天然化合物ACA的生物活性研究进展

乙酰氧基胡椒酚乙酸酯（ACA）是一种从高良姜中提取的小分子天然化合物，具有抗肿瘤、杀菌、保护胃粘膜和抗艾滋病等生物学功能。大量的体内体外实验表明，ACA的抗肿瘤活性是广谱的，并且没有明显的副作用。ACA分子水平的可能作用方式在NF-κB信号途径的研究中得到了大致的确定。ACA在未来的临床和基础研究中将成为一种重要药物。     

实时聚合酶链反应熔解曲线分析检测APC基因突变

目的建立一种准确、方便、价廉、适合临床的APC基因突变检测方法。方法采用SYBR Green I为实时聚合酶链反应（PCR）指示剂,首先从基因组DNA中扩增包含突变位点的靶基因（270bp）,并通过熔解曲线分析确定产物;再以上述片段为模板扩增特定长度的小片段（40／35bp）,以0．5℃／step的速率,获得从65℃到99℃的熔解曲线以检测APC-1309位5bp缺失突变。结果临床标本检测结果表明：18例结直肠肿瘤患者石蜡组织标本中检出APC_1309位5bp缺失突变7例,20例正常人外周血标本检测结果均为阴性。结论实时PCR熔解曲线法设计简单,操作简便,结果可靠,可望应用于临床APC基因突变检测,并可推荐用于其他基因突变的检测。     

细胞凋亡与肿瘤的发生发展和治疗

细胞凋亡是一种细胞自主生理性死亡,对多细胞动物机体的正常发育和自射稳定具有极其重要的作用,细胞凋亡失衡与许多疾病尤其是与肿的发生发展有关。近几年来,有关细胞凋亡分子机制的研究进展较快,对细胞凋亡在放疗、化疗等肿瘤治疗措施中的作用也有了进一步的认识,并有可能形成一种新的对肿瘤细胞凋亡失衡进行干预的诱导肿瘤细胞凋亡疗法。     

人参皂甙Rg1、肉桂酸与丹参酮IIA组合对体外人成骨肉瘤MG 63细胞形态结构和终末分化指标的影响

目的 研究中药有效成分人参皂甙Rg1、肉桂酸和丹参酮IIA 组合（RCT）对人成骨肉瘤MG-63细胞的形态与超微结构改变和终末分化的影响,鉴定其对人成骨肉瘤细胞终末分化的诱导作用。 方法 以中药有效成分组合（33mg/L 人参皂甙Rg1+2mmol/L 肉桂酸＋0.3mg/L 丹参酮IIA）处理MG-63细胞7d,对照组与处理组样本各3次重复,免疫细胞化学检测及光镜与电镜观察系统研究RCT组合对MG-63细胞的细胞生物学效应。环六亚甲基双乙酰胺（HMBA）处理MG-63细胞作为分化诱导效果的阳性对照。 结果 免疫细胞化学检测显示,成骨肉瘤细胞终末分化指标Ⅰ型胶原、骨黏素、骨钙蛋白的表达呈强阳性,并观察到钙化糖原颗粒增多与典型骨结节的形成;光镜与电镜观察结果显示,处理后的MG-63细胞产生了细胞形态规则,大小一致,细胞铺展体积增大,核质比例减小,核内核仁数目减少,细胞器丰富发达等趋向正常细胞特征的显著改变。 结论 RCT 组合能显著改变 MG-63细胞形态与超微结构恶性特征,并促进终末分化标志物的表达,从而对人成骨肉瘤MG-63细胞的终末分化具有显著诱导作用。     

Anti-DR5 mAb诱导佐剂型关节炎大鼠滑膜细胞凋亡及机理初探

目的:探讨Anti-DR5 mAb诱导佐剂型关节炎(Adjuvant Arthritis,AA)大鼠滑膜细胞凋亡作用及其可能机理.方法:注射弗氏完全佐剂建立AA大鼠模型,分离并体外培养大鼠滑膜细胞.MTT检测、DNA倍体分析及流式细胞术分析Anti-DR5 mAb 对大鼠滑膜细胞的凋亡作用,Western blot检测大鼠滑膜细胞Caspase-3、Bcl-2蛋白的表达,Caspase抑制剂实验分析Anti-DR5 mAb 对大鼠滑膜细胞凋亡作用的机制.结果:MTT实验表明Anti-DR5 mAb能抑制大鼠滑膜细胞的增殖,流式细胞术分析这种作用模式为细胞凋亡.Anti-DR5 mAb处理后的大鼠滑膜细胞中Caspase-3蛋白水平上升,Bcl-2蛋白水平下调.Caspase抑制剂实验证明Anti-DR5 mAb 诱导大鼠滑膜细胞的凋亡是通过Caspase途径实现的.结论:Anti-DR5 mAb诱导大鼠滑膜细胞的凋亡,这种作用与滑膜细胞表面Caspase-3、Bcl-2蛋白表达相关.     

荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐利福平突变研究

目的对荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐利福平突变方法进行临床研究,评价检测能力及在国境口岸的应用价值。方法应用荧光PCR熔解曲线法检测结核病人临床分离结核分枝杆菌,以传统药物敏感性试验为标准,获得该方法的灵敏性、特异性。结果对347例结核病人临床分离培养样本,传统药物敏感性试验检出271例利福平敏感标本,76例利福平耐药标本。荧光PCR熔解曲线法检出269例利福平敏感标本,78例利福平耐药标本,灵敏性为93.42%,特异性为97.42%,符合率为96.54%。结论荧光PCR熔解曲线法检测速度快速、灵敏度高、特异性强,可用于结核分枝杆菌利福平耐药突变的快速检测,适于国境口岸对耐多药结核病的快速筛查。     

鱼腥草花药发育的组织化学

 目的 揭示鱼腥草花药发育中营养成分的分布和转化特征。方法 花药做半薄切片经植物组织化学染色后,进行显微观察。 结果 鱼腥草花药发育中,花药壁的表皮、药室内壁始终分布着一些淀粉颗粒;绒毡层细胞在小孢子母细胞时期出现了质壁分离的异常现象;成熟的花粉粒积累的脂类物质不丰富。结论 花粉贮藏的营养物质是脂类物质,但不丰富,造成花粉粒败育。     

海洋放线菌Streptomyces sp. LZ35中的安莎霉素类化合物

 目的 对海洋放线菌Streptomyces sp. LZ35固体发酵提取物的化学成分进行研究。方法 采用Sephadex LH-20,硅胶等色谱柱及重结晶进行分离纯化,用波谱技术鉴定化合物的结构。结果 从14 L固体发酵提取物中分离得到7个安莎霉素类化合物,分别鉴定为geldanamycin（1）,17-O-demethylgeldanamycin（2）,herbimycin B（3）,reblastatin（4）,17-O-demethylreblastatin（5）,autolytimycin（6）,hygrocin A derivative（7）。结论 化合物1~7均为首次从该菌株中分离得到,且首次从一株链霉菌中分离到2种类型的安莎霉素。     

重组人碱性成纤细胞生长因子单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的制备重组人碱性成纤维细胞生长因子(recombinant human basic fibroblast growth factor,rhbFGF)单克隆抗体,鉴定其特性,建立双抗体夹心ELISA检测方法。方法以rhbFGF为免疫原,免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合技术建立能稳定分泌抗rhbFGF杂交瘤细胞株,制备抗rhbFGF单克隆抗体,采用Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗体亚类,间接ELISA法检测抗体效,Western blot鉴定抗体特异性。HRP标记McAb并建立夹心ELISA检测方法。结果获得2株(分别命名2D3、5F7)可分泌特异性McAb的强阳性细胞株,腹水抗体效价在10-5以上,IgG亚类均为IgG1,轻链为K链。Western blot证明2株McAb特异性良好,双抗体夹心ELISA检测rhbFGF最低检测限达到2 ng/ml。结论成功制备高效价的抗rhbFGF单克隆抗体,建立抗rhbFGF双抗体夹心ELISA定量检测方法。     

下调TSPO表达不影响脂多糖诱导的小胶质细胞TNF-α和IL-1β以及IL-6的分泌

目的研究相对分子质量(Mr)18 000转运蛋白(TSPO)基因表达下调对脂多糖(LPS)诱导BV-2小胶质细胞分泌TNF-α,IL-1β和IL-6的影响。方法以RNA干扰技术建立TSPO基因表达下调的细胞模型,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法检测转染TSPO siRNA BV-2细胞TSPO mRNA及蛋白水平表达的效果;用qRT-PCR法检测TSPO基因下调后小胶质细胞BV-2在LPS作用下分泌TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA水平表达的情况;ELISA检测TSPO基因下调小胶质细胞BV-2在LPS作用下分泌TNF-α、IL-1β和IL-6的蛋白水平表达的变化。结果成功建立了TSPO基因下调的细胞模型,稳定表达TSPO siRNA细胞的TSPO mRNA和蛋白水平表达均明显下降,TSPO基因下调后BV-2细胞在LPS作用下分泌TNF-α、IL-1β和IL-6的量无变化。结论下调TSPO的表达对LPS刺激引起的小胶质细胞TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌无明显影响。