南蛇藤素对哮喘小鼠TSLP介导的Th2优势免疫干预的研究

目的观察南蛇藤素对小鼠哮喘模型胸腺基质淋巴生成素(TSLP)介导的气道炎症的影响及机制。方法 24只SPF级BALB/c雌性小鼠随机分成4组。哮喘组、甲强龙组及南蛇藤素组分别予OVA致敏,然后腹腔注射等体积药物(分别为生理盐水、甲强龙及南蛇藤素),再予以雾化吸入1%OVA激发。对照组使用等剂量生理盐水。末次激发24h后,检测各组小鼠血清总Ig E及TSLP含量,支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IL-13水平,HE染色肺组织病理学检测炎症浸润。结果南蛇藤素组小鼠哮喘表现较哮喘组明显改善;其血清总Ig E、TSLP含量及BALF中IL-4、IL-13水平均低于哮喘组(P0.05);且小鼠肺组织气道炎症明显减轻,但与甲强龙组无异(P0.05)。结论南蛇藤素组可以通过抑制哮喘小鼠TSLP介导的Th2优势免疫改善其临床症状。     

雷公藤红素通过活性氧诱导结肠癌SW620细胞凋亡

目的:探讨雷公藤红素(celestrol)诱导KRAS驱动的结肠癌SW620细胞产生凋亡的作用和机制。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和台盼蓝拒染法检测细胞增殖;免疫印迹法检测蛋白表达;流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞凋亡、细胞周期、线粒体膜电位;荧光显微镜检测细胞内活性氧水平(reactive oxygen species,ROS)。结果:雷公藤红素明显抑制SW620细胞的增殖活性;雷公藤红素下调SW620胞内的p-Akt、NF-κB、Survivin表达,激活caspase-7、caspase-3 和PARP;雷公藤红素增加SW620细胞内的ROS、降低线粒体膜电位、阻滞细胞周期于G₂/M期和诱导凋亡。抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)抑制雷公藤红素引起的上述作用。结论:通过诱导细胞内ROS的累积导致细胞内线粒体膜电位的下降进而触发细胞发生凋亡是雷公藤红素诱导SW620细胞凋亡的作用机制之一。     

雷公藤红素-薏苡仁油微乳的制备及其体外抗肿瘤活性评价

目的:制备雷公藤红素-薏苡仁油微乳(CC-MEs)并对其理化性质及体外抗肿瘤活性进行评价。方法:通过考察雷公藤红素在不同介质中的溶解度,筛选CC-MEs的最佳油相、乳化剂及助乳化剂。采用水滴定法制备微乳,根据其粒径,多分散指数(PDI),Zeta电位,包封率和载药量筛选CC-MEs的最佳处方,并对制备微乳的形态、稳定性和体外释放进行考察。通过四甲基偶氮唑盐法考察CC-MEs对宫颈癌HeLa细胞的毒性,评价其体外抗肿瘤活性。结果:CC-MEs最佳处方为雷公藤红素10 mg,薏苡仁油既为药物又兼作油相(用量400 mg),聚氧乙烯氢化蓖麻油450 mg,聚乙二醇400 150 mg;制备的微乳外观形态圆整,平均粒径(31.63±0.63)nm,PDI 0.06±0.01,Zeta电位(-10.14±1.35)mV,48 h时雷公藤红素体外累积释放度(19.89±0.59)%,具有一定的缓释特性。CC-MEs对HeLa细胞具有较好的增殖抑制作用,其半数抑制浓度以薏苡仁油计为20.7 mg·L~(-1),以雷公藤红素计为0.82μmol·L~(-1),联合用药指数0.93,表明两药联用具有协同作用。结论:CC-MEs粒径小且分布均匀、稳定性好、辅料用量少。雷公藤红素与薏苡仁油组分配伍制剂能够增强对HeLa细胞的增殖抑制作用,二者具有协同抗肿瘤功效。     

