CDDO-me缓解阿霉素诱导肾小球足细胞损伤

目的探究Nrf2激动剂CDDO-me是否能缓解阿霉素诱导肾小球足细胞损伤。方法 30只8～12周雄性Balb/c小鼠随机分5组:对照组、CDDO-me组、阿霉素组(ADR)、阿霉素+CDDO-me组、阿霉素+奥美沙坦阳性对照组。测定小鼠尿蛋白/肌酐比值,PAS染色观察肾脏病理改变,免疫荧光检测足细胞标志蛋白WT-1,Nephrin的表达水平来观察各组间小鼠肾脏足细胞损伤情况以及CDDO-me对肾脏的保护作用,应用免疫印记对肾组织WT-1与Nephrin进行定量分析。结果与正常对照组相比,ADR组尿蛋白/肌酐比值显著升高,PAS染色发现肾小球系膜基质及系膜增生,部分足细胞脱落,球囊黏连,荧光可见足细胞标志蛋白表达下降.与阿霉素组相比,阿霉素+CDDO-me组小鼠尿蛋白/肌酐比值下降,足细胞脱落减少,肾脏损伤减轻。结论 CDDO-me保护阿霉素诱导肾脏损伤。     

燃煤型氟中毒大鼠诱导型一氧化氮合酶蛋白表达、血清睾酮与生精细胞凋亡的相关性研究

目的:研究燃煤型氟中毒大鼠睾丸组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达、血清睾酮(T)与生精细胞凋亡的相互关系,探索燃煤型氟中毒对睾丸生殖功能损伤的机制。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为4组:对照组、低氟组、中氟组、高氟组。各染毒组喂饲含不同比例的燃煤型氟中毒病区煤烘玉米的饲料,建立雄性大鼠燃煤型氟中毒模型。分别于染毒4和6个月后以股动脉放血法处死大鼠,各时间点每组处死大鼠5只。采用RIA法测定大鼠血清T水平;检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量、iNOS活性;原位缺口末端标记(TUNEL)法检测大鼠睾丸生精细胞凋亡情况并计算凋亡指数(AI);免疫组织化学染色SP法观察iNOS蛋白表达的变化。结果:成功建立雄性大鼠氟中毒模型。大鼠血清T水平在4和6个月时低氟组[(28.37±0.19)nmol/L、(14.68±0.36)nmol/L]、中氟组[(25.85±0.23)nmol/L、(9.08±0.31)nmol/L]、高氟组[(23.63±0.29)nmol/L、(4.89±0.54)nmol/L]较对照组[(29.77±0.43)nmol/L、(29.97±0.36)nmol/L]均降低(P0.05或P0.01),且各染氟组间差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。睾丸生精细胞AI在4和6个月时低氟组(8.83±1.64、10.40±2.70)、中氟组(17.24±3.96、22.20±3.96)、高氟组(44.21±7.85、49.60±4.77)较对照组(0.46±0.11、0.54±0.11)升高(P均0.01),且各染氟组间差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。睾丸组织iNOS蛋白表达的OD值在4和6个月时低氟组(0.073 3±0.008 5、0.108 4±0.012 6)、中氟组(0.142 5±0.027 2、0.207 7±0.020 4)、高氟组(0.527 5±0.079 1、0.717 3±0.065 6)较对照组(0.001 3±0.000 2、0.001 6±0.000 1)增加(P0.05或0.01),且各染氟组间差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。iNOS蛋白表达量与生精细胞AI呈正相关(r=0.962,P0.01);血清T水平与生精细胞AI呈负相关(r=-0.744,P0.01)。结论:血清T水平改变和睾丸组织iNOS蛋白表达调控改变可能参与燃煤型氟中毒对睾丸生殖功能损害的过程。     

