分选高纯度肾小球内皮细胞基础上应用小干扰RNA技术分析5-脂氧合酶激活蛋白的作用

目的:采用多个内皮细胞特异性表达或吸收的蛋白分选高纯度的肾小球内皮细胞,观察5-脂氧合酶激活蛋白在细胞因子诱导的肾小球内皮细胞蛋白通透性中的可能作用.方法:实验于2005-12/2007-03在卫生部北京老年医学研究所完成.①实验材料:雌性Wistar大鼠2只,100～120 g.②实验过程:用胶原酶消化大鼠肾小球细胞,先后用抗CD31和抗acetylated-LDL抗体标记细胞,通过流式细胞仪纯化肾小球内皮细胞,用抗CD54、CD106和CD62E鉴定分离的细胞.③评估:通过小干扰RNA技术抑制肾小球血管内皮细胞表达5-脂氧合酶;用干扰素-γ刺激细胞,通过免疫印迹杂交和免疫荧光组织化学检测5-脂氧合酶蛋白的表达;用FITC标记的BSA作为指示剂来测量体外培养的肾小球血管内皮细胞的蛋白通透性.结果:①分选高纯度肾小球内皮细胞:CD31磁珠分选得到83.3% CD31阳性细胞,其中12.5%为同时CD31 和高吸收acetylated-LDL.分离该双阳性细胞后得到纯度大于99.2%的肾小球内皮细胞.流式细胞仪检测显示这些细胞的CD54、CD106和CD6也均为阳性.在相差显微镜下观察,细胞形态呈鹅卵石状.②细胞膜上5-脂氧合酶定位:用干扰素-γ处理细胞后,5-脂氧合酶蛋白表达水平升高并呈时间和剂量依赖性.③细胞转染5-脂氧合酶小干扰RNA后结果:用干扰素-γ处理,干扰素-γ不能诱导5-脂氧合酶的高表达;用干扰素-γ处理细胞后转染5-脂氧合酶小干扰RNA,干扰素-γ诱导5-脂氧合酶蛋白表达水平被明显抑制.④在5-脂氧合酶小干扰RNA转染细胞中干扰素-γ处理和未处理细胞白蛋白的通透率:分别为(0.37±0.09)% 和(0.31±0.06)%,差异没有显著性(P＞0.05).结论:干扰素-γ能够诱导肾小球内皮细胞表达5-脂氧合酶蛋白并导致细胞通透性增高.5-脂氧合酶蛋白介导了干扰素-γ诱导细胞通透性增高的过程.     

单纯性肥胖青少年血清脂蛋白亚组分水平分析

目的探讨青少年单纯性肥胖与血清脂蛋白及其亚组分水平的关系。方法采用超速离心-高效液相色谱法测定60例肥胖青少年和19例体重指数正常者血清脂蛋白及其亚型水平。使用双能量X线吸收仪检测所有受试者全身及躯干部体脂比率。结果与正常对照组相比,肥胖组血清TC(4.47±0.90)比(3.79±0.50)mmol/L、TG(1.02±0.41)比(0.72±0.34)mmol/L、LDL-C(2.56±0.81)比(1.95±0.35)mmol/L、LDLa-C(2.39±0.83)比(1.74±0.37)mmol/L平均水平显著增高,而HDL-C(1.18±0.23)比(1.35±0.16)mmol/L、HDL2-C(0.73±0.21)比(0.91±0.16)mmol/L平均水平明显降低(P<0.01)。BMI、腰围、全身体脂及躯干体脂比率分别与TC、TG、LDL-C、LDLa-C水平呈显著正相关,与HDL-C、HDL2-C水平呈显著负相关(P<0.05,P<0.01)。结论单纯性肥胖青少年存在与肥胖相关的早期脂质代谢紊乱的趋势。     

DPI抑制高浓度葡萄糖诱导的人脐静脉内皮细胞活性氧升高及对NOX亚单位表达的影响

背景和目的动脉粥样硬化是糖尿病的严重及常见并发症。糖尿病的主要临床特点是血糖升高，而高糖可以刺激血管产生氧化应激，损伤内皮细胞，诱发动脉粥样硬化。探讨氧化应激产生的机制，抑制活性氧的产生．对于防止糖尿病并发动脉粥样硬化有十分重要的作用。     

氧化应激诱导胰岛素抵抗的分子机制

氧化应激是指机体内活性氧（ROS）的生成增加和（或）清除能力降低，导致ROS的生成和清除失衡。ROS具有重要的生理作用，但过量则会引起分子、细胞和机体的损伤。胰岛素抵抗（IR）是指正常剂量的胰岛素产生低于正常生物学效应的一种状态，也就是指机体对胰岛素的反应减退，主要表现为胰岛素敏感组织（肌肉、脂肪组织）葡萄糖摄取减少及抑制肝葡萄糖输出作用减弱。     

基于R软件的逐步Cox回归模型拟合及Nomogram预测图绘制

目的建立基于R软件的逐步Cox回归模型拟合及列线图（Nomogram）绘制方法。方法以R软件的Survival包分别对R自带的Lung数据集228例晚期肺癌病人数据和美国监测、流行病、终点结局（surveillance, epidemiology and end results,SEER）数据库获取的6 341例胰腺癌病人数据拟合逐步Cox回归模型,采用rms包绘制列线图,以校准曲线对模型效果进行验证评价。结果Cox回归模型显示性别、ph.ecog评分是晚期肺癌病人生存的独立影响因素,年龄、肿瘤部位、肿瘤分化程度、TNM分期、肿瘤大小与淋巴结阳性率为胰腺癌病人生存的独立影响因素。基于以上影响因素绘制的2个列线图可较准确地评估肺癌和胰腺癌病人1年、2年生存概率,校准曲线显示1年、2年实际生存概率与预测概率大致接近。结论R绘制列线图方便,可直观地预测个体生存概率。     

