实时荧光定量PCR检测痰标本中军团菌属

目的建立荧光定量PCR方法,用于检测军团菌属特异性16S rRNA基因,并探讨广州地区军团菌属感染状况。方法利用军团菌属特异性16S rRNA基因保守序列设计引物和探针,优化反应条件和反应体系,对嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及其他细菌进行检测,验证该方法的特异性、敏感性、重复性,对广东省中医院采集的532例肺部感染患者痰液标本进行检测。结果该方法检测军团菌属所有标准菌株均出现阳性信号,其他非军团菌属细菌检测结果均为阴性;检测灵敏度为102CFU/ml,临床检测532例肺部感染患者的痰液标本,荧光法检出军团菌阳性43例,阳性率为8.08%,16S rRNA PCR法加基因测序验证阳性率为7.71%,两者检测结果差异无统计学意义,表明其具有较好的符合性和等效性。结论 16S rRNA基因荧光定量PCR法检测患者痰液标本中军团菌属,具有快速、敏感、特异等特点,适用于临床军团菌属感染调查及快速检测。     

类视网膜母细胞瘤结合蛋白8基因的PCR检测

目的通过检测类视网膜母细胞瘤结合蛋白8（Similar to retinoblastoma binding protein 8,STRBP8）在人食管上皮细胞癌变过程中的差异表达,为寻找食管癌特异性标志物和研究食管癌的发病机制提供新线索。方法从GenBank中获取STRBP8的基因序列,并根据其CDS区设计相应的引物;利用TRIZOL法提取食管癌细胞总RNA,通过RT-PCR对目的基因进行扩增。结果本实验从食管癌细胞中成功扩增出STRBP8的特定目的基因。结论 STRBP8在食管癌细胞中存在表达。     

增强表达PTEN蛋白对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的作用

目的研究增强表达PTEN蛋白对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA FLS)增殖的影响。方法慢病毒表达载体pLenti6/V5-PTEN转染RA FLS并表达PTEN蛋白,应用RT-PCR、Western blot检测PTEN表达,MTT法检测RA FLS增殖能力的变化。结果转染pLenti6/V5-PTEN后,RA FLS中PTEN mRNA表达提高60%以上,PTEN蛋白表达在48 h后提高了107.85%(P<0.05),RA FLS增殖在487、29、6 h分别下降了25.14%、41.84%和52.46%(P<0.05)。结论慢病毒表达载体pLenti6/V5-PTEN能够提高PTEN蛋白表达水平,并显著抑制RA FLS增殖。     

紫癜灵对慢性免疫性血小板减少症患者Trp代谢的影响

目的:观察紫癜灵对慢性免疫性血小板减少症(ITP)阴虚血热证患者吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)/色氨酰-t RNA合成酶(TTS)介导的色氨酸(Trp)代谢途径的影响。方法:选取健康志愿者(正常对照组)与慢性ITP阴虚血热证患者(患者组)各20例。正常对照组不做任何处理,慢性ITP阴虚血热证患者采用紫癜灵治疗。治疗前后分别采集患者的肝素抗凝血标本,检测CD4+及CD8+T淋巴细胞中IDO、TTS表达及血浆Trp、Kyn浓度。结果:完全反应10例,有效7例,无效3例,有效率85.0%。患者组治疗前CD4+、CD8+T淋巴细胞IDO的平均荧光强度低于正常对照组(P0.05),TTS的平均荧光强度高于正常对照组(P0.05)。治疗后,患者组CD4+、CD8+T淋巴细胞中IDO的平均荧光强度较治疗前上升(P0.05),TTS的平均荧光强度较治疗前下降(P0.05)。患者组治疗前血浆Trp及Kyn浓度均高于正常对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。治疗后,患者组Trp浓度较治疗前降低,差异有统计学意义(P0.05);Kyn浓度较治疗前升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:紫癜灵可能通过影响慢性ITP阴虚血热证患者体内IDO/TTS介导的Trp代谢途径发挥其治疗作用。     

依据CLSI EP07-A3文件评价血清指数对免疫散射比浊法检测前白蛋白的干扰

目的 探讨溶血、黄疸、脂浊对免疫散射比浊法检测前白蛋白(PA)的干扰效果.方法 以新鲜血清样本作为基础样本,添加干扰物[血红蛋白(Hb)、胆红素及脂质]后,采用免疫散射比浊法检测PA水平.参考美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP07-A3文件进行配对差异实验、剂量效应实验.结果 10 g/L Hb(溶血指数为100...     