ATG5敲低后抑制人肺癌细胞H1299自噬并增强南蛇藤素诱导的细胞凋亡

目的构建自噬相关基因5(autophagy-related gene 5,ATG5)低表达肺癌细胞株,观察肺癌细胞自噬活性,检测南蛇藤素对肺癌细胞凋亡的影响。方法用ATG5 shRNA技术构建ATG5敲低的人肺癌H1299细胞株作为ATG5敲低组,未敲低ATG5的H1299细胞作为对照组;荧光定量PCR和Western blot检测肺癌细胞中ATG5的表达和自噬标志物微管相关轻链蛋白3(microtubule-associated protein 1A/1B-light chain 3,LC3)及死骨片蛋白1的(sequestosome 1,P62)表达,并转染红色荧光标记的LC3质粒观察LC3斑点聚集情况;经南蛇藤素刺激后,以流式细胞术检测细胞凋亡,最后使用Western blot检测cleaved caspase-3、Bcl-2和Bax等蛋白的表达。结果慢病毒感染组ATG5较对照组mRNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05);ATG5敲低后LC3-Ⅱ水平下降,P62水平上升,并且转染后RFP-LC3斑点聚集减少(P0.05)。相比对照组,南蛇藤素明显促进ATG5敲低细胞凋亡(P0.01);ATG5敲低组中促凋亡分子Bax、cleaved caspase-3表达比对照组明显增加(P0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少(P0.05)。结论 ATG5敲低抑制肺癌细胞自噬后,南蛇藤素能够明显增强人肺癌细胞的凋亡,提示抑制肺癌细胞自噬可能为针对性处理肺癌细胞耐药提供新的思路。     

基于生物信息数据库探讨雷公藤红素抗糖尿病及其并发症的生物分子机制研究

目的基于生物信息数据库探讨雷公藤红素抗糖尿病及其并发症的生物分子机制研究。方法从生物信息数据库中获取雷公藤红素的相关联基因信息,通过Veen图软件寻找雷公藤红素和糖尿病(diabetes mellitus)交集基因,采用STRING软件构建蛋白-蛋白互作网络,运用DAVID软件和KOBAS软件进行相关KEGG通路识别,进一步用R语言编程软件构建了雷公藤红素抗糖尿病的“化合物-靶基因-通路-疾病”相关生物分子机制网络。结果雷公藤红素有50个基因与糖尿病相关,涉及到的通路有11条(P<0.001),主要影响糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路,其机制是通过抑制NF-κB调节AGE-RAGE-NF-κB轴,减少下游炎症效应因子产生,进而减轻胰岛素抵抗和器官纤维化损伤。结论雷公藤红素能够通过调节AGE-RAGE-NF-κB轴相关信号通路,改善糖尿病及其并发症的相关症状。雷公藤红素有望成为治疗糖尿病及其并发症的潜在药物。     

雷公藤红素对非酒精性脂肪肝L02细胞内质网应激的影响及机制

目的:通过雷公藤红素干预非酒精性脂肪肝L02细胞模型来探讨雷公藤红素调节肝L02细胞脂质代谢紊乱及非酒精性脂肪肝L02细胞内质网应激的相关机制。方法:将肝L02细胞分为空白组,模型组,雷公藤红素低剂量组(0. 5 mg·L~(-1)),雷公藤红素高剂量组(1 mg·L~(-1))和辛伐他汀组(SIM,6 mg·L~(-1))进行培养。检测肝L02细胞内胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量变化;用油红O染色观察肝L02细胞脂质沉积情况;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测各组肝L02细胞中内质网应激(ERS)相关信号分子活化转录因子6(ATF6),葡萄糖调节蛋白78(GRP78),肌醇需求酶1(IRE1),固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP),固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)和固醇调节元件结合蛋白-2(SREBP-2)的mRNA转录以及蛋白表达水平。结果:非酒精性脂肪肝病(NAFLD)组肝L02细胞中TC及TG含量均高于空白组(P 0. 05),雷公藤红素低、高剂量组及SIM 6 mg·L~(-1)组肝L02细胞中TC及TG含量较NAFLD组均有不同程度减少(P 0. 05)。油红O染色显示NAFLD组肝L02细胞内含有大量红染脂质颗粒沉积,而雷公藤红素低、高剂量组及SIM 6 mg·L~(-1)组红染脂质颗粒较NAFLD组均有不同程度减少。RT-PCR和Western blot结果显示,NAFLD组肝L02细胞内ERS相关信号分子ATF6,GRP78,IRE1,SCAP,SREBP-1c和SREBP-2的mRNA转录和蛋白表达水平均高于空白组(P 0. 05);雷公藤红素低、高剂量组和SIM 6 mg·L~(-1)组肝L02细胞内ATF6,GRP78,IRE1,SCAP,SREBP-1c和SREBP-2的mRNA转录及蛋白表达水平均低于NAFLD组(P 0. 05)。而雷公藤红素高剂量组与SIM 6 mg·L~(-1)组间肝L02细胞内ATF6,GRP78,IRE1,SCAP,SREBP-1c和SREBP-2 mRNA转录及蛋白表达水平差异不具有统计学意义。结论:雷公藤红素可通过下调肝L02细胞ERS时相关信号分子ATF6,GRP78,IRE1,SCAP,SREBP-1c和SREBP-2的表达来减轻肝L02细胞脂质代谢紊乱,从而改善NAFLD。     

