浙江省柯萨奇病毒A16 VP1基因特征分析及B细胞抗原表位预测

目的了解浙江省柯萨奇病毒A16(CA16)VP1基因特征及其变迁规律并预测VP1蛋白上B细胞抗原表位。方法在Gen Bank检索并下载35个浙江省CA16流行株及69个已知基因型CA16参考株的VP1基因序列,使用MEGA 6.0软件进行比对分析和构建种系进化树,确定浙江省CA16流行株的基因型,并分析VP1核苷酸和氨基酸同源性及氨基酸变异;运用DNA Star中的Protean模块预测VP1上可能的线性B淋巴细胞抗原表位。结果浙江省CA16病毒基因型为B1基因型(34株)和A基因型(1株)。B1型中以B1b亚型(24株)占绝对优势,其次为B1a亚型(10株)。浙江省CA16流行株VP1核苷酸和氨基酸同源性分别为75.5%~100%和89.5%~100%;VP1区氨基酸序列高度保守,但也存在部分变异。VP1中可能的B细胞抗原表位(氨基酸肽段)有13个,分别为10-20、30-38、57-62、73-79、98-106、118-123、159-168、173-177、184-189、240-246、265-273、274-284和289-295。结论浙江省CA16流行株存在A、B1 2个基因型,B1b和B1a为主要基因型,其VP1区氨基酸变异程度较低,VP1中13个预测的B细胞抗原表位可为CA16疫苗的研制提供科学依据。     

Xpert MTB/RIF和T-SPOT.TB对涂阴肺结核诊断价值的评估

目的评估并比较Xpert MTB/RIF和T-SPOT.TB对涂阴肺结核的诊断价值。方法收集2014年12月至2015年12月天津市海河医院门诊和住院的呼吸疾病患者208例,分为结核组125例和对照组83例,同时对其痰液样本行涂片镜检、液体快速培养和Xpert MTB/RIF检测,对其血液样本行T-SPOT.TB试验。结果 Xpert MTB/RIF诊断涂阴肺结核的敏感性、特异性、ROC曲线下面积(AUC)及优势比(odds ratio,OR)分别为56.5%(95%CI:45.8%~66.8%)、98.8%(95%CI:93.5%~100.0%)、0.777(95%CI:0.708~0.836)及106.60(χ~2=62.87,P0.01);T-SPOT.TB诊断涂阴肺结核的敏感性、特异性、AUC及OR值分别为83.7%(95%CI:74.5%~90.5%)、62.7%(95%CI:51.3%~73.0%)、0.732(95%CI:0.660~0.796)及8.61(χ~2=39.44,P0.01);两者敏感性(χ~2=18.58)和特异性(χ~2=28.03)的差异有统计学意义(P0.05),AUC的差异无统计学意义(Z=1.235,P0.05);Xpert MTB/RIF阴性的涂阴肺结核患者T-SPOT.TB阳性率为70.0%。结论 Xpert MTB/RIF和T-SPOT.TB均有助于早期、快速、准确地辅助诊断肺结核,T-SPOT.TB可以作为Xpert MTB/RIF的后续试验辅助诊断Xpert MTB/RIF阴性的涂阴肺结核。     

实时荧光定量PCR非特异性分析

聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)因灵敏度高、操作简便在各个领域得到了广泛的应用。然而,伴随其高灵敏度存在的非特异性问题在一定程度上限制了其应用。不同于普通检测方法,该技术的非特异性问题主要由可以指数扩增的引物二聚体(primer dimer,PD)引起。对此,引物设计时使用的中部同序引物对可以从根本上避免PD的产生,从而解决由其引起的非特异性问题。该文从PCR的发展和本质、PCR非特异性产生的原因和应对策略等方面作一总结及分析。     

抗线粒体抗体在原发性胆汁性肝硬化筛查中的应用

目的探讨临床医生对抗线粒体抗体(AMA)检测的应用情况。方法回顾性分析上海长征医院2011年1月至2015年8月259例AMA阳性患者信息,并在临床医生提出AMA检测要求组与未提出检测要求组之间进行比较。结果 259例AMA阳性患者中,临床医生提出AMA检测要求的181例(占70%),没有提出AMA检测要求的78例(占30%);确诊为原发性胆汁性肝硬化(PBC)的204例(占80%),未确诊PBC的55例(占20%)。临床医生提出AMA检测要求组感染科和消化科送检比例和PBC确诊比例均显著高于未提出AMA检测要求组(P0.01)。在临床医生提出AMA检测要求组中,送检例数由多到少的科室依次为消化科、感染科、肝移植科、风湿免疫科和其他科室;而在临床医生未提出AMA检测要求组中,送检例数由多到少的科室依次为风湿免疫科、肾内科、神经内科、感染科、消化科和其他科室。在临床医生提出AMA检测要求组中,未确诊PBC 18例,未确诊原因包括已诊断为乙型肝炎肝硬化7例,患者不同意肝活检6例,患者失联5例。在临床医生未提出AMA检测要求组中,未确诊PBC 37例,未确诊原因包括实验诊断科未告知临床医生AMA阳性16例,患者不同意肝活检12例,患者失联6例,实验诊断科告知临床医生但后者未安排患者做进一步检查3例。结论消化科和感染科的临床医生对PBC的认识较为深入,较少出现忽视AMA检测的情况;但风湿免疫科、肾内科和神经内科的临床医生对PBC常常忽视AMA的检测,而这些科室AMA阳性并不罕见。     

