发现大肠埃希菌喹诺酮耐药株gyrA基因新亚型和aac（6′）-Ⅰ b-Cr、mdfA基因

目的 了解大肠埃希菌(E.coli)对常用抗菌药物的耐药性及喹诺酮类DNA旋转酶基因、多药外排基因及氨基糖苷类修饰酶基因（AMEs）的存在情况。 方法 收集2006年1月~2008年10月本院临床标本分离的E.coli 60株,用K-B法检测细菌对16种抗菌药物的敏感性,用PCR及测序技术分析6种喹诺酮类基因(gyrA、qnrA、qnrB、qnrS、qepA、mdfA)和1种AMEs基因aac(6′)-Ⅰ b。 结果 60株菌对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率均为78.4%（47/60）;55株菌存在gyrA基因突变,其中3株菌gyrA与美国NCBI中已登录的gyrA基因序列不同,为新亚型;mdfA基因均阳性;对9株aac(6′)-Ⅰ b基因PCR阳性产物进行测序,证实5株携带aac（6′）-Ⅰ b-Cr双功能酶基因。 结论 gyrA基因突变是E.coli对喹诺酮类药物最主要的耐药机制,耐喹诺酮类药物的E.coli株中发现aac（6′）-Ⅰ b-Cr基因和gyrA新亚型,E.coli检出mdfA基因为中国大陆地区首次报道。     

炎症性肠病患者粪便钙卫蛋白水平分析

目的 分析炎症性肠病（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｂｏｗｅｌ ｄｉｓｅａｓｅ， ＩＢＤ）患者粪便钙卫蛋白（ｆｅｃａｌ ｃａｌｐｒｏｔｅｃｔｉｎ， ＦＣ）水平。 方法 选择 ２０２０ 年 ４ 月—２０２１ 年 ３ 月淮安市第一人民医院门诊及病房收治的 ＩＢＤ 患者 ９８ 例。 收集同期体检健康者 ３７ 例作为健康人对 照组。 用胶体金免疫层析法检测两组 ＦＣ 含量，并收集血液常规检测、血液学生化检测指标数据，分析两组各指标差异。 结果 ＩＢＤ 组患者 ＦＣ 水平和中性粒细胞与淋巴细胞比值（ＮＬＲ）显著高于健康人对照组，差异均有统计学意义（Ｚ 分别为－７．０５８、 －６．７０４，Ｐ＜０．００１）。 ＦＣ 水平与 ＮＬＲ 呈正相关（ｒ ＝ ０．６３６，Ｐ＜０．００１），与总胆红素（ ＴＢｉｌ）、总蛋白（ ＴＰ）、清蛋白（ Ａｌｂ）、钙离子 （Ｃａ）呈负相关（ｒ 分别为－０．５２９、－０．３４１、－０．４０４、－０．３４１，Ｐ＜０．０５），与血红蛋白（Ｈｂ）无相关性（ｒ ＝ －０．１７６，Ｐ ＝ ０．１０１）。 结论 ＦＣ 水平在 ＩＢＤ 患者中显著升高，可作为肠道炎症指标。     

关于临床细菌耐药性检测的几点思考

抗菌药物的广泛和不恰当的使用,引起了耐药菌株的大量产生.在传统感染未完全控制的同时,新发传染病及其病原体又不断涌现.虽然新的抗感染药品不断问世,但随之而来的是细菌通过各种变异对新药物的新一轮耐药,这一过程所需要的时间远远短于研发新药所需要的时间.     