血清孕酮同位素稀释液相色谱串联质谱候选参考方法的性能评价及临床应用

目的:建立本实验室血清孕酮同位素稀释液相色谱串联质谱（ID-LC-MS/MS）候选参考方法,并将其用于5种临床常规检测系统的性能评价,探讨不同检测系统检测血清孕酮的可比性。方法:采用液液萃取的方法进行样本前处理,在正离子质谱模式下的反相液相分离检测人血清中孕酮,通过梯度洗脱,使单个样本检测时间控制在5 min内。为提高...     

宫颈病变患者人乳头瘤病毒16亚型E2基因多态性检测

目的分析宫颈病变中人乳头瘤病毒（HPV）16亚型E2基因的多态与宫颈病变的关系,了解E2基因变异情况及其与宫颈
病变的相关性。方法应用PCR和高分辨率熔解曲线方法针对379例HPV高危亚型阳性宫颈脱落细胞样本进行HPV16感染
情况及HPV16亚型E2基因68位点和133位点多态分布情况进行检测。结果379例HPV高危亚型阳性宫颈标本共检出78例
HPV16亚型阳性,其在宫颈癌、CINⅡ~Ⅲ、CINⅠ、炎症患者中的检出率分别为44.8%、31.5%、24.1%和9.6%;HPV16E2基因
68C和133G的频率在中重度宫颈内瘤样病变和宫颈癌中明显高于轻度上皮内瘤样病变和炎症患者（P<0.05）。结论HPV16是
导致宫颈恶性病变的重要致病因素;随着病理类型的进展,HPV16感染率也逐渐增加;同时基因位点改变说明HPV16E2基因
单核苷酸变异可能使致癌能力发生改变。
     

健脾渗湿法治疗特应性皮炎患者血清总IgE、IgG、IgG4变化及疗效评价

目的通过检测血清中总IgE(TIgE)、IgG、IgG4浓度在特应性皮炎(AD)发病过程中的变化,探讨健脾渗湿法治疗有效率与指标间的联系。方法选择38例AD患者为研究对象,于治疗前后观察其主要症状(包括瘙痒、睡眠、皮损面积、皮损严重程度),记录SCORAD积分,及检测血清中TIgE、IgG、IgG4水平。并将各项血清学指标与治疗有效率进行相关分析。结果治疗前的SCORAD评分为55.46±15.05,治疗后为49.41±12.33,两者有显著性差异(P<0.01);AD患者血清治疗前、后TIgE、IgG、IgG4均高于正常对照组(P<0.05)。但治疗后TIgE相对于治疗前明显下降,而IgG、IgG4水平明显升高。治疗有效率与TIgE、TIgE/IgG4治疗前后变化差值成中等正相关,相关系数分别为0.541,0.793。结论 TIgE、TIgE/IgG4水平变化是反映AD病情变化的重要指标,在一定程度上可用于评价病情是否好转。使用健脾渗湿法治疗AD后,TIgE、TIgE/IgG4随症状改善变化明显。     

IL-6和IL-18基因启动子多态性与广东汉族人群类风湿性关节炎相关性研究

目的 了解我国广东地区汉族人群白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-18(IL-18)基因启动子单核苷酸多态性及与类风湿性关节炎(RA)的相关性.方法 应用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)技术检测168名健康体检者和120例RA患者的IL-6基因启动子-572和-174及IL-18基因启动子-607C/A和-137G/C单核苷酸多态性.结果 对照组和患者组IL-6基因启动子-572位点、-174位点和IL-18基因启动子-607C/A位点、-137G/C位点均存在单核苷酸多态性.IL-6-572位点、-174位点和IL-18-607位点基因型和等位基因频率分布在RA组和对照组间差异均有显著性(P＜0.001).IL-18-137位点基因型频率在两组间无统计学意义(P=0.141),但等位基因分布频率在两组间差异有显著性(P=0.024).经Logistic回归分析,年龄、性别、IL-6-572位点、-174位点和IL-18-137位点与RA有相关性(P＜0.05).结论 广东汉族人群IL-6基因启动子-572和-174单核苷酸多态性与RA可能相关,IL-18基因启动子-607C/A和-137G/C单核苷酸多态性与RA是否相关需进一步研究.