3 463例O型血孕妇产前IgG抗A（B）抗体效价分析

目的探讨微柱凝胶法检测IgG抗A(B)抗体效价的临界值,分析抗体效价水平变化和孕妇年龄与新生儿溶血病发生率的关系。方法根据围产期3 463例孕妇及其丈夫血型,分别用微柱凝胶法和试管法检测IgG抗A、抗B抗体效价。根据不同妊娠次数(1次、2次、≥3次),将1 620例O型孕妇分3组,从22周开始每隔4周检测血清中IgG抗A(B)的效价,分别用微柱凝胶法检测IgG抗A、抗B抗体效价,检测新生儿溶血病相关指标。结果微柱凝胶法抗体效价256作为参考值;3 463例围产期孕妇检测IgG抗A(B),IgG抗A检测共2 257人次,其几何平均效价为169,IgG抗B检测共1 711人次,其几何平均效价为143。连续监测1 620例不同孕次数O型血孕妇,首次妊娠896例中IgG抗A(B)抗体效价≥256的共260例(29.02%),2次妊娠248例IgG抗A(B)抗体效价≥256的共107例(43.15%),≥3次妊娠共476例IgG抗A(B)抗体效价≥256的共220例(46.70%);抗体效价滴度分别升高1、2、3个及以上孕妇的平均年龄分别为26.4、27.8、29.9岁,新生儿溶血病的发生率分别为21.66%、40.94%、84.90%。结论检测O型孕妇产前血清中IgG抗体时,微柱凝胶法的敏感性高于传统试管法,微柱凝胶法检测抗体效价的参考值高于试管法;多次妊娠者IgG抗A(B)抗体效价阳性率高于首次妊娠者;且当抗体效价升高2个及以上滴度时,年龄越高,HDN发病率越高。     

广泛耐药肺炎克雷伯菌生物膜形成能力及毒力基因相关分析

目的了解广泛耐药(extensively drug-resistant,XDR)肺炎克雷伯菌生物膜形成能力及毒力基因分布特征。方法收集温州医科大学附属第一医院2013年5月至7月暴发流行的XDR肺炎克雷伯菌15株和同时期分离的敏感肺炎克雷伯菌30株。采用结晶紫染色法检测肺炎克雷伯菌体外生物膜形成能力,PCR方法筛查菌株毒力相关基因携带情况,并比较分析2组菌株生物膜形成能力和毒力基因的分布情况。结果 XDR肺炎克雷伯菌株与敏感菌株形成生物膜A590 nm值分别为0.505 3±0.291 2和0.429 8±0.235 6,二者差异无统计学意义(t=0.87,P=0.38)。15株XDR肺炎克雷伯菌中未检出荚膜多糖基因,而敏感菌株中荚膜多糖基因wzy-K2、wzy-K3和wzy-K57的检出率分别为10.0%、3.3%和6.7%。其他毒力相关基因ure A、wab G、mrk D、fim H和uge在XDR耐药菌株和敏感菌株的检出率均为100.0%,除上述5种毒力基因外,仅1株XDR肺炎克雷伯菌检出kfu BC毒力基因(6.7%)。而敏感菌株中kfu BC、rmp A、wca G、all S、iuc B、iro NB和mag A中检出率分别为20.0%、20.0%、10.0%、16.7%、40.0%、10.0%和10.0%,毒力基因iuc B检出率与XDR菌株相比,差异具有统计学意义(χ2=6.264,P=0.012)。结论 XDR肺炎克雷伯菌的生物膜形成能力与敏感菌株间无明显差异,其毒力谱较为单一,携带的毒力因子种类亦较敏感菌株少。     