脂多糖对雄性大鼠睾丸组织病理学和生殖内分泌功能的影响

目的:研究脂多糖诱导的炎症对雄性大鼠睾丸组织病理学和生殖内分泌功能的影响,初步探讨炎症影响雄性生育的可能机制。方法:36只雄性SD大鼠(400~450g)随机分为4组,每组9只。对照组(A组)大鼠腹膜内注射无菌生理盐水,余下3组大鼠腹膜内注射脂多糖(LPS,5 mg/kg,溶于无菌生理盐水中),分别于注药12 h(B组)、24 h(C组)和72 h(D组)后麻醉处死。取各组大鼠左侧睾丸,制成组织切片,HE染色,镜下观察睾丸组织病理学改变;取各组大鼠血清进行血清睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)含量检测。结果:①大鼠睾丸组织HE染色显示:与A组相比,B组大鼠睾丸生精小管结构清晰,各级生精细胞排列整齐,部分生精小管管腔内精子数目有所减少,并可见脱落的生精细胞;C组大鼠睾丸生精上皮变薄,生精小管结构较紊乱、不规则,各级生精细胞减少且排列不整齐,生精小管管腔内成熟精子数目减少,并可见脱落的生精细胞;D组大鼠睾丸生精上皮变薄,生精小管结构紊乱、不规则,各级生精细胞明显减少且层次紊乱,生精小管管腔内成熟精子数目减少,可见较多生精细胞脱落并阻塞管腔。②各组大鼠血清T、LH、FSH含量,A组T为(0.490±0.028)ng/ml,LH为(6.290±0.515)ng/L,FSH为(1.837±0.127)IU/L;B组T为(0.460±0.024)ng/ml,LH为(5.881±0.124)ng/L,FSH为(1.707±0.098)IU/L;C组T为(0.417±0.021)ng/ml,LH为(5.123±0.271)ng/L,FSH为(1.620±0.115)IU/L;D组T为(0.378±0.021)ng/ml,LH为(4.504±0.279)ng/L,FSH为(1.562±0.216)IU/L;与A组相比,B组大鼠血清T、LH和FSH含量均降低,但无统计学差异(P0.05);C、D组大鼠血清T和LH明显降低(P0.01),FSH降低,有统计学差异(P0.05)。结论:脂多糖(5 mg/kg)腹膜内注射诱导炎症可损害雄性大鼠睾丸组织,并影响大鼠生殖内分泌功能,导致血清T、LH和FSH含量降低,可能影响雄性生育。     

胆碱能抗炎通路对失血性休克大鼠保护作用的研究

目的探讨胆碱能抗炎通路的抗休克作用及其可能的机制。方法采用改良Wiggers法复制失 血性休克动物模型。30只成年雄性SD大鼠随机分为假失血组(假Hem组)、失血性休克组(Hem组)、迷走神 经切断组(VGX组)、迷走神经电刺激组(STM组)、胆碱酯酶抑制组(THA组)和N受体拮抗组(α-BGT 组)。将左迷走神经远端连接刺激电极,于制模成功后即刻行电刺激(5 V、2 ins、1 Hz)12 min。颈总动脉置管连 续监测平均动脉压(MAP),模型稳定后45 min测定各组动物血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和肝组织核因 子-kB(NF-kB)含量。结果失血性休克动物的MAP持续处于低水平状态。与假Hem组比较。Hem组血浆 TNF-α含量明显升高(P<0.01).肝组织NF-kB表达明显增强。迷走神经电刺激组动物MAP迅速升高,血 浆TNF-α含量较Hem组显著降低(P均<0.01),肝组织NF-kB表达减弱。迷走神经离断后静脉注射胆碱 醣酶抑制剂四氢氨基丫啶(THA)可产生与电刺激迷走神经类似的作用。但电刺激前静脉注射N胆碱能受体 α7亚单位阻断剂(α-BGT),则可消除电刺激迷走神经的抗休克效应。结论 胆碱能抗炎通路具有潜在的抗失 血性休克作用,其机制可能是通过抑制休克病程中过度的全身性炎性反应而实现的。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨"理气化湿方"对接种胃癌MGC-803细胞裸鼠肿瘤组织关键因子β-catenin、Wnt3a、Lgr5+表达的影响

