Cinobufagin,a bufadienolide from traditional Chinese medicine Bufo bufo gargarizans CANTOR,inhibits PC3 cell growth in vitro and in vivo

ObjectiveTo explore the effects of cinobufagin (CBF), an active component of toad venom (Bufo bufo gargarizans CANTOR), on the proliferation and apoptosis of PC3 human prostate cancer cells in vitro and preliminarily investigate the mechanism of CBF in suppressing tumor cell growth in vivo.MethodsThe effect of CBF on PC3 cells proliferation was detected using MTT assay. The morphological changes of PC3 cells were observed under an optical microscope. Colony formation assays were used to observe the CBF effect on colony formation by PC3 cells. PC3 cell apoptosis after treatment with CBF for 48 hours was monitored using flow cytometry. Furthermore, the effect of CBF on the expression of myeloid cell leukemia-1 (MCL-1) and related apoptotic proteins was examined using western blotting. A xenograft model was established in BALB/c nude mice to evaluate the effect of CBF on prostate cancer in vivo.ResultsThe MTT assay results illustrated that PC3 cell proliferation was inhibited in vitro by CBF in a concentration- and time-dependent manner. Compared with the control group findings, CBF significantly inhibited the formation of PC3 cells (P = .005). Flow cytometry revealed that after treatment with 50 nM CBF for 48 hours, the apoptotic rate of PC3 cells was 41.97 (5.16)%, indicating that CBF could significantly induce its apoptosis (P = .003). In addition, optical and fluorescence microscopy uncovered remarkable inhibition of cell proliferation accompanied by morphologic changes. The western blotting result indicated that CBF obviously downregulated the expression of the anti-apoptotic protein MCL-1. Most importantly, CBF reduced the carcinogenicity of PC3 xenografts in nude mice.ConclusionCBF can inhibit the growth of PC3 cells both in vitro and in vivo and induce apoptosis of tumor cells. The corresponding mechanism may be correlated with the activation of caspase family proteins via MCL-1.     

华蟾素注射液对人肝癌肿瘤细胞HepG_2增殖抑制作用观察及其作用机制研究

目的探讨华蟾素注射液对人肝癌肿瘤细胞Hep G2增殖抑制作用观察及其作用机制研究。方法 MTT法测定华蟾素注射液对Hep G2细胞增殖抑制作用,高内涵活细胞成像系统检测华蟾素注射液对Hep G2细胞周期和细胞凋亡的影响,Western blot蛋白印迹法检测华蟾素注射液凋亡相关蛋白的表达。结果华蟾素注射液不同浓度作用于24h和48h抑制率均明显高于阴性对照组(P0.05),且随着浓度的增加,抑制率越为明显;华蟾素注射液不同浓度作用于48h抑制率明显高于24h抑制率(P0.05);华蟾素注射液不同浓度G0/G1期百分率高于阴性对照组(P0.05),S期细胞百分率低于阴性对照组(P0.05);华蟾素注射液不同浓度凋亡率高于阴性对照组(P0.05);随着华蟾素注射液浓度增加细胞凋亡率增加;随着华蟾素注射液浓度的减少,Bcl-2蛋白表达不断增加,而Bax蛋白表达不断下降。结论华蟾素注射液可明显抑制人肝癌肿瘤细胞Hep G2增殖,阻滞细胞于G0/G1期,可能通过上调bax蛋白表达、下调Bcl-2蛋白表达相关。     

华蟾毒精抑制HeLa细胞增殖作用机制的探讨

目的观察中药成份华蟾毒精（CBG）对HeLa细胞增殖的作用,并初步探讨其作用机理。方法SRB和MTT法观察CBG对人肝癌细胞（Bel-7402）、宫颈癌细胞（HeLa）、乳腺癌细胞（MCF-7）、胃癌细胞（BGC-823）和白血病淋巴细胞（HL60）等几种人体肿瘤细胞增殖的影响;采用流式细胞仪法观察CBG对HeLa细胞周期的影响;通过双向电泳的方法,进一步探讨CBG作用于HeLa细胞蛋白质组的情况。结果CBG对多种人体肿瘤细胞的增殖都有明显抑制作用,其Bel-7402、HeLa、MCF．7、BGC-823和H1．60细胞的IC50值分别为0．011,0．019,0．116,0．149,1．369μmoL／L,其中以人宫颈癌细胞（HeLa）和人肝癌细胞（Bel-7402）最为敏感。流式方法测定的结果显示,不同浓度的CBG与HeLa细胞作用72h,可使G2／M期的HeLa细胞由17．3％增加到35．6％。双向电泳的结果显示,0．02μmol／LCBG作用48h后,与对照组相比,HeLa细胞中相对分子质量较小（约30000～90000）的偏酸性蛋白（pH约4～6）发生了较大的改变。结论CBG对多种人体肿瘤细胞的增殖均有显著抑制作用。CBG可使HeLa细胞周期阻滞在G2／M期,并对HeLa细胞内相对分子质量较小的酸性蛋白表达有明显的影响。     

