二烯丙基二硫对人白血病HL-60细胞凋亡启动过程的影响

背景与目的：二烯丙基二硫（diallyl disulfide,DADS）作为一种抗肿瘤物质日益受到关注。本研究在建立DADS启动HL-60细胞凋亡模型的基础上,研究DADS启动人白血病HL-60细胞凋亡的相关蛋白。方法：提取未处理HL-60细胞和3．6mg／LDADS处理2d的HL-60细胞的总蛋白,双向电泳分离细胞总蛋白质,绘制图谱,PDQuest软件分析,切割差异蛋白质,进行质谱分析、生物信息学分析。Westernblot以及RT-PCR验证部分差异蛋白。结果：对照组和处理组蛋白质表达量相差2倍以上的点有29个,其中22个上调,7个下调。质谱分析和数据库搜索鉴定了9个蛋白质点。其中7个蛋白质点有意义。这些蛋白功能分别与信号转导、基因转录及调控、细胞骨架、细胞新陈代谢等有关。Western blot结果显示DADS处理后Rac2（ras-related C3 botulinum toxin substrate2）蛋白表达明显上调,RT-PCR显示DADS处理后Rac2表达增强。结论：Rac2等蛋白参与了DADS诱导的HL-60细胞凋亡,但其具体机制还有待于进一步研究。     

沉默Chk2基因对DADS阻滞人胃癌BGC823细胞G2/M期的影响

细胞周期检测点激酶1/2(Chk1/2)在参与G2/M期起着重要作用,本研究探讨沉默Chk2基因对二烯丙基二硫(DADS)诱导人胃癌BGC823细胞G2/M期阻滞的影响。采用RNAi 技术沉默BGC823细胞Chk2基因,q-PCR与Western blot检测Chk2 mRNA与蛋白表达。流式细胞术检测DADS与Chk2沉默BGC823细胞周期分布情况。Western blot检测Cdc25C与cyclin B1表达。流式细胞术显示,DADS作用BGC823细胞后,G2/M期细胞呈时间依赖性增加 (P<0.05)。Chk2沉默BGC823细胞Chk2 mRNA与蛋白表达下调 (P<0.05)。Chk2沉默组G2/M期细胞较对照组差异无显著性 (P>0.05)。DADS处理Chk2沉默组与对照组后,两者G2/M期细胞差异无显著性(P>0.05),而较未处理前有明显差异 (P<0.05)。Chk2沉默后,CDC25C和CyclinB1表达较对照组无明显差异 (P>0.05)。但是, DADS处理对照组与Chk2沉默组后,CDC25C和CyclinB1表达较处理前明显降低 (P<0.05)。表明Chk2 沉默对DADS阻滞BGC823细胞G2/M作用没有影响,DADS阻滞G2/M的检查点可能不是Chk2。     

33例鼻咽癌患者治疗前后血清EB病毒VCA-IgA跟踪分析

目的检测鼻咽癌患者临床过程中血清EB病毒VCA-IgA水平的变化情况,分析血清EB病毒VCA-IgA水平与鼻咽癌临床过程的相关性。方法使用酶联免疫吸附(ELISA)方法对33例鼻咽癌患者治疗过程中血清EB病毒VCA-IgA进行跟踪检测,结果采用SPSS13.0软件进行统计分析。结果治疗前,33例鼻咽癌患者中,血清EB病毒VCA-IgA阳性为19例(阳性率57.6%),第一个疗程后,阳性病例降至9例(阳性率36.4%),转阴率为36.8%。随着疗程进行,肿块减小,血清EB病毒VCA-IgA阳性率呈下降趋势。至跟踪的最后疗程,仍有4例阳性患者,但其抗体滴度较治疗前都有明显下降。经治疗,鼻咽癌患者血清EB病毒VCA-IgA阳性率较治疗前显著下降,滴度下降。结论血清EB病毒VCA-IgA抗体水平与治疗呈明显相关性,可作为鼻咽癌疗效判断及监测复发和评价预后的有效指标之一。     

二烯丙基二硫下调β-catenin抑制人胃癌MGC803细胞EMT

目的　研究二烯丙基二硫（DADS）抑制人胃癌MGC803细胞EMT与形态学变化。　方法　应用相差显微镜与透射电镜观察30　mg·L^-1　DADS处理后的MGC803细胞形态学与超微结构的变化。RT-PCR与Western　blot检测β-catenin和EMT标记E-cadherin与Vimentin表达。　结果　30　mg·L^-1　DADS处理MGC803细胞24　h后,相差显微镜显示,与未处理比较,细胞圆形、椭圆形,核浆比值降低,巢状分布,均未见伪足。透射电镜显示,细胞表面微绒毛数目减少,细胞核变规整,核浆比值下降,异型性降低,细胞与细胞之间出现连接结构,细胞器增多。RT-PCR与Western　blot表明,DADS可呈时间依赖性分别下调MGC803细胞β-catenin和Vimentin　mRNA与蛋白和上调E-cadherin　mRNA与蛋白。　结论　DADS可通过下调β-catenin上调E-cadherin与下调Vimentin抑制EMT和伪足形成。     

