工频电磁场对小鼠骨髓间充质干细胞骨形态发生蛋白2和转化生长因子β1 mRNA表达的刺激

背景:研究证实电磁场刺激能够促进多种骨生长因子的合成与分泌,而某些生长因子具有诱导骨髓间充质干细胞定向分化成骨的作用。目的:分析工频电磁场对体外培养的小鼠骨髓间充质干细胞骨形态发生蛋白2和转化生长因子β1mRNA表达的影响。设计:单一样本、区组设计,观察对比动物实验。单位:华中科技大学同济医学院附属同济医院创伤外科。材料:实验于2005-02/12在华中科技大学同济医学院附属同济医院骨外科实验室完成。①选取清洁级昆明种小鼠20只,作为实验用骨髓间充质干细胞的来源。②电磁场发生器由武汉市海军工程大学研制,能生成场强为0～100mT的连续可调的50Hz正弦波电磁场。③引物均由北京赛百胜生物工程公司合成。方法:①小鼠以颈椎脱臼法处死,取双侧股骨和胫骨,体外分离培养骨髓间充质干细胞,取第2代细胞用于实验。②不同强度电磁场刺激实验:设立阴性对照组、阳性对照组、电磁场0.4,0.8,1.6mT刺激组,每组均取5瓶第2代细胞。阴性对照组、阳性对照组均不给予电磁场刺激,但阳性对照组于传代时加入含成骨性诱导剂(含10-8mol/L地塞米松,10mmol/Lβ-甘油磷酸钠,50mg/LVitaminC)的培养基;电磁场0.4,0.8,1.6mT刺激组在细胞贴壁后分别于0.4,0.8,1.6mT场强中进行电磁场刺激,每天均连续刺激1h,5d后进行指标检测。③相同场强不同作用时间电磁场刺激实验:设立阴性对照组、电磁场1.6mT刺激15,30,60min组,每组均取5瓶第2代细胞。阴性对照组不进行电磁场刺激;电磁场1.6mT刺激15,30,60min组在1.6mT场强条件下每天分别给予15,30,60min的连续电磁场刺激,5d后进行指标检测。④RT-PCR技术检测各组细胞骨形态发生蛋白2与转化生长因子β1mRNA的表达。主要观察指标:①不同强度电磁场刺激对小鼠骨髓间充质干细胞骨形态发生蛋白2与转化生长因子β1mRNA表达的影响。②相同场强不同作用时间电磁场刺激小鼠骨髓间充质干细胞骨形态发生蛋白2与转化生长因子β1mRNA表达的影响。结果:①电磁场刺激5d后,与阴性对照组比较,阳性对照组及电磁场0.4,0.8,1.6mT刺激组骨形态发生蛋白2、转化生长因子β1mRNA的表达均明显增强(P均<0.01);且电磁场1.6mT刺激组骨形态发生蛋白2mRNA的表达达到最大值(57.74±0.23)%,电磁场0.4mT刺激组转化生长因子β1mRNA的表达达到最大值(126.20±0.21)%。②电磁场刺激5d后,与阴性对照组比较,电磁场1.6mT刺激15,30,60min组骨形态发生蛋白2与转化生长因子β1mRNA的表达均明显增强(P均<0.01);且电磁场1.6mT刺激60min组两种因子mRNA的表达分别达到最大值(28.06±0.11)%和(75.20±0.16)%。结论:适当强度及作用时间的工频电磁场刺激,能够明显促进体外培养的小鼠骨髓间充质干细胞骨形态发生蛋白2与转化生长因子β1mRNA的表达。     

构建Loa22基因去信号肽片段原核重组表达载体

目的：构建赖型钩端螺旋体OmpA膜蛋白Loa22基因去信号肽片段的原核表达载体，并对其进行克隆表达。方法：实验于2004—12／2005—12在四川大学华西医学中心感染免疫研究室完成。以赖型钩端螺旋体017株基因组DNA为模板，PCR扩增Loa22基因去信号肽片段，亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-1，经双酶切、PCR鉴定，筛选出阳性重组质粒克隆。经DNA测序正确后，转化大肠杆菌，利用IPTG进行诱导表达，通过SDS—PAGE鉴定表达产物。结果：PCR获得长516bp的片段。Loa22基因去信号肽片段与pGEX-4T-1的重组质粒构建成功。重组质粒经IPTG诱导后能在大肠杆菌中表达Mr45000的融合蛋白。结论：制备了Loa22基因去信号肽片段原核重组表达载体，为钩体新型疫苗的研究奠定基础。     

幽门螺杆菌脂蛋白Lpp20的研究进展

Lpp20是一种保守的幽门螺杆菌膜相关脂蛋白,他含有细菌脂蛋白的典型信号肽.近几年研究显示,Lpp20具有良好的免疫原性和免疫保护性.本文即对Lpp20的结构及其免疫原性和免疫保护性的研究进展作一综述.     

