感染细胞内问号钩端螺旋体吞噬泡形成及其与溶酶体的融合

目的了解问号钩端螺旋体（简称钩体）感染宿主细胞后吞噬泡形成、吞噬泡与溶酶体融合及感染细胞超微结构改变。方法用问号钩体黄疸出血群赖型56601株感染小鼠单核巨噬样细胞j774A．1和猴肾成纤维细胞Cos-7。采用透射电镜观察J774A．1细胞和Cos-7细胞胞内钩体吞噬泡的形成及感染细胞超微结构的改变。采用免疫双荧光染色法和激光共聚焦显微镜，观察含钩体吞噬泡与溶酶体融合情况。结果问号钩体56601株感染J774A．1细胞30min、感染Cos-7细胞15min即可在胞浆中发现膜包绕的含钩体吞噬泡，吞噬泡内钩体均保持原有生理弯曲。56601株问号钩体感染Cos-7细胞2h后，钩体吞噬泡膜开始消失，但未发现j774A．1细胞内钩体吞噬泡膜消失的现象。J774A．1细胞内钩体吞噬泡与溶酶体发生共区域化，表明吞噬泡与溶酶体发生融合。J774A．1细胞感染钩体后出现染色质浓缩形成的凋亡小体样结构、细胞空泡变性、线粒体肿胀等超微结构病变，但Cos-7细胞感染钩体后其超微结构基本正常。结论问号钩体感染J774A．1细胞和Cos-7细胞后可迅速形成吞噬泡并可能与钩体Ⅲ型分泌系统产物有关。J774A．1细胞内钩体吞噬泡可与溶酶体发生融合。不同细胞的钩体吞噬泡膜消失及超微结构改变有明显差异。     

STI571诱导Jurkat细胞表达Th1细胞因子及HLA-DR、CD-25

目的应用流式微珠阵列法检测Th1/Th2细胞因子表达及探讨STI571对Jurkat细胞的作用。方法以不同浓度STI571诱导培养Jurkat细胞,流式微珠阵列法检测培养上清液中IL-2、,IL-6、TNF-α,和IFN-γ表达,流式细胞术检测IL-2膜上受体(CD-25)和HLA-DR表达;结果STI571诱导Jurkat细胞IL-2、TNF-α表达且表达量呈浓度依赖形式升高,未检测到IL-6表达,CD-25和HLA-DR表达明显升高。结论STI571能诱导Jurkat细胞高表达Th1细胞因子和CD-25、HLA-DR,流式微珠阵列法能准确监测Th1/Th2细胞因子表达的动态变化。     

高血压病患者尿微量蛋白的检测

高血压病肾脏损害是高血压病的严重并发症之一,早期诊断高血压病的肾脏损害,对制定防治措施、延缓病情进展意义重大.作者采用速率散射比浊法进行尿微量白蛋白(MA)、α1-微球蛋白(AlM)、IgG、和转铁蛋白(TRU)的检测,试图早期发现高血压病肾脏损害.现将结果报道如下.     

我国主要问号钩端螺旋体血清群lipL21基因序列及其产物免疫反应性分析

目的 分析我国15群15型问号钩端螺旋体（简称钩体）参考标准株外膜脂蛋白lipL21基因序列，构建该基因原核表达系统并鉴定表达产物的免疫原性，了解lipL21基因自然表达状况。方法 高保真PCR扩增上述问号钩体株及双曲钩体Paloc型PalocⅠ株基因组DNA中全长lipL21基因片段，T-A克隆后测序并构建其原核表达系统。分别用钩体TR/PatocⅠ和rLipL21兔抗血清为一抗的Western blot鉴定目的重组蛋白rLipL21的免疫原性，显微镜凝集试验（MAT）检测rLipL21兔抗血清的交叉凝集效价。以盐变-去垢剂处理法提取钩体外膜蛋白，用SDS-PAGE和免疫印迹法检测上述钩体株lipL21基因自然表达情况。结果 上述钩体株均存在序列高度保守的lipL21基因，其核苷酸和氨基酸序列相似性分别为98．75％～99．82％和99．46％～100％。rLipL21能与TR/PatocⅠ及rLipL21兔抗血清发生结合反应。rLipL21免疫家兔能产生抗体，该抗体对上述15株问号钩体MAT效价为1：16～1：128。问号钩体外膜标本中均可检出LipL21，双曲钩体则否。结论 我国钩体群参考标准株均含有序列保守的lipL21基因并自然表达于外膜，双曲钩体PatocⅠ株虽含有lipL21基因但未表达。rLipL21具有良好的抗原性和免疫反应性，有可能作为新型钩体疫苗或检测试剂盒的候选属特异性表面抗原之一。     

