OPG与MBP融合蛋白在大肠杆菌中的表达

目的 克隆人骨保护素（OPG）成熟肽段编码区基因，并在大肠杆菌中表达。方法 采用RT－PCR法，扩增人OPG成熟肽段编码区cDNA，并克隆入原核表达载体pMAL-c2x中，转化BL21（DE3）PlysS大肠杆菌感受态细胞，经0.1mmol/L IPTG诱导后，收集菌体蛋白，进行SDS－PAGE及Western blot鉴定。结果 获得人OPG成熟肽段编码区cDNA，以构建的原核表达载体pMAL-OPG转化菌株后，可表达人OPG和麦芽糖结合蛋白（MBP）的融合蛋白，相对分子质量（M）为85000。表达产物的蛋白量约为菌体总蛋白的13％。Western blot表明，融合蛋白能与抗人OPG多克隆抗体特异性结合。结论 获得人OPG成熟肽全长cDNA，并在大肠杆菌中以OPC－MBP融合蛋白的形式表达。     

新生儿呕吐的观察及护理

呕吐是新生儿最常见的症状之一,可由多种原因引起。笔者经70例的观察及护理,积累了一定的经验体会,报告如下。1 呕吐的原因1.1 喂奶不当卧位水平式喂奶,使大量空气吞入,牛奶太热、太冷,奶嘴孔太大,奶流过急,吞咽过快,均可导致喂奶后呕吐。1.2 溢奶即喂奶后卧侧口边溢出奶液,多见于母     

博莱霉素损伤后肺表面活性物质测定的实验研究

目的 观察博莱霉素（BLM）肺损伤早期肺泡Ⅱ型上皮细胞（ATⅡ）的超微结构和肺表面活性物质（PS）中磷脂（PL）的组分和蛋白质含量的变化，探讨这一变化与ATⅡ活性的关系。方法 28只大鼠气管内滴注BLM（4mg/ml,5mg/kg)建立肺损伤模型，按染BLM后处死的时间顺序分为3、7、14、28d组，大鼠的肺组织块分别行组织化学染色电镜观察，测定支气管灌洗液（BALF）中PL及其组分和蛋白质含量。结果 （1）染BLM实验组大鼠肺均可PS层丧失连续、均匀的绒状结构，脱落入肺泡腔，以3d组较为明显。钌红阳性表面层的厚度与对照组比较，3d组大鼠肺较厚且染色深，7、14d组无明显差别，28d组较淡薄；BALF的PS中PL含量趋于增加，其中3d组大鼠的磷脂酰甘油（PG）含量升高，7、14、28d组降低；磷脂酰肌醇（PI）含量变化则与此相反。（2）染BLM3、7d组大鼠ATⅡ可见变性坏死，甚至崩解，以3d组较明显；ATⅡ增生各组均可见，以7d组较明显；14d组可见有ATⅡ转化为ATI,并伸展、粘附于裸露基底膜；3d组大鼠肺PS中蛋白质的含量最高，28d组含量接近对照组。结论 BLM肺损伤后PS的形态以及质与量的变化能较特异的反映ATⅡ活性。测定BALF中PL含量是判断肺损伤早期ATⅡ活性变化的简便易行的方法之一。     

单次硬膜外阻滞麻醉用于小儿手术的临床体会

作者选择30例小儿择期手术应用单次硬膜外阻滞麻醉,取得良好效果,现将体会报告如下。 1 临床资料 1.1 一般资料,本组30例,均为男性。年龄11月～8岁,体重8Kg～25Kg。手术病种包括腹股沟斜疝15例,睾丸鞘膜积     

芬太尼、异丙酚联合应用于人工流产的临床效果观察

作者在人工流产术中联合应用了芬太尼、异丙酚麻醉,有消除受术者疼痛,降低人工流产综合征的发生,取得了满意的效果。报告如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料选择6周～12周、无心血管病史及麻醉药过敏史的健康初孕妇100例。随机分为两组。观察组50例,对照组50例。孕妇年龄观察组平均25.72岁±2.15岁,孕周为8.7±1.2;对照组24.45岁±2.16岁,孕周为8.7±1.3。两组孕妇一般情况无显著差异。P>0.05,具有可比性。     