靶向结缔组织生长因子shRNA慢病毒表达载体的构建及病毒包装

目的构建靶向结缔组织生长因子（CTGF）的shRNA慢病毒载体并检测其介导的RNA干扰（RNAi）对人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19）CTGF表达的影响,为进一步研究CTGF在增殖性玻璃体视网膜病变（PVR）中的功能奠定基础。方法设计并合成三对针对CTGF的siRNA,通过WesternBlot筛选有效靶点,合成有效靶点的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与线性化的pGC-LV-GFP载体连接,通过PCR筛选阳性克隆并进行DNA测序鉴定;将重组CTGFshRNA的质粒与病毒包装的辅助质粒共转染295T细胞,将包装产生的慢病毒感染ARPE-19细胞,WesternBbt检测CTGF的表达。结果通过双酶切和基因测序证实靶向CT-GF的shRNA慢病毒载体构建成功,Western Blot证实经慢病毒感染后的ARPE-19细胞中的CTGF的蛋白水平明显减低。结论成功构建了靶向CTGF的shRNA慢病毒表达载体,体外感染ARPE-19细胞可有效降低CTGF蛋白的表达,为深人研究CTGF在PVR中的功能提供了有力的工具。     

基质金属蛋白酶及其抑制物与肿瘤转移研究进展

基质金属蛋白酶是一个大家族,因其需要Ca^2＋、Zn^2＋等金属离子作为辅助因子而得名,其家族成员具有相似的结构,一般由5个功能不同的结构域组成：①疏水信号肽序列;②前肽区,主要作用是保持酶原的稳定。当该区域被外源性酶切断后,MMPs酶原被激活;③催化活性区,有锌离子结合位点.     

富血小板血浆治疗薄型子宫内膜的作用机制

薄型子宫内膜可导致临床妊娠率和活产率降低,目前尚无改善薄型子宫内膜患者子宫内膜厚度的最佳方案。富血小板血浆（platelet-rich plasma,PRP）灌注治疗作为改善子宫内膜厚度的一种新型的治疗方法,在治疗薄型子宫内膜的确切作用较为复杂。PRP所含有的血小板浓度高于全血中通常所含的血小板浓度,而使用高浓度血小板的基本原理和治疗潜力是基于它们可以提供超生理剂量的必需生长因子,以提供再生刺激,促进具有低愈合潜力的组织修复。现基于目前国内外PRP治疗薄型子宫内膜的研究进展,探讨PRP内生长因子促细胞增殖、迁移及通过核因子κB（nuclear factor-κB,NF-κB）信号通路调节子宫内膜细胞增殖和凋亡的作用,为进一步研究PRP治疗的分子基础及确切的作用机制提供参考。     

脂肪特异性蛋白27（Fsp27）基因延缓四氯化碳所致实验大鼠肝纤维化

目的 探讨脂肪特异性蛋白27（Fsp27）基因对活体肝纤维化进程的调节作用.方法 分离原代肝星状细胞（HSCs）,采用PCR技术检测在原代HSCs及活化HSCs中的Fsp27基因表达；构建携带Fsp27目的基因的慢病毒；建立肝纤维化模型；慢病毒转染模型鼠肝脏,对实验大鼠行肝脏病理切片检查,采用ELISA法和放射免疫法分别检测肝脏及血浆纤维蛋白含量.结果 Fsp27基因在原代HSCs及活化HSCs中表达差异有统计学意义（P＜0.01）；成功构建了Fsp27基因的慢病毒载体；成功建立了肝纤维化活体模型；Fsp27基因慢病毒成功转染大鼠肝脏,Fsp27基因减轻了肝脏的纤维化程度.结论 Fsp27基因具有延缓活体肝纤维化进程的作用.     

重叠区扩增基因拼接法拼接hIL-2信号肽基因和CVB3的VP1基因

目的：将hIL-2信号肽基因拼接到CVB3VP1基因的5’端，以获得分泌型VP1(sVP1)基因。方法：采用重叠区扩增基因拼接法。结果：凝胶电泳见到预期大小DNA条带，经测序表明基因序列与报导的hIL-2信号肽及CVB3 VP1的基因序列一致。结论：成功获得了融合基因sVP1。     

B型利钠肽的研究进展

生物学特点 1988年从猪的大脑中分离出一种多肽-脑利钠肽(BNP),次年克隆出了人BNP,即(hBNP),已证实其主要合成位点在心室,因此又称为"心室利钠肽".hBNP基因位于人类染色体1p36.2,基因全长1922bp,含有3个外显子和2个内含子.其mRNA由692bp组成,编码具有134个氨基酸的BNP前体蛋白(preproBNP),然后进行细胞内修饰裂解产生BNP前体(proBNP)和信号肽,proBNP再裂解为N末端BNP和活性BNP并释放到细胞外.     

富血小板血浆在烧伤治疗中的研究进展

Platelet-rich plasma (PRP) is the plasma derived from the repeatedly centrifuged whole blood,and it contains high concentration of platelets.The growth factors and concentrated platelets in PRP play im...