脉冲电磁场对原代大鼠骨髓来源内皮前体细胞生长及分化的影响

目的探讨脉冲电磁场对内皮前体细胞增殖及分化的影响。方法采用密度梯度离心法分离SD大鼠骨髓内皮前体细胞，将细胞分为对照组及磁场组。磁场组细胞于培养第5天后给予低频脉冲电磁场干预，直至培养终点。细胞增殖活性采用MTT法测定，用流式细胞仪检测Ⅷ因子相关抗原、NOS，表达阳性细胞。结果从磁场作用第5天开始，磁场组细胞增殖活性明显高于对照组；磁场作用第3天时，磁场组细胞Ⅷ因子相关抗原、NOS，表达阳性细胞数量均明显高于对照组，这种增高趋势持续至培养终点。结论低频脉冲电磁场可促进大鼠骨髓来源内皮前体细胞的增殖及分化。     

低频电磁场对培养的人脐静脉内皮细胞一氧化氮合酶的影响

背景目前认为经磁场作用的酶,大多有增强活性的倾向,而关于低频电磁场(1owfrequency electromagneticfield,LFEMF)对培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性表达的影响研究不多见.目的探讨不同磁场强度,不同作用时间的LFEMF对HUVEC的NOS活性表达的影响,以探讨LFEMF用于经皮冠脉腔内成形术(percutanuoustransluminal coronary angioplasty,PTCA)及支架植入术后冠脉再狭窄防治的意义.设计随机对照的实验研究.地点、材料和干预本研究在解放军第四军医大学西京医院心内科实验室完成.体外培养的人脐静脉内皮细胞系ECV304按LFEMF的不同磁场强度,不同作用时间分为9个实验组和1个对照组进行干预.进行ABC免疫酶染色后图像分析法观察HUVEC的NOS表达.主要观察指标非磁场干预与不同强度磁场干预的体外培养的人脐静脉内皮细胞NOS结果.结果除60mT 20min组,60mT 30min组外,其余各实验组内皮细胞结构型NOS(Endothelium Constructive nitric oxide synthase,ecNOS)表达均较对照组增强,差异有显著性意义(P＜0.05).所有实验组与对照组诱生型NOS(Induced nitric oxide synthase,iNOS)均无表达.结论LFEMF增强了培养的HUVEC的ecNOS的表达,可能适用于再狭窄的防治.     

鳖甲和三七对心肌成纤维细胞增殖影响的实验研究

目的：观察以鳖甲和三七为主要成分的复方鳖甲软肝片和氯沙坦对心肌成纤维细胞(cardiac fibmblasts，CFs)增殖的影响。方法：取生后1～3d的雄性SD仔鼠心脏原代培养心肌成纤维细胞、传代，将第3代心肌成纤维细随机分为3组：空白对照组、氯沙坦组、复方鳖甲软肝片组。并根据血清药理学理论，分别以蒸馏水、10mg／kg氯沙坦、0．7g／kg复方鳖甲软肝片喂养新西兰兔获得血清，制备相应培养液干预培养的心肌成纤维细胞。结果：鳖甲片和氯沙坦能明显抑制CFs增殖(空白对照组、氯沙坦组、鳖甲片组的A值分别为0．387&;#177;0．0539，0．181&;#177;0．044，0．212&;#177;0．038，F=5．805，P=0．016)，并将细胞周期阻抑在G1期[(74．32&;#177;1．76)％，(81．02&;#177;4．15)％，(81．62&;#177;3．83)％，F=7．041，P=0．009]，处于分裂期(S期)的细胞比例减少[(18．36&;#177;2．15)％，(13．18&;#177;3．26)％，(11．60&;#177;2．23)％，F=9．290，P=0．004]，对CFs增殖和细胞周期影响的作用强度与氯沙坦相近(A值：95％CI：-0．180—1．118，P=0．662；G1和S期：95％Cl:-5．306—4．106，P=0．768；95％Cl:-1．995—5．515．P=0．355)。结论：复方鳖甲软肝片具有防治心肌纤维化的作用。     

