腺病毒/重组腺相关病毒杂合体病毒的构建

目的:探讨解决RNA干扰(RNAi)抗HBV作用时间短暂的问题.方法:构建腺病毒/重组腺相关病毒(Ad/rAAv)杂合体病毒,恢复rAAv的定点整合,并借助定点整合的rAAV持续表达shRNA(shon hepairRNA),实现RNAi抗HBV的持久性.结果:经酶切和测序鉴定,各目的基因片段均成功克隆入穿梭质粒中pAd/rAAv酶切鉴定表明同源重组成功,病毒包装与滴度测定结果表明,Ad/rAAV杂合体痛毒包装成功.结论:利用Ad、AAV和HBV各种元件的特点,彼此互补,克服其不足,构建Ad/rAAV杂合体病毒,作为抗HBV的shRNA表达框的载体,为解决RNAi抗HBV作用时间短暂的问题作了一些技术上的探索.     

抗乙型肝炎病毒分子治疗新策略

乙型肝炎病毒（HBV）复制受到病毒与病毒之间以及病毒与宿主之间复杂的相互作用[1],对病毒成分的物理性破坏、功能的损伤或阻止其相互作用,都可能影响病毒的增殖。根据近年来对HBV包装、逆转录及成熟过程的认识,下面将讨论一些有潜力的抗HBV策略。一、物理或功能性破坏病毒成分HBV的每一基因产物对HBV的复制都十分重要,因此,每一个转录或翻译产物都可作为潜在的靶作用对象。1. 细胞内抗体抑制HBV蛋白的功能：针对病毒蛋白,抗体与之结合最为特异,抗体在细胞外能与抗原特异性作用,在细胞内也同样能形成抗原与抗体复合物发挥作…     

丙型肝炎患者外周B淋巴细胞系及HCV的形态学研究

研究ＨＣＶ对人Ｂ淋巴细胞的感染 ,建立ＨＣＶ感染的丙型肝炎患者Ｂ淋巴细胞模型 (ＣＢＣＬ) ,并进行ＨＣＶ的形态学研究 ,观察ＨＣＶ在其中的复制及ＨＣＶ形态学及超微结构。用ＥＢ病毒转化Ｂ细胞建立Ｂ细胞系 ,以逆转录聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)、免疫组织化学、原位杂交方法检测Ｂ细胞系上清液及细胞内的ＨＣＶ抗原及ＨＣＶＲＮＡ ,并通过电镜对ＨＣＶ进行形态学研究。用ＥＢ病毒转化丙型肝炎患者Ｂ淋巴细胞传代培养 ,使其成为永生细胞系。用抗ＨＣＶ ＮＳ3、ＮＳ5、ＣＯＲＥ单克隆抗体检测ＣＢＣＬ中ＨＣＶ抗原 ,发现阳性颗粒主要见于…     

携带免疫刺激DNA序列的载体及人工合成免疫刺激DNA对HBV核心区基因免疫的影响

为慢性ＨＢＶ感染的防治寻求新的高效基因免疫策略。分别构建携带免疫刺激ＤＮＡ序列及不携带免疫刺激ＤＮＡ的ＨＢＶ核心区基因真核表达载体 ,并人工合成免疫刺激ＤＮＡ寡核苷酸 ,分组免疫Ｂａｌｂ/ｃ小鼠 :( 1)Ｖ ＨＢｃ ＣｐＧＯＤＮ组 ;( 2 )Ｖ ＨＢｃ 非ＣｐＧＯＤＮ对照组 ;( 3)Ｖ ＨＢｃ/ＣｐＧ。观察各组小鼠体液免疫应答及细胞免疫应答。结果表明 ,3组免疫鼠血清ＨＢＶ抗体均阳性 ,体外ＣＴＬ活力检测 3组小鼠脾细胞对转染ｐＲＳＣ ＨＢＶ的ＳＰ2 / 0细胞的细胞毒活性明显高于其他组 (Ｐ <0 .0 5) ,荷瘤试验显示第 3组免疫小鼠注…     

