广东海风藤提取物HS_2对老年痴呆小鼠的药效学研究

目的　研究广东海风藤提取物HS2 对老年痴呆 (AD)模型小鼠的治疗作用及作用机制。方法　选用昆明种小鼠 ,腹腔注射D 半乳糖和灌胃三氯化铝 90d制备老年痴呆小鼠模型 ,3个治疗组在造模的后 4 0d分别灌胃低、中、高剂量HS2 。通过Morris水迷宫、RT PCR ,常规HE染色及Aβ1～ 40免疫组化染色 ,来观察HS2 对AD模型小鼠学习记忆、脑内早老素 1(PS1)、β位点APP内切酶 (BACE)基因表达及海马、皮层中老年斑的影响。结果　低、中、高剂量的HS2 均能改善AD小鼠学习记忆 ,下调PS1和BACE基因的表达 ,减少老年斑的生成。结论　不同剂量的HS2 能改善AD小鼠的学习记忆能力 ,降低PS1,BACEmRNA的含量 ,减少脑内Aβ沉积所形成的老年斑     

五味子乙素对M146L细胞分泌β淀粉样蛋白的影响

目的:探讨五味子乙素对M146L细胞分泌的β淀粉样蛋白(amyloid β-protein,Aβ)的影响。方法:体外培养稳定转染人类阿尔茨海默病β淀粉样前体蛋白(Amyloid beta-protein precursor,APP)基因及突变型早老素1(prsenilin-1,PS1)基因的CHO(Chinese Hamster Ovary)细胞系(M146L),使之高效产生β淀粉样蛋白42(amyloid β-protein,Aβ_(42)),建立Aβ_(42)过度表达的细胞模型。加入待筛选的药物五味子乙素,用四甲基偶氮唑蓝比色法(microculture tetrazolium assay,MTT法)检测不同浓度的五味子乙素(1.67,5,15μg·mL~(-1))对M146L细胞毒作用,应用ELISA法(enzyme-linked immunosorbent assay)观察细胞分泌的Aβ_(42)的变化。结果:不同浓度的五味子乙素对M146L存活率没有影响,不具有细胞毒作用。5和15μg·mL~(-1)的五味子乙素对细胞分泌的Aβ_(42)有抑制作用,以高剂量组最为明显。结论:一定剂量的五味子乙素对M146L细胞分泌的Aβ_(42)有明显的抑制作用。     

丹参酮ⅡA对U251胶质瘤细胞的增殖抑制和原癌基因表达的影响

目的:探讨丹参酮ⅡA对人胶质瘤细胞株U251的增殖抑制作用及其作用机理。方法:应用MTT比色法检测不同浓度丹参酮ⅡA对U251细胞的增殖抑制,应用流式细胞仪观察丹参酮ⅡA对U251细胞周期的影响,应用RT-PCR观察相关基因C-myc表达的变化。结果:丹参酮ⅡA对U251细胞增殖抑制作用呈剂量依赖性,当浓度为0.10 g·L^-1时,对U251细胞增殖的抑制率达到(53.7±6.0)%。流式细胞仪分析显示,用0.10 g·L^-1丹参酮ⅡA培养3 d,细胞周期中G₀/G₁期所占比例增高,S期占细胞周期的比例降低。RT-PCR结果显示,随着丹参酮ⅡA作用剂量的增加,c-myc基因的表达被明显抑制。结论:丹参酮ⅡA对人胶质瘤细胞系U251的增殖具有明显的抑制作用,并对原癌基因c-myc的表达具有抑制作用。     

新生小鼠小脑提取液对成年小鼠神经干细胞分裂与增殖的影响

目的:探讨新生小鼠小脑提取液(ECNM)对成年小鼠脑内神经干细胞分裂与增殖的影响.方法:采用脑立体定位给药技术,将ECNM注入前脑和海马,应用Nestin单抗做免疫组化染色,显示神经干细胞.结果:给予ECNM后7d和14d,在前脑和海马均可见密集的神经干细胞,对照组未见阳性染色.结论:ECNM可诱导成年小鼠神经干细胞分裂与增殖.     

苦参碱对U251胶质瘤细胞的增殖抑制和原癌基因表达的影响

目的　探讨苦参碱对胶质瘤细胞株 (U2 5 1细胞株 )的抑制作用及其作用机制。方法　用MTT比色法检测不同浓度苦参碱对U2 5 1细胞的增殖抑制 ,流式细胞仪观察苦参碱对U2 5 1细胞周期的影响 ,RT PCR观察原癌基因C myc表达的变化。结果　苦参碱对U2 5 1细胞增殖抑制作用成剂量依赖性 ,当浓度为 0 10g·L-1时 ,对U2 5 1细胞增殖的抑制率达到 5 3 7%± 6 0 %。流式细胞仪分析显示 ,用 0 10g·L-1苦参碱培养 3d ,细胞周期中G0 /G1期所占比例增高 ,S期占细胞周期的比例减低。RT PCR结果显示 ,随着苦参碱作用剂量的增加 ,C myc基因的表达被明显抑制。结论　苦参碱对人胶质瘤细胞系U2 5 1的增殖具有明显的抑制作用 ,并对原癌基因C myc的表达具有抑制作用     

基于SCoT标记血叶兰资源的亲缘关系分析

目的采用SCoT分子标记方法对血叶兰Ludisia discolor及其近缘属植物资源进行亲缘关系及DNA指纹图谱构建,从分子水平对血叶兰及其近缘属种质进行区分。方法使用正交设计方法,对SCoT-PCR反应体系进行优化,筛选适合血叶兰的反应体系、最佳退火温度及SCoT引物。以供试的12份种质资源为材料,利用筛选的引物对其进行分析,用POPgene计算材料间的遗传多样性系数,NTSYS软件进行聚类分析,并构建DNA指纹图谱。结果获得适用于血叶兰的SCoT-PCR反应体系,筛选出12条多态性好的血叶兰SCoT引物,多态性比率为98.98%。根据Nei’s遗传相似系数,在相似系数为0.45时,12份种质资源可被分为3个分支。其中,斑叶兰与7份血叶兰种质归为Ⅰ类,3份金线兰种质为Ⅱ类,而绿石蚕单独聚为Ⅲ类。利用SC8引物构建的DNA指纹图谱即可将12份材料鉴别开。结论 12份血叶兰及其近缘属种质具有丰富的遗传多样性,构建的DNA指纹图谱可用于血叶兰及其近缘属品系鉴定。