一氧化氮对心肌细胞缺氧复氧时脂质过氧化损伤的保护作用

目的：研究一氧化氮对培养鼠心肌细胞缺氧复氧所致脂质过氧化损伤的保护作用，探讨心肌缺血修复机制。方法：采用细胞缺氧复氧损伤模型，培养细胞随机分为4组：A组正常对照组(培养3h)；B组单纯缺氧／复氧(A／R缺氧2h复氧1h)；C组缺氧预处理组(缺氧20min后复氧20min，然后缺氧复氧)；D组一氧化氮预处理组[加入S-亚硝基-已酰青酶胺(s-nitroso-n-acety1-penicil—lamine，SNAP)使其终浓度为1mmol／L，预处理40min后A／R。与复氧后测定培养液中肌酸激酶(creatine kinase，CK)、乳酸脱氢酶(1actic dehydrogenase，LDH)活性变化及细胞内丙二醛含量和细胞存活率。结果：与正常组比，单纯缺氧／复氧组CK[(941．35&;#177;152．53)nkat／L]、LDH[(7416．48&;#177;984．20)nkat／L]、丙二醛[(1．35&;#177;0．26)μmol／g]，水平显著升高(P&;lt;0．01)，细胞存活率(54．68&;#177;6．00)％显著降低(P&;lt;0．01)。1mmol／L SNAP预处理组[细胞存活率为(74．55&;#177;4．11)．CK为(582．45&;#177;140．86)nkat／L，LDH为(5766．15&;#177;941．69)nkat／L，丙二醛为(0．89&;#177;0．16)μmol／g]和缺氧预处理组[细胞存活率为(74．69&;#177;6．14)．CK为(547．94&;#177;125．52)nkat／L，LDH为(5882．34&;#177;844．67)nkat/L，丙二醛为(0．85&;#177;0．12)μmol／g]上述变化明显减轻(P&;lt;0．01)。结论：一氧化氮可抑制脂质过氧化反应，减轻自由基对心肌细胞的损伤，对细胞缺氧复氧损伤具有与缺血预处理相似的保护作用。     

不同强度恒磁场对大鼠主动脉内皮细胞增殖的影响

目的：观察不同强度恒磁场对大鼠主动脉内皮细胞增殖的影响。方法：将体外培养3代的大鼠主动脉内皮细胞分为对照组及不同强度(0．5，1．0，5．0，10．0，100．0，500．0Gs)磁场组。磁场作用时间为48h，用四唑盐比色法测定细胞增殖。结果：与对照组相比，0．5，1．0，5．0Gs磁场组细胞增殖显著高于对照组(分别为0．301&;#177;0．023，0．308&;#177;0．042，0．294&;#177;0．025和0．230&;#177;0．026；t=11．20，8．65，7．92；P&;lt;0．05)；10．0Gs磁场组细胞增殖与对照组相比无明显差异(0．228&;#177;0．034和0．230&;#177;0．026；t=0．26；P&;gt;0．05)；100．0Gs和500．0Gs磁场组细胞增殖显著低于对照组(分别为0．173&;#177;0．022，0．166&;#177;0．015和0．230&;#177;0．026；t=9．17，11．68；P&;lt;0．05)。结论：0．5—5．0Gs的恒磁场可以促进大鼠主动脉内皮细胞的增殖，而100．0Gs以上恒磁场可抑制内皮细胞增殖。     

白藜芦醇预处理对心肌细胞缺血/再灌注损伤的保护作用

目的观察白藜芦醇预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法培养乳鼠心肌细胞,模拟I/R损伤,随机分为阴性对照组、缺血再灌组及白藜芦醇预处理组,采用台盼蓝穿透法及MTT比色法测定细胞活力,检测细胞培养液中LDH活性及心肌细胞Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-ATP酶活力。结果Res预处理可提高心肌细胞活力;稳定心肌细胞膜,抑制LDH释放;保护心肌细胞钠泵和钙泵功能,减轻再灌注损伤。结论白藜芦醇预处理对心肌缺血再灌注损伤有明显保护作用。     