HBV核心蛋白结构与功能及其在基因治疗策略上的应用

核心蛋白对乙型肝炎病毒(HBV)复制过程起关键的作用。近年来对HBV核心蛋白(HBc)单体及其形成的核壳结构与功能有了深入的认识,HBc基因特定部位中插入外源基因后,其产物在细胞内仍能正确地折叠和自身装配,因而有可能在细胞内表达假HBc并掺人240个野生型HBc后,共同形成核壳结构,抑制其功能的发挥,干扰HBV复制。本文就HBc结构与功能区域的基础生物学及其在基因治疗策略上的应用进展作了综述。     

HGV/GBV-C与HCV混合感染者肝组织中相关病毒抗原表达

庚型肝炎病毒(HGV/GBV-C)的致病性是目前研究焦点之一,多数研究表明大多数HGV/GBV-C感染者体内常有两种或两种以上的肝炎病毒混合感染,并认为HGV/GBV-C感染对原有乙型肝炎病毒(HBV)或丙型肝炎病毒(HCV)感染的基础病变似无明显影响[1-3].但仅从血清学、临床表现及常规病理角度试图说明HGV/GBV-C对机体有无损害的研究工作是很困难,我们应用免疫组织化学技术对HGV/GBV-C与HCV混合感染者肝组织中HGV/GBV-C.HCV相关抗原表达进行研究,试图从免疫病理学角度探讨HGV/GBV-C对机体肝脏的致病性.     

射频毁损治疗肝脏肿瘤

肝脏肿瘤包括肝原发性肿瘤和肝转移瘤,其治疗目前仍首选手术切除,但确诊时85％～95％的患者已失去手术切除时机,对难以手术治疗的患者已有多种介入治疗方法,如肝动脉栓塞化疗(TAE)、经皮无水酒精注射、微波、激光、冷冻、高功率超声聚焦等。射频毁损(radiofrequency ablation,RFA)是近年国外刚用于肝脏肿瘤治疗的新技术,具有安全性高、并发症少、患者易耐受、肿瘤复发可重复治疗等优点,具有良好的应用前景。 1 射频治疗仪及治疗机制 1868年法国的d'Arsonval发现高于10KHz的高变电流通过活体组织时,并不引起神经肌肉的应激,但局部产热造成组织毁损,自此射频毁损术在神经及心血管领域得以应用并     

地高辛素标记探针原位杂交法检测肝组织中庚型肝炎病毒RNA

目的自从建立起甲、乙、丙、丁、戊5种肝炎病毒的病原学诊断之后,仍有少部分肝炎患者的病因得不到明确,因此不少学者试图探索是否还有新型肝炎病毒的存在,并进行了大量的流行病学和实验诊断的研究,认为的确存在可经肠道外传播并引起人类肝炎的致病因子.目前关于庚型肝炎病毒(HGV/GBV-C)的致病性和组织嗜性尚无结论性资料.本文目的是研究HGV/GBV-C RNA在肝组织中表达并进一步探讨HGV/GBV-C引起肝脏损害的可能机制.方法应用地高辛素标记HGV/GBV-C cDNA探针原位杂交法检测肝组织中庚型肝炎病毒RNA.结果检测196例肝炎患者肝组织切片中的HGV/GBV-CRNA阳性率为37.24%;在血清中HGV/GBV-CRNA呈阳性患者肝组织中该病毒RNA检出率为48.94%;单一HGV/GBV-C感染者肝组织中检出率为58.33%;阳性信号仅为胞质型.原位杂交信号阳性细胞与肝细胞变性、瘀胆、炎性细胞浸润及细胞坏死程度等并不相关.本文原位杂交与免疫组化两种检测方法对比研究结果表明,两项技术有较高的符合率(86.74%),说明这两项技术具有相辅相成的作用.结论提示HGV/GBV-CRNA并不直接损害肝细胞.原位杂交和免疫组化两项技术成功地应用于石蜡包埋切片,为回顾性研究HGV/GBV-C的致病性及致病机制提供了有价值的实验手段.