微小RNA多态性与中国女性人群乳腺癌发病及病理特征的相关性研究

目的探讨6个微小RNA(microRNA)多态性位点(rs11614913,microRNA-196a2;rs3746444,hsa-mir-499;rs2910164,microRNA-146a;rs2292832,microRNA-149;rs6505162,microRNA-423;rs895819,microRNA-27a)与中国女性乳腺癌发病风险及病理特征的相关性。方法采用病例对照研究,选取350例乳腺癌患者为病例组及350名正常女性为对照组,采用Massarray SNP技术检测6个多态性位点的基因型,采用免疫组化法检测乳腺癌组织中的雌激素受体及孕激素受体表达,分析各基因型与乳腺癌发生的关系及与乳腺癌病理参数的关系。结果 rs3746444GG基因型在病例组中(OR=1.71,95%CI:1.16~2.52)的频率显著高于对照组。分层分析结果显示,在绝经后的人群中,rs3746444GG基因型病例组中的频率(OR=2.19,95%CI:1.16~4.15)显著高于对照组。rs3746444GG基因型在肿瘤分期0~Ⅱ组(OR=1.92,95%CI:1.17~3.13)、淋巴结转移组(OR=2.20,95%CI:1.28~3.79)、孕激素受体阴性组中(OR=2.19,95%CI:1.25~3.82)分布频率均显著高于正常对照组。在绝经后人群中,rs2910164GG基因型在病例组中(OR=2.19,95%CI:1.16~4.15)的分布频率显著高于对照组。而在绝经前的人群中,rs2910164GG基因型在病例组中(OR=0.49,95%CI:0.25~0.98)的分布频率显著低于对照组。结论rs3746444GG基因型与乳腺癌发病风险相关,特别是在绝经后人群中风险更高。rs2910164GG基因型与乳腺癌的发病风险相关性与妇女是否绝经有关。     

巨噬细胞集落刺激因子对巨噬细胞极化及卵巢癌细胞侵袭、转移的影响

目的探讨卵巢癌微环境中巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)促进M2型巨噬细胞的极化和浸润,及其对于癌细胞侵袭、转移的影响。方法选取卵巢癌细胞系A2780和SKOV3与THP-1来源巨噬细胞,在体外构建共培养模型,ELISA和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测培养基中M-CSF含量及其mRNA的表达水平。流式细胞术分析CD68~+CD163~+M2型巨噬细胞的极化比例。Transwell迁移试验检测2种卵巢癌细胞系与M2型巨噬细胞共培养后侵袭、转移能力的变化。免疫组化染色法检测卵巢癌(52例)及同期卵巢良性肿瘤(18例)石蜡组织切片中M-CSF、CD68~+、CD163~+和E-钙黏蛋白(E-cad)的表达及其相关性,并分析M-CSF与卵巢癌患者临床病理特征的关系。结果 A2780和SKOV3细胞与巨噬细胞共培养后,其上清中M-CSF浓度明显高于2种癌细胞单独培养组(t分别为14.315、12.338,P均0.01)。荧光定量PCR结果显示,升高的M-CSF来源于共培养后卵巢癌细胞的分泌(t分别为29.915、36.826,P均0.01)。CD68~+CD163~+M2型巨噬细胞在A2780和SKOV3共培养组的极化比例分别为(6.14±0.50)%和(7.32±0.67)%,明显高于单独培养组(1.82±0.34)%,差异有统计学意义(t分别为12.289、12.711,P均0.01)。Transwell试验结果显示,2种卵巢癌细胞共培养后其侵袭能力增强(24.00±4.81 vs 75.20±6.42,t=11.058;18.40±2.31 vs 61.60±9.66,t=7.537,P均0.01)。卵巢癌组织中M-CSF的表达与CD68~+、CD163~+阳性细胞数正相关且均高于对照组(r分别为0.690、0.596,P均0.01),而E-cad阳性表达则与之呈负相关且低于对照组(r=-0.566,P0.01)。M-CSF表达在不同肿瘤FIGO分期、分化程度和淋巴结转移情况组间差异有统计学意义(χ~2分别为6.240、6.612、4.544,P均0.05)。结论卵巢癌微环境中M-CSF的表达升高诱导CD68~+CD163~+M2型巨噬细胞的极化和浸润,进而促进癌细胞的侵袭、转移。     