大肠杆菌表达的重组人BMP-2和hBMP-4成熟肽大规模制备方法的比较

目的:大规模制备人骨形成蛋白成熟肽(hBMP-m):hBMP-4m和hBMP-2m.方法:两种工程菌株分别含有能够高表达hBMP-4m和hBMP-2m的质粒,分别导入15 L NBS发酵罐中进行恒溶氧高密度发酵和诱导表达,离心收集菌体,悬浮所收集的菌体,裂菌,洗涤4次.预先取少量样品进行探索实验后,全部包涵体分别用8 mol/L尿素缓冲液溶解,上Sepharose SP-FF阳离子柱.结果:发酵菌液A600 nm值分别为28.8和26.3.SOS-PAGE电泳后吸光度扫描表明hBMP-4m占细菌总蛋白量的40.0%,hBMP-2m占细菌总蛋白量的47.2%.洗涤4次后的包涵体中hBMP-4m占蛋白量的82.9%,hBMP-2m占蛋白量的84.5%.上Sepharose SP-FF阳离子柱后,分别收集0.35 mol/L NaCl和0.20 mol/L NaCl洗脱部分,获得纯度为96%的hBMP-4m及纯度为95%的hBMP-2m.其收获量分别为1.30 g/L发酵液和1.25 g/L发酵液;收得率分别为34.33%和34.81%.结论:大规模制备hBMP-4m和hBMP-2m时,使用相同的发酵程序及相近的纯化方法,都能够得到较好的收得率、较高的收获量和纯度.     

差示扫描量热法在药物多晶型定量分析中的应用

药物多晶型直接影响药物的安全性和质量可控性。因此仅对药物进行晶型的定性研究已不能满足要求。为了确保药品的疗效及安全性,测定原料药或制剂中有效晶型含量需要采用适当的方法对多晶型进行定量分析。本文具体综述了近年来传统差式扫描量热法、调制式差示扫描量热法及超高效差示扫描量热法在药物多晶型定量分析方面的应用,并对其优缺点进行了总结,展望了其应用前景。     

兔眼玻璃体内植物性异物常规MRI与磁敏感加权成像研究

目的 探讨兔眼玻璃体内植物性异物常规MRI及磁敏感加权成像(SWI)的诊断价值.方法 实验动物120只,右眼玻璃体内分别植入1枚直径0.3 mm、长3 mm的植物性异物,其中海棠木、竹子、松木、桃枝、仙人掌刺、麦芒各20枚,以左眼为对照,不植入异物,均于术后2 h行常规MRI及SWI序列检查.结果 对于120枚兔眼玻璃体内植物性异物,T1WI、T2WI、PDWI、SWI分别检出20、119、64、120枚,所检出的异物除SWI序列的相位图呈高信号、混杂高信号或低信号外余均呈低信号.T1WI、PDWI 检出异物直径较实际植入异物直径小;T2WI检出异物直径与实际植入异物直径基本一致;SWI检出异物直径较实际植入异物直径大.结论 T2WI,SWI诊断兔眼玻璃体内植物性异物较T1WI、PDWI更敏感,且异物在SWI上具有放大效应,SWI可作为眼玻璃体内微小植物性异物的优选检出手段,是常规MRI的重要补充.     

Tris-SDS-PAGE测定多肽的相对分子质量

SDS－PAGE是实验室测定蛋白质相对分子质量（Mr）及亚基组成最常用的方法。该方法一般用于测定Mr大于１００００的蛋白质,而对于Mr小于１００００的小分子多肽则不能有效地分离和测定,多采用三层胶的Tricine－SDS－PAGE系统犤１,２犦,但该系统操作复杂、时间长。虽然我们已将三层胶简化为两层胶系统犤３,４犦,但与实验室最常用的SDS－PAGE法相比较,该系统所用试剂种类多,其中的Tricine试剂成本高,且电泳时间仍较长（３～４h）。因此,我们经过多次实验模索,建立了一种用SDS－PAGE测定小分子多肽的方法。１材料和方…