问号钩端螺旋体lipL21基因改建及其表达产物免疫原性变化和定位

目的:改建问号钩端螺旋体(简称钩体)lipL21基因核苷酸序列以提高表达产量并了解基因改建前后表达产物免疫原性变化,确定外膜脂蛋白LipL21在钩体表面的定位。方法:参照大肠杆菌偏爱密码子设计,合成lipL21基因核苷酸序列并构建其原核表达系统。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检测改建前后lipL21基因表达量变化。采用钩体TR/Patoc抗血清为一抗的Western blot鉴定改建前后两种目的重组蛋白rLipL21s的免疫反应性,显微镜凝集试验(MAT)比较改建前后rLipL21s抗血清对不同钩体血清群的交叉免疫凝集效价变化。应用免疫电镜技术对LipL21进行定位。结果:改建前后lipL21基因表达量分别为细菌总蛋白的8.5%和46.5%。两种rLipL21均能与TR/Patoc抗血清发生免疫结合反应,免疫家兔后均能产生特异性抗体。两种rLipL21兔抗血清对我国15群15型钩体参考标准株MAT效价相近,均为1∶80~1∶320。LipL21位于钩体外膜表面。结论:LipL21是钩体表面抗原。改建后的lipL21基因可明显提高原核表达产量,其产物可保持良好的抗原性和免疫反应性,其抗体具有广泛的交叉免疫凝集活性。     

冬虫夏草对哮喘大鼠肺组织NOD1和NOD2表达的影响

【】目的 通过观察NOD1和NOD2在哮喘大鼠肺组织中的表达,探讨冬虫夏草治疗哮喘的可能作用机制。方法 通过哮喘大鼠模型,给予冬虫夏草灌胃,分别采用免疫组化法和实时荧光定量PCR法检测肺组织NOD1和NOD2蛋白或mRNA的表达。 结果 哮喘组(0.62±0.34)NOD1 mRNA的表达量显著低于对照组(1)(P﹤0.01);冬虫夏草组(0.98±0.22)NOD1 mRNA的表达量显著高于哮喘组(0.62±0.34)(P﹤0.01)。哮喘组NOD2蛋白(0.18±0.03 OD值)的光密度值显著低于对照组(0.24±0.03 OD值)(P﹤0.01),而哮喘组(0.92±0.32)NOD2 mRNA的表达量与对照组(1)差异无统计学意义(P>0.05);冬虫夏草组(依次为：0.23±0.02 OD值;1.27±0.48)NOD2蛋白和 mRNA的表达量显著高于哮喘组(依次为：0.18±0.03 OD值;0.92±0.32)(均P﹤0.05)。NOD2 mRNA和蛋白的表达水平无显著相关性 ( n=24, r =0.32,P>0.05);NOD1mRNA和NOD2 mRNA的表达水平无显著相关性( n=24, r =0.20,P>0.05)。结论 哮喘大鼠肺组织 NOD1和NOD2的表达下降,冬虫夏草能上调NOD1和NOD2表达的作用。     

冬虫夏草对哮喘模型大鼠肺组织NOD1和NOD2表达的影响

目的观察哮喘模型大鼠肺组织NOD1和NOD2表达,探讨冬虫夏草治疗哮喘的可能作用机制。方法 SD大鼠24只,制备哮喘大鼠模型,给予冬虫夏草水煎剂5mL/只灌胃,分别采用免疫组化法和实时荧光定量PCR法检测大鼠肺组织NOD1和NOD2蛋白及mRNA表达量。结果哮喘组大鼠肺组织NOD1 mRNA表达量显著低于对照组[(0.62±0.34)比1,P0.01];冬虫夏草组大鼠肺组织NOD1 m RNA表达量显著高于哮喘组[(0.98±0.22)比(0.62±0.34),P0.01]。哮喘组大鼠肺组织NOD2蛋白光密度值显著低于对照组[(0.18±0.03)比(0.24±0.03),P0.01],哮喘组大鼠肺组织NOD2 mRNA表达量与对照组差异无统计学意义[(0.92±0.32)比1,P0.05];冬虫夏草组大鼠肺组织NOD2蛋白和mRNA表达量显著高于哮喘组[(0.23±0.02)比(0.18±0.03),(1.27±0.48)比(0.92±0.32),P均0.05]。NOD2 mRNA与蛋白表达水平、NOD1 mRNA与NOD2 mRNA表达水平均无显著相关性(n=24,r=0.32、0.20,P0.05)。结论哮喘模型大鼠肺组织NOD1和NOD2表达下降,冬虫夏草可能有上调NOD1和NOD2表达作用。     

