二乙酰二脱水卫矛醇诱导白血病HL-60细胞凋亡及其机理

目的研究二乙酰二脱水卫矛醇(DADAG)诱导人白血病HL-60细胞凋亡及其机理。方法MTT法观察DADAG的体外抗增殖作用;透射电镜、DNA梯形条带和流式细胞仪检测HL-60细胞凋亡;Western blotting法和caspase-3检测试剂盒分析DADAG诱导HL-60细胞凋亡与Bcl-2家族成员和caspase-3的关系。结果DADAG明显抑制HL-60细胞增殖和诱导细胞发生凋亡。8 μg·mL^-1 DADAG处理HL-60细胞不同时间后,Bcl-X_L蛋白水平呈时间依赖性地下降,而Bad蛋白水平上调。DADAG处理HL-60细胞24 h后,caspase-3酶活性达峰值。Caspase-3抑制剂z-DEVD.fmk可部分逆转DADAG诱导HL-60细胞凋亡的作用,而caspases广谱抑制剂z-VAD.fmk可完全逆转此作用。结论DADAG诱导HL-60细胞凋亡依赖caspase-3途径的激活,而caspase-3的激活可能与Bcl-2家族成员密切相关。     

荧光定量聚合酶链反应法检测光感受器细胞凋亡大鼠视网膜中半胱氨酸蛋白酶3mRNA的表达

目的：检测半胱氨酸蛋白酶3mRNA在光感受器凋亡大鼠视网膜中的表达，探讨其在光感受器细胞凋亡的发生、发展中的意义。方法：实验于2004—03／12在中山眼科中心眼科学教育部重点实验室完成。选择雌性SD大鼠36只，随机数字表法分为正常对照组6只，N-甲基-N-亚硝脲组30只，后者又分为造模后12h，1，2，3，5d5个时相点．每个时相点6只。正常对照组大鼠经腹腔注射生理盐水；N-甲基-N-亚硝脲组大鼠按体质量一次性腹腔注射N-甲基-N-亚硝脲40mg／kg，分别于造模后12h，1，2，3，5d处死动物，摘除右眼球，立即分离视网膜，提取总RNA，用荧光定量聚合酶链反应法检测视网膜中半胱氨酸蛋白酶3mRNA的含量。结果：纳入动物36只，均进入结果分析。正常对照组、N-甲基-N-亚硝脲组造模后12h，1，2，3，5d5个时相点视网膜中半胱氨酸蛋白酶3mRNA表达量分别为1．52&;#215;10^5，18．35&;#215;10^5，25．14&;#215;10^5，29．25&;#215;10^5，13．72&;#215;10^5．12．24&;#215;10^5。N-甲基-N-亚硝脲腹腔注射后12h视网膜中半胱氨酸蛋白酶3mRNA表达量上升，第2天时最高，达正常对照组表达量的19倍，此后渐下降，第5天表达量仍为正常对照组的8倍。结论：视网膜中半胱氨酸蛋白酶3mRNA表达与光感受器细胞的存亡有关，可作为光感受器细胞凋亡发生、发展的预测指标之一。     

黄芪对N-甲基-N-亚硝脲诱导大鼠光感受器细胞凋亡的预防途径

背景:视网膜色素变性是非炎症性、双侧进行性的视网膜变性,其特征是光感受器细胞因发生凋亡而丢失,最终导致失明。中药黄芪在阻止该病的进程上显示出了良好的前景。目的:观察黄芪对N-甲基-N-亚硝脲致SD大鼠视网膜损伤的保护作用。设计:随机对照动物实验。单位:新乡医学院药学院。材料:实验于2004-03/12在中山大学中山眼科中心药理实验室完成。雌性SD大鼠114只,由中山大学中山医学院动物中心提供,N-甲基-N-亚硝脲为美国Sigma公司产品,黄芪注射液为成都地奥九泓制药厂生产(生产批号:国药准字Z99060535,2mL/支,主要成分为黄芪)。方法:选用雌性SD大鼠114只,30只用于视网膜层形态学分析;30只用于细胞凋亡检测;54只用于胞核内核因子κBp65活性的检测。采用抽签法随机分组,每组6只。于大鼠生后47d,分别经腹腔注射不同剂量的黄芪(2.5,5和10g/kg),1次/d,除对照组外,其余组的大鼠同时于生后50d腹腔注射N-甲基-N-亚硝脲60mg/kg。在N-甲基-N-亚硝脲处理不同时间后处死动物,取眼球,视网膜形态学分析测量周边视网膜的总厚度,TUNEL试剂盒检测光感受器细胞凋亡,转录因子试剂盒分析核因子κBp65的活性。主要观察指标:各组视网膜厚度、凋亡指数和胞核内核因子κBp65的活性比较。结果:黄芪可剂量依赖性地显著增加周边视网膜总厚度和降低N-甲基-N-亚硝脲引起的光感受器细胞凋亡指数。黄芪注射液10g/kg还可时间依赖性地上调视网膜细胞胞核内核因子κBp65的活性。但其对N-甲基-N-亚硝脲引起的中心视网膜损伤无明显的保护作用。结论:黄芪通过上调视网膜细胞胞核内核因子κBp65的活性,抑制光感受器细胞凋亡,从而部分地保护N-甲基-N-亚硝脲引起的视网膜损伤。     