目的:观察理气化湿方对皮下接种胃癌MGC-803细胞裸鼠肿瘤组织的干预作用及其对瘤体β-catenin、Wnt3a、Lgr5+基因和蛋白表达的影响.方法:将胃癌MGC-803细胞接种于健康雄性裸鼠腋下,成瘤后将裸鼠随机分为模型组、胃复春组(0.56?g/kg)和理气化湿方低、中、高剂量(3.9、7.8、15.6?g/kg)组,每组7只.各组分别灌胃给予相应药物或生理盐水,每日1次,共灌胃4周.灌胃结束后处死所有裸鼠,取肿瘤组织,切片、染色,显微镜下观察病理组织学改变.另一部分肿瘤组织应用RT-PCR法、Western?Blot法检测β-catenin、Wnt3a、Lgr5+基因和蛋白的表达情况.结果:模型组肿瘤组织细胞大小形态不一,核浆比例增大,核分裂明显,个别腺体呈共壁现象或囊状扩张;理气化湿方中、高剂量组肿瘤组织细胞形态较均匀,固有腺体排列整齐紧密,偶有淋巴细胞浸润,腺上皮和腺管分界清楚.与模型组比较,各给药组肿瘤组织β-catenin、Wnt3a、Lgr5+基因与蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),其中理气化湿方中、高剂量组上述基因与蛋白表达水平明显低于胃复春组(P<0.05),而中、高剂量组组间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:理气化湿方可通过抑制β-catenin、Wnt3a、Lgr5+增殖,调控Wnt/β-catenin信号通路的异常活化,从而改善瘤体的病理状态、分化程度.     

大黄素对家兔离体主动脉平滑肌细胞增殖影响的可能途径

目的：探讨大黄素干预对家兔离体血管平滑肌细胞增殖的作用，并观察其浓度效应剂量。方法：实验于2004—06／12在第三军医大学西南医院药学部完成。选择雄性家兔1只作为动脉平滑肌细胞的动物来源，采用组织贴块法进行主动脉平滑肌细胞的培养。细胞培养成功后分2组：对照组和大黄素组。对照组不加药，大黄素组按剂量分为5个亚组即1．25，2、5，5，10，20mg／L组，每组6孔。选用生长良好的第三四代细胞，加^3H-标记的胸腺脱氧核苷酸行液闪计数以表征细胞增殖的程度，细胞增殖测定采用酶标仪上比色（波长为570nm）用吸光度值表示。超过氧化物歧化酶测定采用邻苯三酚自氧化抑制法，直接以每毫升培养液中超过氧化物歧化酶kat表示。脂质过氧化物测定采用改良TBA微量法，以脂质过氧化物的稳定终产物丙二醛浓度（nmol／L）表示。实验结果采用单因素方差分析（方差齐性检验），用SNK法进行均数之间的显著性检验。结果：①大黄素对细胞增殖的影响：随着大黄素剂量的增加，吸光度值逐渐减少，抑制率逐渐增高。大黄素5，10，20mg／L剂量组的吸光度值明显低于对照组（0．594&;#177;0．037，0．410&;#177;0．014，0．301&;#177;0．024，0．730&;#177;0.041，P〈0.05）。②大黄素对胸腺嘧啶脱氧核苷酸掺人量的影响：随着大黄素剂量的增加，胸腺嘧啶脱氧核苷酸掺人量逐渐减少，抑制率逐渐增高。大黄素5，10，20mg／L剂量组每分液闪计数值明显低于对照组大黄素（33537&;#177;3713．29304&;#177;4336，21155&;#177;1938，73958&;#177;2276，t=5．862，7．330．18．688，P〈0．05）。③大黄素对超过氧化物歧化酶的影响：大黄素剂量1．25，2．5mg／L剂量组，超过氧化物歧化酶高于对照组，但差异不显著（P〉0．05）。5，10，20mg／L剂量组明显高于对照组[（118．19&;#177;3．56），（127．48&;#177;4．59）．（140．23&;#177;4．96），（100．16&;#177;9．83）kat／L，t=4．224．6．170．8．914，P〈0．051。④对丙二醛含量变化的影响：随着大黄素剂量的增加，其水平逐渐减少，当大黄素剂量为5，10，20mg／L时与对照组相比显著减低[（2．336&;#177;0．113），（1．945&;#177;0．135），（1．381&;#177;0．193），（3．110&;#177;0．256）nmol／L，t=6．774，9．857，13．187．P〈0．051。结论：随着培养液中大黄素浓度的增加，超过氧化物歧化酶活性逐渐增强，同时丙二醛水平逐渐降低，从而抑制血管平滑肌细胞的增殖此，此作用均从5mg／L剂量组开始，并具有浓度依赖性。     