肺泡表面活性蛋白D、血管性血友病因子及白介素8对脓毒症诱发急性呼吸窘迫综合征的预测和预后意义

目的从D二聚体(D-dimmer)、血管性血友病因子(von Willebrand factor,v WF)、血小板(Platelet,PLT)、氨基末端B型钠尿肽前体(N terminal-pro brain natriuretic peptide,NT-Pro BNP)、白介素6(interleukin-6,IL-6)、白介素8(interleukin-8,IL-8)、肺泡表面活性蛋白D(Surfactant Protein D,SP-D)中筛选对脓毒症并发急性呼吸窘迫综合征(ARDS)具有预测价值的生物标志物。方法对48例脓毒症合并ARDS的患者和同期40例脓毒症患者进行前瞻性对照研究;在进入ICU 24 h内抽取静脉血标本,定量检测7种生物标志物的浓度/活性水平;构建脓毒症并发ARDS的风险预测模型和死亡预测模型,用Logistic回归筛选具有预测价值的生物标志物和临床指标。结果 SP-D、v WF、IL-8预测脓毒症合并ARDS的ROC曲线下面积分别为0.758(P0.01)、0.783(P0.01)、0.747(P0.01);三者联合时为0.847(P0.001);IL-8、年龄≥60岁、APACHEⅡ积分≥20对脓毒症合并ARDS具有死亡预测价值,OR值分别为12.138(ln IL-8)(P=0.022)、6.157(P=0.040)、7.415(P=0.014)。结论SP-D、v WF、IL-8对脓毒症合并ARDS具有早期预测价值,三者联合可以提高预测准确度;IL-8对脓毒症合并ARDS具有死亡预测价值,建议在临床实践中结合APACHE II评分、年龄综合评估。     

肾细胞癌患者组织中RASSF1A、hMLH1及ALU甲基化水平的分析

目的探讨错配修复基因(h MLH1)、RAS相关区域家族1A基因(RASSF1A)启动子区甲基化以及ALU基因甲基化水平与肾细胞癌(肾癌)的关系。方法巢式甲基化特异性PCR(n MSP)检测15例肾癌组织及其相应癌旁组织中h MLH1、RASSF1A基因启动子区的甲基化状态,联合亚硫酸氢钠限制酶分析方法(COBRA)分析ALU基因甲基化水平。结果 h MLH1基因在肾癌组织中的甲基化率(0.41±0.18)%高于癌旁组织(0.32±0.13)%,差异有统计学意义(t=2.52,P0.05);ALU基因在癌组织中的甲基化率(0.11±0.04)%低于癌旁组织(0.12±0.03)%,差异有统计学意义(t=3.82,P0.05)。而RASSF1A基因在肾癌组织和癌旁组织中的甲基化率分别为(0.75±0.11)%和(0.69±0.12)%,差异无统计学意义(t=1.35,P0.05)。结论 h MLH1基因启动子区甲基化以及ALU基因甲基化可能与肾癌的发病有关,RASSF1A基因启动子区甲基化与肾癌发病无关。     

后腹腔镜下肾部分切除术治疗肾脏肿瘤

【摘要】 目的 探讨后腹腔镜下肾部分切除术的方法和临床应用价值。方法 选取2013年7月至2017年11月在本院收治37例肾脏肿瘤患者施行后腹腔镜下肾部分切除术,其中肾透明细胞癌T1a期23例,T1b期4例,肾错构瘤9例,T1a期肾嫌色细胞癌1例。术中充分游离肾脏和肿块表面脂肪,血管夹阻断肾动脉主干动脉,距肿块边缘正常组织0.5 cm处切除肿块,缝合创面并用Hem-o-lock固定减张。结果 36例成功施行腹腔镜下切除术,其中1例因行肾段动脉阻断未完全,出血较多中转开放手术,2例未行肾动脉阻断。手术时间65～225 min,平均95 min,术中出血量20～1000 mL,平均125 mL,肾动脉阻断时间10～35 min,平均24 min。1例术后2周继发出血,行介入栓塞治疗后出血停止。住院时间11～27 d,平均14.6 d,随访3～27个月,无远期并发症,肿瘤未见复发。结论 后腹腔镜下肾部分切除术治疗肾脏肿瘤创伤小,恢复快,效果显著,值得推广。     

实时荧光定量PCR检测RAGE mRNA方法的建立及初步应用

目的 建立实时荧光定量PCR(RTFQ-PCR)检测人晚期糖基化终末产物受体(RAGE)mRNA的方法并研究其在食管癌组织中的表达.方法 根据Genebank提供的序列在RAGE基因外显子5和6之间设计引物,应用SYBR Green Ⅰ荧光染料,建立检测RAGE mRNA的RTFQ-PCR方法,并对其线性、特异性、灵敏度及重复性进行评价;根据标准曲线计算出食管癌及配对远端正常组织中RAGE mRNA含量,并以RAGE mRNA和18S rRNA含量的比值作为评价RAGE mRNA表达水平指标.结果 线性范围为5.0×103～5.0×109copies/ml,相关系数为-0.98,批内变异系数(CV)为0.63%～8.71%,批间CV为1.52%～12.38%.食管癌及配对远端正常组织RAGE mRNA与18S rRNA浓度的对数比值(-x±s)分别为0.638±0.068和0.334±0.329(P＜0.005),提示食管癌组织RAGE表达上调.结论 RTFQ-PCR检测RAGE mRNA的方法具有灵敏、特异、重复性好等优点,RAGE mRNA表达水平与食管癌存在一定相关性.