hR24L基因转染对MCF7细胞周期的影响

目的　通过观察人类DNA损伤修复基因hR2 4L转染对MCF7细胞增殖周期的影响 ,进一步了解其功能及作用机制。方法　分别用正义和反义hR2 4L逆转录病毒表达载体(pDor-neo)重组体转染MCF7细胞 ,观察细胞生长速度 ,用Northern印迹杂交检测hR2 4L基因的表达情况 ,并用流式细胞仪检测细胞周期。结果　与转染空载体的细胞相比 ,转染正义hR2 4L重组体的细胞生长较慢 ,其hR2 4LmRNA的表达增加 ;而转染反义hR2 4L重组体的细胞生长较快 ,其hR2 4LmRNA的表达则降低 ;转染后 6h流式细胞仪检测表明 ,转染正义hR2 4L重组体的细胞G2 +M期的比例 (18% )明显高于其它 3种细胞 (6 % )。结论　hR2 4L基因的表达抑制了细胞生长 ,其机制是引起细胞周期阻滞 ,参与细胞周期调控。     

医药学科实验中的理性思维漫谈

医学博士和硕士研究生、高校教师以及与医药学相关研究单位的工作人员是医药学科实验的主体,正确的理性思维有助于科学实验的顺利完成和探讨实验结果成败的原因。     

NF-κB/IκBα在MNU致实验性大鼠视网膜损伤中的变化

目的 观察核因子KappaB（NF-κB）在N-甲基-N-亚硝脲（MNU）诱导大鼠视网膜光感受器细胞凋亡中的的变化,探讨MNU损伤视网膜的机制。方法 给生后50d的雌性SD大鼠一次腹腔注射MNU60mg／kg．分别在MNU处理不同时间后处死动物。光学显微镜观察视网膜的形态学变化;TUNEL试剂盒检测光感受器细胞凋亡：Western blotting分析NF-κB。结果 MNU处理后24h,视网膜光感受器细胞核固缩和光感受器细胞层外节部定向障碍：7d后．外颗粒层和光感受层几乎完全消失。光感受器细胞凋亡在MNU处理后24h达高峰。在凋亡发生的过程中,仅在MNU作用12h和24h后,胞核内有低水平的p65蛋白。相反,胞浆和胞核内的KB蛋白水平呈时间依赖性地显著增加。结论 NF-κB／IKBa信号通路的激活可能介导了MNU所致的视网膜损伤。     

时辰对氯胺酮催眠半数有效量的影响

目的观察时辰对氯胺酮催眠半数有效量(ED50)的影响。方法60只小鼠随机分4组,每组15只。分别在不同时辰2 Am、8 Am、2 Pm和8 Pm腹腔注射氯胺酮,以小鼠翻正反射为观察指标,用序贯法测定各时间点的ED50。结果氯胺酮在2 Am的ED5为(54.57±0.82)mg/kg,ED50的95%可信限38.06-78.22 mg/kg;8 Am的ED50为(49.27±0.12)mg/kg, ED50的95%可信限40.21-60 37 mg/kg;2 Pm的ED50为(42.28±0.21)mg/kg,95%可信限37.35-47.83 mg/kg;8 Pm的ED50为(57.42±0.14)mg/kg,ED50的95%可信限37.51-73.72 mg/kg。时辰2 Pm组的ED50与时辰8Pm组的ED50有显著性差异(P<0.05),余各组之间的ED50无显著变化。结论氯胺酮的催眠作用具有时辰依赖性。     