病理学教学资料库的建立与完善

病理学是一门形态学为主的课程,涵盖了基础病变与临床两方面的内容,是从基础到临床的桥梁,需要丰富的相关资料应用于教学中.为了更好地教学,建立了相对系统和完整的病理教学资料库,并不断丰富其资料,共享资料库.实践证明,病理学教学资料库能方便教师的备课,丰富教学内容,使课堂更生动,提升了教学质量.     

肺损伤预测评分结合不同潮气量机械通气治疗在非急性呼吸窘迫综合征的急性呼吸衰竭患者中的应用效果

目的 探讨肺损伤预测评分(LIPS)结合不同潮气量机械通气治疗在非急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的急性呼吸衰竭患者中的应用效果.方法 选择需进行有创机械通气治疗的急性呼吸衰竭患者100例,均未达到ARDS的标准,根据患者的LIPS和治疗所需潮气量,将患者分为A组(小潮气量高危组)、B组(小潮气量低危组)、C组(常规潮气量高危组)、D组(常规潮气量低危组),比较机械通气治疗后4组患者的PaO2、PaCO2、氧合指数、呼吸力学指标、炎症指标、机械通气时间、住院时间、ARDS发生率、住院28 d内死亡率.结果 机械通气治疗48 h后,B组PaO2、氧合指数高于A组、C组、D组(P<0.05);B组肺顺应性、气道峰压优于A组、C组、D组(P<0.05);B组IL-6、C反应蛋白水平均低于C组、D组(P<0.05);B组机械通气时间、住院时间均少于A组、C组、D组(P<0.05);B组ARDS发生率低于C组及D组(P<0.05).结论 采用LIPS筛选ARDS高危患者,并结合小潮气量机械通气治疗,可改善非ARDS的急性呼吸衰竭患者的临床指标,同时可降低ARDS发生率,提高临床治疗效果.     

二烯丙基二硫在RORα抑制人胃癌细胞上皮间质转化中的作用

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）是否上调维甲酸相关孤核受体α（RORα）抑制人胃癌细胞株MGC803 细胞上皮- 间质转化（EMT）。方法相差显微镜观察MGC803 细胞形态的改变。逆转录PCR（RTPCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）、免疫荧光与免疫组织化学检测EMT 的相关分子表达。裸鼠实验检测DADS 与沉默RORα对移植瘤生长的影响。结果相差显微镜显示,沉默RORα细胞较MGC803 细胞大小与形状差异更明显。DADS作用后,细胞大小较一致,呈圆形或椭圆形,梭形细胞减少,异型性下降。RT-PCR与Western blot显示,DADS 处理后较处理前各组RORα mRNA 与蛋白表达上调（p <0.05）。DADS 作用对照组与空载体组较沉默组效果更为明显（p <0.05）。RORα沉默较对照组和空载体组细胞锌指转录因子（Snail）和波形蛋白（Vimentin）mRNA与蛋白表达上调,而E- 钙黏蛋白（E-cadherin）mRNA 与蛋白下调（p <0.05）。DADS处理后,各组Snail蛋白下调、Vimentin mRNA与蛋白下调和E-cadherin mRNA与蛋白上调（p <0.05）。免疫荧光显示,沉默组细胞Snail与Vimentin阳性表达较对照组增强,而E-cadherin阳性表达减弱。DADS作用后,结果相反。裸鼠移植瘤实验显示,RORα沉默组移植瘤较对照组生长加快和体重增加（p <0.05）,增殖细胞核抗原（Ki-67）、Snail、CD34及Vimentin 阳性表达较对照组增加,而E-cadherin阳性降低。DADS 处理各组移植瘤生长与体积减慢与减小,Ki-67、Snail、CD34与Vimentin阳性表达较对照组减弱,而E-cadherin阳性表达增强。结论DADS 通过上调RORα 可体内外抑制人胃癌MGC803 细胞EMT。     