基于PCR反向斑点杂交技术的32型生殖道人乳头瘤病毒基因分型方法的建立

目的建立基于PCR反向斑点杂交技术(PCR-RDB)的32型生殖道人乳头瘤病毒(HPV)基因分型方法。方法设计并合成基于MY09/11的HPV型特异性引物和探针;以HPV载体和临床样本为模板,用自建的PCR-RDB法对300例临床宫颈脱落细胞进行HPV分型检测,并与商品化的PCR-RDB法检测结果进行比较。结果自建的PCR-RDB法的特异性、准确性和重复性良好,其对39和51型HPV的最低检测限为50拷贝/反应,其余各型别HPV最低检测限为5拷贝/反应。用自建的PCR-RDB法对300例临床样本进行HPV分型的总阳性率、单一感染率和多重感染率分别为18.67%(56/300)、12.33%(37/300)、6.33%(19/300),与商品化试剂的检测结果均无统计学意义(χ2分别为0.744,0.597和0.118,P均0.05)。两法一致性检验的Kappa值为0.889(P0.01)。结论成功建立了灵敏度、特异性高,重复性良好,适合临床上对32型HPV分型的PCR-RDB法。     

风疹病毒复合多表位肽的构建、表达、纯化及其诊断效能的初步评价

目的采用基因工程技术构建风疹病毒复合多表位肽,探讨其对风疹病毒感染的血清学诊断价值。方法根据风疹病毒主要抗原分子E1、E2,设计并构建风疹病毒复合多表位肽的重组表达载体,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在大肠埃希菌Rosetta中进行诱导表达,并用Ni2+螯合柱亲和纯化获得复合多表位肽;经western blot鉴定其对风疹病毒感染后的Ig M阳性血清的免疫反应性;建立基于风疹病毒复合多表位肽的Ig M-ELISA检测方法,用于风疹病毒感染患者中血清Ig M抗体的检测。结果成功构建风疹病毒复合多表位肽,在大肠埃希菌Rosetta中获得了高效表达;纯化后的风疹病毒复合多表位肽经western blot分析显示,复合多表位肽对风疹病毒Ig M阳性血清具有较好的免疫反应性;Ig M-ELISA法检测结果表明,重组的复合多表位肽能够检测出风疹病毒感染后Ig M阳性血清,与Ig M阴性血清不发生反应。结论制备的风疹病毒复合多表位肽具有良好的抗原性,可用于风疹病毒感染患者Ig M抗体的检测,提高风疹病毒感染的诊断效能。     

微小RNA结合位点基因多态性与女性乳腺癌发病风险

目的探讨微小RNA结合位点基因的5个多态性位点与乳腺癌的相关性。方法纳入女性乳腺癌病例及健康对照各400例。用Mass ARRAY时间飞行质谱技术分析5个多态性位点的多态性。结果 5个位点与乳腺癌的发病风险无相关性(P均0.05),而在绝经前的女性中,rs11097457 TC/CC(OR调整后=0.63,95%CI:0.41~0.98)、rs1434536 TC(OR调整后=0.61,95%CI:0.39~0.96)及TC/TT(OR调整后=0.64,95%CI:0.42~0.98)、rs1970801 GT(OR调整后=0.62,95%CI:0.39~0.98)及GT/TT(OR调整后=0.62,95%CI:0.40~0.95)基因型与乳腺癌的低风险相关。5个基因多态性位点与乳腺癌的分期及淋巴结转移无相关性(P均0.05)。结论 rs11097457、rs1434536、rs1970801与绝经前女性的乳腺癌的低发病风险相关。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PFGE分型与医院感染暴发的分子流行病学研究

目的了解医院感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的同源性及院内流行特征,为临床控制MRSA感染、制定合适的预防控制措施提供依据。方法收集2011年6-7月全院患者各类标本中分离出的MRSA 36株,金黄色葡萄球菌鉴定采用法国生物梅里埃公司的VITEK-2全自动微生物分析系统,根据美国CLSI标准用头孢西丁K-B法确认MRSA;运用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对医院感染MRSA进行基因分型,并进行流行病学分析。结果临床分离的36株MRSA,PFGE分型为6型8个亚型,其中以A型为主;在研究期间,NICU及ICU发生两次MRSA感染暴发。结论 MRSA在NICU及ICU易发生交叉感染;PFGE是医院感染暴发及流行病学的较好的研究手段。