急性实验性肝损伤对大鼠酮洛芬Ⅱ相代谢和胆排泄的影响

目的探讨通过酮洛芬(KP)代谢参数的变化分析肝脏功能的可能性。方法以KP为工具药,用四氯化碳(CCl_4)和α-萘异硫氰酸酯(ANIT)建立急性肝损伤大鼠模型。体内实验,KP 20 mg·kg~(-1)iv后,测定大鼠血浆、胆汁中KP及其Ⅱ相代谢物酮洛芬葡萄糖醛酸结合物(S-KPG和R-KPG)。体外微粒体孵育实验,测定KP葡萄糖醛酸化反应v_(max)和K_m。结果体内实验结果显示,与对照组相比,CCl_4肝损伤模型大鼠KPG累计胆排泄率降低[(54±18)% vs (90±7)%],ANIT肝损伤模型大鼠的KPG胆排泄几乎完全被抑制[(4.9±2.0)%]。与对照组比,CCl_4和ANIT肝损伤模型组KP药动学参数lgAUC_(0～∞)增加[(5.26±0.19),(5.05±0.10) vs (4.67±0.07)]、~t1/2β延长[(284.2±150.0),(129.0±37.0)min vs (67.8±21.7)min]、清除率降低[(0.046±0.019),(0.080±0.011)mL·min~(-1) vs (0.169±0.026)mL·min~(-1)],血浆KPG浓度明显升高。与对照组比较,ANIT肝损伤模型组血浆S-KPG的AUC_(0～∞)增高了约10倍。微粒体孵育试验表明,与对照组比,CCl_4和ANIT肝损伤模型组大鼠肝脏葡萄糖醛酸转移酶活性有轻至中度降低,v_(max):(0.9±0.5),(1.1±0.6)mmol·g~(-1)·min~(-1) vs (2.9±0.9)mmol·g~(-1)·min~(-1);K_m:(6.8±1.6),(5.4±1.5)mmol·L~(-1) vs (13.6±1.2)mmol·L~(-1)。结论急性肝损伤时KP药代动力学参数发生改变,说明可以通过考察KP的动力学参数的变化,尤其是lgAUC_(0～∞),t_(1/2β),清除率和KPGs累计胆排泄率,来反映肝功能情况。     

黄芪对N-甲基-N-亚硝脲诱导大鼠光感受器细胞凋亡的预防途径

背景：视网膜色素变性是非炎症性、双侧进行性的视网膜变性，其特征是光感受器细胞因发生凋亡而丢失，最终导致失明。中药黄芪在阻止该病的进程上显示出了良好的前景。 目的：观察黄芪对N-甲基-N-亚硝脲致SD大鼠视网膜损伤的保护作用。 设计：随机对照动物实验。 单位：新乡医学院药学院。 材料：实验于2004—03／12在中山大学中山眼科中心药理实验室完成。雌性SD大鼠114只，由中山大学中山医学院动物中心提供，N-甲基-N-亚硝脲为美国Sigma公司产品，黄芪注射液为成都地奥九泓制药厂生产（生产批号：国药准字Z99060535，2mL／支，主要成分为黄芪）。 方法：选用雌性SD大鼠114只，30只用于视网膜层形态学分析；30只用于细胞凋亡检测；54只用于胞核内核因子κBp65活性的检测。采用抽签法随机分组，每组6只。于大鼠生后47d，分别经腹腔注射不同剂量的黄芪（2．5．5和10g／kg），1次／d，除对照组外，其余组的大鼠同时于生后50d腹腔注射N-甲基-N-亚硝脲60mg／kg。在N-甲基-N-亚硝脲处理不同时间后处死动物，取眼球，视网膜形态学分析测量周边视网膜的总厚度，TUNEL试剂盒检测光感受器细胞凋亡，转录因子试剂盒分析核因子κBp65的活性。 主要观察指标：各组视网膜厚度、凋亡指数和胞核内核因子κBp65的活性比较。结果：黄芪可剂量依赖性地显著增加周边视网膜总厚度和降低N-甲基-N-亚硝脲引起的光感受器细胞凋亡指数。黄芪注射液10g／kg还可时间依赖性地上调视网膜细胞胞核内核因子κBp65的活性。但其对N-甲基-N-亚硝脲引起的中心视网膜损伤无明显的保护作用。 结论：黄芪通过上调视网膜细胞胞核内核因子KBp65的活性，抑制光感受器细胞凋亡，从而部分地保护N-甲基-N-亚硝脲引起的视网膜损伤。     

DADAG诱导白血病L1210细胞凋亡

目的 以小鼠白血病细胞系L1210为对象,探讨半胱天冬氨酸蛋白酶（Caspases）家族成员在二乙酰二脱水卫矛醇（diacetyldianhydrogalactitol,DADAG）诱导肿瘤细胞凋亡过程中的作用。方法 MTT法测定DADAG对L1210细胞的杀伤作用;透射电镜和流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot和Caspase-3试剂盒测定Caspase-3活性。结果 与对照组相比,L1210细胞经不同浓度的DADAG（12．0、17．2、24．5、35．0或50．0mg／L）处理72h后,其存活率,分别降至72％、63％、46％、35％和20％。DADAG50．0mg／L处理组的凋亡率、Caspase-3活性和PARP裂解片段较对照组明显升高。Caspase-3抑制剂可部分阻断此过程,而Caspases抑制剂可完全阻断此过程。结论 Caspases家族成员在DADAG诱导L1210细胞凋亡中发挥重要的作用。