高血压左室肥厚时细胞间黏附分子-1在心肌中的表达及其作用

目的　研究高血压左室肥厚时心肌细胞间黏附分子 - 1(ICAM - 1)的表达及其作用。方法　8周龄雄性Wistar-Kyoto (WKY)大鼠和自发性高血压大鼠 (SHR)共 30只 ,分为对照组、高血压组Ⅰ、高血压组Ⅱ ,分别在 2 4、 12、 2 4周龄处死大鼠 ,留取心肌标本进行苏木素 -伊红 (HE)和VanGieson (VG)染色 ,观察心肌细胞形态和胶原分布情况 ;免疫组化染色及ED1标记显示心肌巨噬细胞浸润 ;逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)检测心肌ICAM - 1的mRNA表达 ;酶链免疫吸附实验 (ELISA)检测ICAM - 1的蛋白表达。结果　与WKY大鼠及 12周龄SHR比较 ,2 4周龄SHR存在明显的心肌细胞肥大和间质纤维化 ,心肌ICAM - 1的mRNA和蛋白表达水平及巨噬细胞浸润显著增加 (P <0 0 1,P <0 0 1,P <0 0 1) ;12周龄SHR与WKY大鼠在心肌病理学改变、ICAM - 1表达及巨噬细胞浸润等方面无明显差异。结论　心肌ICAM- 1过度表达及其介导的炎性细胞浸润可能参与了高血压左室肥厚的发病过程     

Toll样受体2及Toll样受体4在大鼠实验性变应性鼻炎中的表达

目的 采用动物攻击性行为指标评估实验动物玩具对小鼠福利的影响.方法 60 只 BALB/c雄性小鼠随机分为实验组与对照组,每组 30 只,实验组放置动物玩具,对照组不放置,在 7d 内每天观察记录小鼠受到攻击的伤害程度和攻击数,分析比较第 4、7 天小鼠受到攻击的伤害程度及攻击数,计算第 4、7 天实验组相对对照组的攻击风险系数.结果 第4 、7 天实验组和对照组分别有10%(3/30)、30%(9/30)的小鼠在尾巴、耳朵、身体背部受到不同程度的伤害.第4、7天对照组小鼠受到的攻击风险系数分别是实验组的2.8倍和3.9倍.结论 实验动物玩具对小鼠攻击性行为引起的伤害具有一定的防范效果.     

穿山龙水溶性总皂苷对实验性桥本甲状腺炎大鼠Th1/Th2型细胞因子表达的影响

目的:探讨穿山龙水溶性总皂苷对实验性桥本甲状腺炎大鼠的可能作用机制。方法:将40只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组和穿山龙低、中、高剂量组,每组8只,除正常组外其余各组采用猪甲状腺球蛋白与弗氏完全佐剂和弗式不完全佐剂皮下注射6周诱导桥本甲状腺炎动物模型。造模后穿山龙低、中、高剂量组分别给予穿山龙水溶性总皂苷60、120、240mg/(kg·d)灌胃,每日1次,共8周;正常组及模型组给予等量蒸馏水灌胃。检测各组大鼠血清甲状腺球蛋白抗体(Tg Ab)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠Tg Ab、TPOAb、IL-2水平明显升高,IL-4水平明显降低(P0.05);与模型组比较,穿山龙低、中、高剂量组大鼠Tg Ab、Tg Ab水平明显降低,IL-4水平明显升高(P0.05)。结论:穿山龙水溶性总皂苷能降低甲状腺自身抗体,其可能通过降低IL-2的表达、升高IL-4的表达而调节Th1/Th2的失衡。