华蟾酥精微球肝动脉栓塞的实验研究

本文报告用乳化聚合法制备华蟾酥精明胶微球。通过正交试验，确定了制备特定粒径微球的最佳工艺条件。微球经辐射消毒后检测符合临床药用标准。根据血管解剖，科学地设计了微球粒径，使之选择性地栓塞肝窦前动脉，达到了末稍动脉栓塞的目的。     

不同输注方法预防华蟾素所致静脉炎的效果观察

目的 观察不同输注方法对华蟾素致静脉炎发生率的影响.方法 选取静脉滴注华蟾素注射液患者80例,随机分为观察组和对照组各40例,观察组在静脉滴注华蟾素注射液时,加入小剂量酚妥拉明,并在输注过程前、中、后输入少量生理盐水,对照组在静脉滴注华蟾素注射液时,只加入小剂量酚妥拉明.比较2组患者输液后静脉炎的发生率.结果 观察组静脉炎的发生率为27.5％,对照组静脉炎的发生率为60.0％,二者比较差异显著.结论 静脉滴注华蟾素注射液时,加入小剂量酚妥拉明,并在输注过程前、中、后输入少量生理盐水,能有效地预防华蟾素所致静脉炎的发生.     

华蟾素抗肿瘤作用及其机制研究进展

华蟾素注射液是一种传统中药抗肿瘤制剂,临床应用范围较广。研究表明其具有抗肿瘤,增强机体免疫力,提高中晚期癌症患者生存质量等作用。本文就国内外华蟾素注射液临床应用以及其抑制细胞DNA合成、诱导细胞凋亡、提高机体免疫力等实验研究进展进行综述。     

华蟾素抗肿瘤作用及其机制研究进展

华蟾素是我国蟾蜍科动物中华大蟾蜍(Bufo gargarizans cantor)的全皮阴干后,经提取加工处理,制成的水溶性成分,具有清热解毒、化瘀溃坚、利水消肿等作用。近年来,大量临床以及实验研究发现,华蟾素在肺癌、肝癌、乳腺癌、结直肠癌、鼻咽癌、骨肉瘤等恶性肿瘤中均表现明显抑瘤效果。其抗肿瘤机制主要包括抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、阻滞肿瘤细胞周期、化疗放疗增敏以及逆转耐药、诱导自噬、抑制肿瘤细胞的转移与侵袭、调控肿瘤细胞微环境(基质)、抑制肿瘤血管生成、增强机体免疫功能、调节菌群功能等。本综述就近年来国内外有关华蟾素的抗肿瘤作用及其相关机制进行归纳整理,以期能为实验研究、临床治疗提供更多依据。     

高效液相色谱法测定救心软胶囊中蟾酥的含量

目的建立救心软胶囊中蟾酥的主要成分华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱(RP-HPLC),以C18为固定相,流动相为乙腈-0.5%磷酸二氢钾(用磷酸调节pH值为3.0)(45∶55),检测波长296nm。结果华蟾酥毒基和脂蟾毒配基与其他成分分离良好。华蟾酥毒基在进样量0~5.86μg(r=0.999 8),脂蟾毒配基在进样量0~5.88μg(r=0.999 97)线性关系良好,华蟾酥毒基和脂蟾毒配基加样回收率为99.81%,RSD为2.25。结论该法操作简便、准确、重现性好,可用于救心软胶囊中蟾酥的质量控制。     

Study on effects of cinobufagin on the immunologic function of mice in vitro

华蟾毒精对小鼠免疫功能影响的体外研究@宋宇$College of Animal Science and Veterinary Medicine,Jilin University!Changchun 130062,Jilin,China;National Standard Laboratory of Pharmacology for Traditional Chinese Medicine, Jilin Natural Pharmatech Co.Ltd, Chang     

氯通道在华蟾酥毒基诱导的鼻咽癌细胞凋亡中起重要作用

目的: 研究氯离子通道在华蟾酥毒基(CBG)诱导低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡和凋亡性容积减小中的作用。方法: 实验设立空白对照组、CBG高、中、低剂量组及CBG与氯通道阻断剂NPPB 联合作用组。Hoechst 33342染色检测细胞的凋亡率,活细胞图像分析法检测细胞容积变化,全细胞膜片钳法记录氯电流。结果: (1)CBG浓度依赖性诱导鼻咽癌细胞凋亡,高剂量CBG(8 μmol/L)诱导的细胞凋亡率为43.2％;(2)CBG可诱导细胞产生凋亡性容积减小,在CBG作用早期(50 min),细胞容积减小约9.9％。(3)CBG可激活氯通道,产生一个无明显外向优势的氯电流。(4)氯通道阻断剂NPPB可抑制CBG诱导的细胞凋亡、凋亡性细胞容积减小和氯电流。NPPB对CBG诱导的细胞凋亡和凋亡性容积减小的抑制率分别达80.1％和74.8％。结论: 以上结果提示CBG可能通过激活氯通道而诱导细胞凋亡,氯通道的激活可能在CBG抗肿瘤机制中起重要作用。