中性粒细胞激活蛋白-2在大鼠哮喘中性粒细胞中的表达及意义

目的：观察大鼠哮喘中性粒细胞激活蛋白-2（NAP-2）蛋白在中性粒细胞（NEU）上的表达及地塞米松对其的影响,探讨NEU参与哮喘发病的可能作用机制。方法：采用大鼠哮喘模型,随机分成哮喘组、对照组、地塞米松治疗组,分离纯化血NEU,免疫组织化学法测定支气管和血NEU中NAP-2蛋白的表达水平。结果：哮喘组NEUNAP-2蛋白的平均光密度值（0.198±0.016）显著高于对照组值（0.079±0.015）（P〈0.01）;地塞米松治疗组的NEUNAP-2蛋白的平均光密度值（0.135±0.021）显著低于哮喘组且高于对照组（P〈0.01）。哮喘组支气管NAP-2蛋白的平均光密度值（0.226±0.050）显著高于对照组值（0.140±0.012）（P〈0.01）;地塞米松治疗组的支气管NAP-2蛋白的平均光密度值（0.175±0.028）显著低于哮喘组且高于对照组（P〈0.01或P〈0.05）。NEUNAP-2蛋白的表达水平与支气管肺泡灌洗液NEU计数呈显著正相关（n=29,r=0.334,P〈0.05）。结论：哮喘大鼠NEUNAP-2蛋白的表达水平增加,NEU可能通过NAP-2参与哮喘发病的炎症过程;地塞米松部分通过抑制NEUNAP-2的表达从而减轻气道炎症,NAP-2可能与NEU在肺组织中聚集有关。     

家用微波ELISA检测日本血吸虫抗体的研究

顾启章等[2 ] 建立了检测日本血吸虫病血清抗体的医用微波辐射ELISA(microwaveirradiationELISA ,MWI ELISA) [2 ] ,5min即可显色 ,效果令人满意。在此基础上 ,本研究建立了以家用微波炉为微波发生器的MWI ELISA ,用于检测血吸虫血清抗体 ,获得良好检测效果。1　材料与方法试剂盒 :日本血吸虫抗体ELISA试剂盒购自中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所。血清标本来源 :江西省急性和晚期血吸虫病患者各 11例 ,血吸虫疫水接触史者 178例 (13份历史粪孵阳性、2份历史IHA阳性 ) ;湖南省急性和慢性血吸虫病患者分别为 15例和 40…     

淋病奈瑟菌临床菌株PⅠ基因型及PⅠB基因点突变分析

目的分析浙江地区淋病奈瑟菌株外膜孔蛋白PⅠ基因序列及其点突变与耐药性关系，了解本地区淋病奈瑟菌株PⅠA与PⅠB基因分布及其优势基因型。方法采用高保真PCR扩增34株淋病奈瑟菌全长PⅠ基因序列，T-A克隆后测序。根据测序结果，建立多重PCR同时检测113株淋病奈瑟菌PⅠA和PⅠB基因。分析测序菌株PⅠB基因中与耐药性密切相关的G120和A121变异情况，采用二倍琼脂稀释法确定PⅠB菌株的耐药性。结果11株PⅠA^＋淋病奈瑟菌均为ⅠA6血清型。23株PⅠB^＋淋病奈瑟菌中，6株（26．1％）为ⅠB3血清型、5株（21．7％）为ⅠB3／6血清型、2株（8．7％）为ⅠB4血清型、9株（39．1％）为ⅠB3／6-ⅠB2嵌合血清型、1株（4．3％）为ⅠB2-ⅠB4嵌合血清型。所建立的多重PCR可特异和准确地对PⅠA和PⅠB基因分型，检测灵敏度为10雌DNA模板。113株淋病奈瑟菌中，26株（23．0％）和87株（77．0％）分别携带PⅠA和PⅠB基因。经测序的23株PⅠB^＋淋病奈瑟菌中，1株（4．3％）G120和A121均未突变，3株（13．0％）G120或A121突变，2株、8．7％）G120突变但A121缺失，17株（73．9％）双位点突变。22株G120和／或A121突变的PⅠB^＋菌株均对青霉素和四环素耐药。结论所建立的多重PCR可用于淋病奈瑟菌PⅠA和PⅠB基因的分型检测。本地区流行的淋病奈瑟菌主要携带PⅠB基因。ⅠA6为PⅠA菌株优势血清型。PⅠB菌株以ⅠB3／6-ⅠB2嵌合、ⅠB3和ⅠB3／6血清型常见，但主要为耐药性G120和／或A121突变株。