体pMD18-T Vector中,再经双酶切得到adam28片段定向克隆到pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-adam28,在大肠杆菌中用IPTG进行诱导表达,得到GST-ADAM28融合蛋白,经过初步纯化及SDS-PAGE电泳,在35300的新蛋白带处直接割胶,作为抗原免疫新西兰大白兔后获取抗体。结果成功构建融合表达载体pGEX-4T-adam28,得到初步纯化的GST-ADAM28融合蛋白,免疫兔子1个月后,获得免疫血清,盐析法纯化得到多克隆抗体。Western印迹结果显示所得到的抗体具有较高的特异性,ELISA分析证实其效价可达1∶16000。结论成功制备出高效价的抗ADAM28多克隆抗体,为进一步研究ADAM28在牙齿发育中的作用和表达分布奠定基础。     

牙髓干细胞向成牙本质样细胞分化过程中基因表达研究

目的：分离培养来源于人成体牙髓组织的干细胞(dental pulp stem cells，DPSC)，分析研究其在未分化状态及在矿化诱导液中基因表型的变化：方法：采用胶原酶消化法获得人牙髓组织的单细胞悬液，14 d后挑取细胞克隆，分别在普通培养基和矿化诱导培养基中进行培养，利用RT-PCR，图像分析检测细胞基因表型变化。结果。未诱导的DPSC不表达牙本质特异性蛋白(dentin phosphprotein,DSPP)及骨涎蛋白(Bone sialoprotein，BSP)，表达部分成骨(osteocalcin,OCN alkaline phsphatase,ALP)相关表型，低表达转录因子核心结合因子(Cbfa-1)；与末诱导的DPSCs相比较，在成骨诱导中DPSCs表达DSPP和BSP，骨相关基因表达也相应上调。结论：DPsCs在矿化诱导液的作用下向成牙本质样细胞分化，其过程有可能是通过谱系特异表犁的表达或表达上调实现的。     

用米诺环素处理病变牙骨质的体外效果

目的 用盐酸米诺环素处理牙周炎患牙的牙骨质，观察其表面结构和牙周膜细胞在其上附着的影响。方法 选暴露于牙周袋的根面，制备成牙骨质片，实验组用2.5%盐酸米诺环素液涂擦，对照组用生理盐水。用扫描电镜观察不同处理后，根面牙骨质的超微结构及牙周膜细胞在不同处理根面上附着生长的情况。结果 盐酸米诺环素处理后的根面，无玷污层，有胶原纤维暴露；牙周膜细胞在其上的伸展和生长优于对照组，结论 盐酸米诺环素处理可使病变牙骨质胶原纤维暴露；牙周膜细胞在其上的伸展和生长优于对照组。结论 盐酸米诺环素处理可使病变牙骨质胶原纤维暴露，促进牙周膜细胞在根面上的伸展和生长。     

三种固定液对角蛋白反应的影响

本研究对13例人的正常涎腺经三种固定双固定后的组织标本进行了11种角蛋白单克隆抗体的免疫组化染色.其中5例腮腺和3例颌下腺分别同时用常规Formalin固定,Bouin’s液固定,Carnoy‘s液固定.染色采用ABC法,结果发现:Carnoy固定者,K_8、K_18、K_19和K_8.12的染色效果最好.其导管染色比Bouin‘s和Formalin固定者染色强而明确,尤其K_8和K_8.12不仅在导管中呈现强阳性,而且腺泡也呈阳性;而K_(17)和K_(L1)没有看出明显的染色差别;K_(14)、K_(10)、K_(13)、K_(17)、K_(20)的染色几乎全为阴性,与常规中性缓冲Formalin固定者结果一致.     

下颌骨成釉细胞瘤节段性切除后立即行游离组织瓣修复术的远期效果评价

本研究旨在评估下颌骨成釉细胞瘤患者行节段性切除后立即游离瓣修复后的远期功能及外形效果。     

大鼠磨牙牙根发育相关基因mrp1的克隆及其原核表达载体的构建

目的:从大鼠磨牙胚组织中克隆大鼠磨牙牙根发育相关基因mrp1,构建原核融合表达载体,利用大肠杆菌表达其C端肽。方法:从生后 3dSD大鼠仔鼠磨牙胚中提取总mRNA,通过RT-PCR扩增出mrp1C端肽段基因并克隆进中间载体,然后将插入基因克隆入GST融合表达载体pGEX-4T-1,以大肠杆菌DH5α为宿主菌,在 28℃下进行IPTG诱导。结果:克隆载体序列酶切鉴定、序列测定完全正确;含重组质粒的工程菌经诱导后在SDS-PAGE上出现一条新生蛋白带,Mr为 36×103,与预期C端肽Mr大小一致,约占菌体总蛋白的 19%。结论:成功地鉴定了mrp1C端肽段基因,通过基因克隆构建了其原核表达载体pGEX-4T-mrp1,并在大肠杆菌中得到了高效表达。     

利多卡因过敏致呼吸心跳骤停抢救成功1例

患者 ,女 ,17岁。右下颌骨含牙囊肿 ,拟行手术治疗。术中以 2 %利多卡因 15ｍｌ行右下齿槽神经、舌神经、颊神经阻滞麻醉 ,3ｍｉｎ后起效。切开皮肤时 ,患者突然出现呼吸急促、烦躁、呼叫无应答、脉膊扪不清 ,随后出现呼吸困难、手足抽搐、双眼上翻、瞳孔散大、口唇紫绀、意识丧失。迅速建立静脉通道 ,并请麻醉科紧急会诊。诊断为利多卡因过敏致呼吸心跳骤停。即刻给予面罩吸氧 ,胸外心脏按压 ,静脉注射肾上腺素 1ｍｇ ,2ｍｉｎ后行气管插管 ,同时给予心电监护、血气分析。 5ｍｉｎ后心跳恢复 ,心率 14 8次 /ｍｉｎ ,先后给予西地兰 0 .4ｍ…