上海市某社区婴儿缺铁性贫血影响因素研究

[目的] 探讨上海市某社区6月龄婴儿缺铁性贫血发生情况及其影响因素。[方法] 对上海市某社区2007年1月至2009年6月出生的190例6月龄婴儿进行血红蛋白检测与相关因素调查。[结果] 该社区6月龄婴儿缺铁性贫血的患病率为21.58%,经单因素分析与多因素Logistic回归分析,婴儿喂养方式和4~6个月是否添加辅食是婴儿缺铁性贫血的重要影响因素,6个月内纯母乳喂养和4~6个月未添加辅食的OR值分别为3.0和19.8。[结论] 在提倡母乳喂养的同时,应注意合理添加辅食和适时补充铁元素,以减少婴儿缺铁性贫血的发生。     

降钙素对高转运性肾性骨病及心血管异位钙化的治疗作用

目的探讨降钙素对于高转运性肾性骨病及心血管异位钙化的治疗作用。方法将40例行维持性血液透析治疗伴有肾性骨病症状的患者随机分为实验组及对照组。对照组采用活性维生素D3口服治疗,实验组在活性维生素D3治疗基础上联合降钙素肌注,疗程3个月。治疗结束后应用双能X射线骨密度仪测量2组股骨颈骨密度值;治疗前后治疗前后应用全自动生化分析仪检测血钙、血磷、血甲状旁腺激素水平,使用酶联免疫吸附法检测Ⅰ型胶原N-端前肽、Ⅰ型胶原交联C-末端肽、胎球蛋白A值。结果治疗后,实验组的钙化评分、Ⅰ型胶原N-端前肽、Ⅰ型胶原交联C-末端肽较对照组下降更为明显(P0.05),股骨头骨密度显著提高(P0.05);2组治疗后血钙、血磷、胎球蛋白A值比较差异均无统计学意义。结论降钙素联合活性维生素D治疗可明显改善肾性骨病患者骨质代谢,对转移性钙化具有一定的抑制作用,但效果尚未明确。     

广西农村地区孕产妇住院分娩状况及影响因素研究

目的 了解1998-2003年广西农村地区孕产妇住院分娩服务的状况,并探讨影响住院分娩服务利用的因素.方法 以安德森卫生服务利用行为模型为分析框架,资料来源于第三次国家卫生服务调查的广西数据库.以其中1998-2003年有活产史的广西农村地区妇女为研究对象,描述住院分娩服务的状况,进行单因素分析并拟合多因素logistic回归模型,考察农村妇女住院分娩的影响因素.结果 在全部407名有活产史的妇女中,39.80%的妇女是住院分娩;1998-2003年的住院分娩率呈逐年升高(P＜0.0001),在乡镇卫生院分娩的产妇呈逐年上升趋势,在家分娩的产妇比例则逐年减少(P＜0.0001).经综合考虑单因素分析和多因素logistic回归分析结果,孕产妇的分娩史、教育状况、家庭的饮水类型、以最快方式去最近医院的时间、产前检查情况,以及是否被动员住院分娩等因素是影响广西农村地区孕产妇住院分娩服务利用的重要因素,其OR值分别为:经产妇1.749、以最快方式去最近医院的时间少于10 min者1.995、家庭饮用自来水者3.011、高中及以上文化程度者5.435、接受5次及以上产前检查者29.149与被动员过住院分娩者37.822.结论 社会经济发展水平、孕期保健状况、分娩史等是影响广西农村妇女选择住院分娩,接受专业人员助产服务的主要因素.     

急性心肌梗死介入治疗的护理体会

随着人们生活水平的提高,急性心肌梗死(AM I)的发病率近年来逐渐增加,已成为威胁人们健康的头号杀手。近年来AM I患者直接经皮冠状动脉腔内成形(PTCA)、支架植入术已成为治疗AM I的重要手段,其成功率高,并发症少。我院2002年1月至2005年5月开展了经皮穿刺法行冠状动脉腔内球囊成形术 支架术58例。现将护理体会报告如下。1临床资料本组58例中,男49例,女9例;年龄51~79岁。急性前壁心肌梗死30例,前间壁心肌梗死10例,下壁心肌梗死18例(安装临时起搏器2例)。冠状动脉造影结果显示:单支病变40例,双支病变12例,3支病变6例,植入支架65个。所有…     

人血清载脂蛋白CⅠ和CⅢ的分离提纯及其单克隆抗体的制备

本文应用超速离心、凝胶过滤层析、高效液相色谱法分离纯化了人血清极低密度脂蛋白—载脂蛋白ＣⅠ和ＣⅢ。经等电聚焦电泳、十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺电泳、双向免疫扩散等方法鉴定了纯度。以载脂蛋白ＣⅠ和ＣⅢ纯品免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，应用淋巴细胞杂交瘤技术建立了４株抗人载脂蛋白ＣⅠ和２株抗人载脂蛋白ＣⅢ杂交瘤细胞。所得单克隆抗体与载脂蛋白ＡⅠ、ＡⅡ、Ｂ、ＣⅡ、Ｅ和白蛋白等无交叉反应。