沉默RORα通过Wnt信号通路促进人胃癌细胞增殖与迁移侵袭

目的：在构建沉默RORα人胃癌MGC803细胞的基础上,观察沉默RORα对MGC803细胞增殖与迁移侵袭的影响。方法：软琼脂集落形成实验、流式细胞术、细胞迁移和侵袭实验检测RORα沉默对MGC803细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭能力的影响。RT-PCR与Western blot检测RORα、Wnt1、MMP-9与TIMP3 mRNA与蛋白表达。结果：集落形成实验显示,沉默组的集落形成率128.1%明显高于对照组和空载体组(P<0.05)。流式细胞术显示,沉默组S期细胞百分率39.9%较对照组26.1%和空载体组27.4%明显增加(P<0.05)。迁移实验显示,沉默组迁移距离(1.76±0.19) mm明显高于对照组(1.32±0.14) mm和空载体组(1.29±0.17) mm (P<0.05)。侵袭实验显示,沉默组穿膜细胞(172±27)个明显多于对照组(147±17)个和空载体组(149±14)个(P<0.05)。RT-PCR与Western blot表明,沉默RORα可显著上调Wnt1与MMP-9 mRNA与蛋白与下调RORα与TIMP3 mRNA与蛋白。结论：沉默RORα可通过Wnt信号通路上调MMP-9和下调TIMP3促进MGC803细胞增殖与迁移侵袭。     

二烯丙基二硫诱导人鼻咽癌CNE2细胞凋亡及其可能的分子机制

背景与目的：二烯丙基二硫（DADS）是大蒜中的一种脂溶性单体化合物,对多种肿瘤细胞有促凋亡作用.本实验旨在探讨DADS抑制人鼻咽癌CNE2细胞增殖与诱导凋亡的生物学效应及可能的分子机制.方法：分别采用MTT、光学显微镜、流式细胞仪、DNA琼脂糖凝胶电泳与Western blot检测DADS抑制CNE2细胞增殖与诱导凋亡作用及Bcl-2、Bax和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase 3）蛋白的表达.结果：MTT结果显示,50、100、200及400 μmol/L DADS作用CNE2细胞48 h,抑制率分别为3.66%、14.25%、29.66%及61.28%,呈浓度依赖性（P＜0.05）.形态学观察发现,DADS处理24 h后,部分CNE2细胞变圆,体积明显缩小,胞质强嗜酸性,核固缩、深染,核染色质积聚至核膜周边,呈现凋亡细胞形态学改变.流式细胞术分析显示,50、100、200和400 μmol/L DADS作用24 h,凋亡率分别为（10.8±1.3）%、（14.8±1.1）%、（21.7±2.0）%及（29.8±2.6）%,呈浓度依赖性诱导CNE2细胞凋亡（n=3,P＜0.05）.200及400 μmol/L DADS分别作用CNE2细胞24 h后,DNA凝胶电泳出现典型梯形条带.Western blot检测显示,50、100、200和400 μmol/L DADS处理CNE2细胞24 h后,Bcl-2蛋白与β-Actin的灰度值比分别是1.92±0.21、1.21±0.18、0.89±0.14及0.41±0.09,与对照组（2.24±0.26）比较,差异有显著性（P＜0.05）;Bax蛋白与β-Actin的灰度值比分别是0.78±0.14、1.12±0.19、1.54±0.22及2.08±0.27,与对照组（0.33±0.08）比较,差异有显著性（P＜0.05）;随浓度的增加,Bcl-2蛋白下调,Bax蛋白表达上调.200、400 μmol/L DADS处理CNE2细胞24 h后,与对照组相比,Caspase 3酶原蛋白条带变细并且可见到蛋白裂解产物,表明DADS可以促进Caspase 3的活化.结论：DADS具有抑制人鼻咽癌CNE2细胞增殖和诱导凋亡的作用,其机制可能与Bcl-2蛋白下调,Bax蛋白表达上调导致Bcl-2/Bax比值下降,促进Caspase 3的活化有关.     

胃癌中RORα蛋白的表达及临床病理意义

目的观察维甲酸相关孤核受体α(Retinoid acid receptor related Orphan Receptorα,RORα)蛋白在胃癌中的表达,探讨其与胃癌发生、发展的关系,为寻找胃癌肿瘤标记物提供一定的实验依据。方法应用组织芯片技术及免疫组化SP法检测90例胃癌组织、48例癌旁胃黏膜组织与22例正常胃黏膜组织中RORα的表达,研究RORα与胃癌发生、发展的关系。结果 RORα蛋白在胃癌组织中表达下调,正常胃黏膜、癌旁胃黏膜和胃癌组织中RORα蛋白阳性率分别为83.36%(19/22),56.25%(27/48)和24.44%(22/90),3者相比差异有显著性(P<0.05)。高分化腺癌、中分化腺癌、低分化腺癌、黏液腺癌和印戒细胞癌中,RORα阳性率分别为45.00%(9/20)、27.59%(8/29)、14.29%(3/21)、11.11%(1/9)和9.05%(1/11)。高分化腺癌RORα阳性率高于低分化腺癌(P<0.05)。结论 RORα蛋白下调与胃癌的发生、发展相关,且可能与胃癌的分化程度有关。