成人外周血平滑肌祖细胞的体外培养

背景：外周血平滑肌祖细胞具有向平滑肌细胞分化的能力。 目的：探索体外分离培养成人外周血平滑肌祖细胞的方法及其生长分化特性。 方法：采用密度梯度离心法分离获得成人外周血单个核细胞,培养12 d后,应用流式细胞仪鉴定分析平滑肌祖细胞并分选纯化,继续培养诱导分化。采用倒置显微镜观察平滑肌祖细胞的形态变化,免疫荧光染色法观察其α-肌动蛋白的表达,同时应用Western blot法检测调宁蛋白、平滑肌肌球蛋白重链的表达情况。此外,观察平滑肌祖细胞的生长特性,绘制生长曲线。 结果与结论：成人外周血单个核细胞诱导培养4 d时开始出现细胞集落,12 d时细胞呈明显梭形。流式细胞仪分析显示,CD14和CD105双阳性的平滑肌祖细胞占贴壁细胞的(71.8±7.2)%。分选纯化的平滑肌祖细胞培养到28 d呈旋涡状生长。间接免疫荧光染色显示,α-肌动蛋白表达呈阳性。Western blot检测显示,调宁蛋白和平滑肌肌球蛋白重链分别于14, 21 d开始表达,并逐渐增加。生长曲线表明,细胞生长至第6天进入对数生长期,第12天后进入平台期。提示通过对外周血单个核细胞的诱导培养,可以获得大量的平滑肌祖细胞。它能稳定增殖,并可进一步分化为平滑肌细胞。     

慢性心房颤动对人心房组织及心房肌细胞的影响

目的　观察慢性心房颤动(AF)对人心房组织及细胞结构的影响。方法　20例风湿性心脏病(RHD)患者分为两组,实 验组为伴慢性AF的患者(n=10),对照组为不伴AF患者(n=10),对两组患者的右心耳组织进行了光镜、电镜观察。结果　实验组 心房纤维结缔组织含量(26.7±7.2)明显高于对照组(12.4±5.9),差异有统计学意义(P<0.01)。实验组心房肌细胞肌纤维溶解、线 粒体增生、糖元累积的发生率分别为67%、71%、76%,明显高于对照组(29%、34%、39%),差异均有统计学意义(P<0.01)。结论　 慢性AF能使心房组织发生纤维结缔组织增生、肌纤维溶解、线粒体增生、糖元累积等解剖重构变化,这些改变可能在AF终止后心房 顿抑的发生和AF的自身维持中起作用。     

恒磁场对血管紧张素Ⅱ作用下血管平滑肌细胞VCAM-1分泌与表达的抑制作用

目的观察不同强度恒磁场对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用下人血管平滑肌细胞(VSMC)分泌与表达血管细胞黏附分子1(VCAM1)的影响。方法采用体外培养第4～6代的人脐动脉VSMC,实验分为6组,即对照组、AngⅡ(1×10-6mol/L)组及AngⅡ+不同磁感应强度(1、5、10、50Gs)的恒磁场组。各组细胞于培养及恒磁场作用12h后收集标本,ELISA法检测VCAM1的分泌量,免疫细胞化学法检测VCAM1的蛋白表达。结果AngⅡ刺激VSMC12h,VCAM1的分泌量与对照组比较显著增高(P<0.05);而5、10、50Gs恒磁场组细胞VCAM1的分泌量显著低于AngⅡ组(P<0.05)。结论5～50Gs的恒磁场可拮抗AngⅡ的作用,抑制VSMC分泌与表达VCAM1。     

约氏疟原虫纯化保护性抗原对鼠疟红内期保护性免疫调节作用的研究 Ⅲ．53kDa抗原的免疫保护性

用５３ｋＤａ抗原单独或加佐剂经不同途径、以不同剂量免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,再用约氏疟原虫非致死株１０５ＰＲＢｃ／只攻击,观察各组小鼠血原虫率变化,比较血清抗体水平。５３ｋＤａ抗原２０μｇ／只加福氏完全佐剂经腹腔注射免疫２次可使小鼠产生有效的免疫保护。以腹腔注射产生的保护作用最好。