雷公藤红素对神经病理性疼痛模型小鼠的干预作用

目的:观察雷公藤红素对神经病理性疼痛(NP)模型小鼠疼痛、焦虑及抑郁共病的干预作用以及初步机制探索。方法:将小鼠随机分为假手术组,模型组,普瑞巴林组(25 mg·kg-1),雷公藤红素低、中、高剂量组(5,10,20 mg·kg-1),以L5脊神经结扎(SNL)的方法制备NP小鼠模型,采用Von Frey法检测小鼠机械痛阈值,旷场和悬尾实验分别检测小鼠焦虑和抑郁症状,免疫组化(IHC)观察各组小鼠海马小胶质细胞形态的变化;选用BV2-TdT小胶质细胞,以1 mg·L-1脂多糖(LPS)诱导细胞炎症,分为正常组、模型组、雷公藤红素(100 nmol·L-1)组,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达,免疫荧光(IF)检测TNF-α的蛋白表达。结果:与假手术组比较,SNL模型组小鼠具有显著的机械痛敏、焦虑和抑郁症状(P0. 05,P0. 01),且海马小胶质细胞胞体面积明显升高(P0. 05),呈阿米巴样;与SNL模型组比较,20 mg·kg-1雷公藤红素能明显升高SNL小鼠50%缩足阈值和旷场中央区停留时间(P0. 05,P0. 01),降低SNL小鼠悬尾不动时间(P0. 05),减少SNL小鼠海马小胶质细胞的胞体面积(P0. 05)。体外实验显示,与正常组比较,LPS诱导BV2小胶质细胞后2～4 h,细胞TNF-α的mRNA和蛋白表达均明显升高(P0. 05,P0. 01);与LPS组比较,100 nmol·L-1雷公藤红素能显著抑制LPS诱导的TNF-α在mRNA和蛋白水平上表达的异常升高(P0. 01)。结论:雷公藤红素能改善NP模型小鼠痛与情绪障碍共病,其机制可能与中枢神经免疫调控有关。     

雷公藤红素对IgA肾病大鼠肾脏组织中Notch信号通路表达的影响研究

目的 探讨雷公藤红素对IgA肾病大鼠肾脏组织中Notch信号通路表达的影响.方法 建立IgA肾病大鼠模型,观察雷公藤红素治疗后大鼠血尿、蛋白尿情况,采用免疫组织化学和实时荧光定量PCR检测Notch1、Jagged1及其下游靶基因Hes1、Hey1的表达.结果 与对照组比较,IgA肾病模型组血尿及24 h尿蛋白定量明显增高(P＜0.05);第16、20周末与模型组比较,贝那普利组及雷公藤红素干预组血尿、24 h尿蛋白定量明显下降(P＜0.05),且贝那普利组及高剂量组较低剂量组下降明显(P＜0.05).各组大鼠尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、谷丙氨基酸转移酶(ALT)、谷草氨基酸转移酶(AST)比较,差异无统计学意义(P＞0.05).对照组大鼠肾小球、肾小管细胞质中Notch1、Jagged1仅有少量表达,在模型组大鼠肾脏组织的肾小球及肾小管细胞质中表达明显增加,贝那普利组、低剂量组、高剂量组Notch1、Jagged1的表达较模型组减弱,但仍高于对照组.而Hes1、Hey1在对照组大鼠肾小球、肾小管细胞质中基本无表达,在模型组大鼠肾脏组织的肾小球细胞核表达增加,贝那普利组、低剂量组、高剂量组Hes1、Hey1的表达较模型组减弱,但仍高于对照组.结论 雷公藤红素可以通过抑制IgA肾病大鼠肾组织中Notch信号通路的表达,减少血尿、蛋白尿的生成,从而对大鼠IgA肾病起到治疗作用.