骨肉瘤VEGF表达及VEGF抗体抑制血管生成的实验研究

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）表达与骨肉瘤血管生成和预后的关系,以及VEGF抗体抑制骨肉瘤细胞OS-732诱导血管生成的作用和可能机制,为以VEGF为靶点治疗骨肉瘤提供实验依据。方法应用免疫组化和形态计量方法,检测80例骨肉瘤VEGF表达、肿瘤微血管密度（MVD）,以及OS-732血管生成相关因子的表达。进一步应用鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）模型观察VEGF抗体对OS-732诱导血管生成及肿瘤细胞生长的抑制作用。结果（1）骨肉瘤VEGF表达与肿瘤微血管密度（MVD）及预后密切相关。（2）OS-732表达VEGF和BFGF,而且VEGF表达强度明显高于BFGF,OS-732具有很强的诱导血管生成能力。（3）VEGF抗体干预实验结果显示VEGF抗体组肿瘤区血管密度明显低于PBS对照组,细胞凋亡指数显著高于PBS对照组,而增殖指数两组差异无统计学意义。同时,VEGF抗体组凋亡的微血管内皮细胞增多,增殖期内皮细胞少见。结论VEGF是骨肉瘤重要的血管生成因子,其表达可能是评估骨肉瘤预后的一项有价值的指标。VEGF抗体能够抑制内皮细胞增殖,促进内皮细胞凋亡,显著抑制骨肉瘤OS-732血管形成,并可能通过抑制血管形成而促进肿瘤细胞凋亡,达到抑制瘤细胞生长的作用。该结果提示VEGF可以作为骨肉瘤抗血管生成治疗的潜在靶分子。     

血清肿瘤标志物检测免疫分析方法研究进展

肿瘤标志物(tumor marker,TM)是指在肿瘤的发生和增殖过程中,由肿瘤细胞本身所产生的或者是由机体对肿瘤细胞反应而产生的,反映肿瘤存在和生长的一类物质,包括蛋白质、激素、酶、多胺及癌基因产物等。肿瘤标志物在肿瘤普查、诊断、判断预后、评价疗效和高危人群随访观察等方面都具有较大的实用价值。目前,对血清中肿瘤标志物的检测免疫分析法,将生物化学、核医学、免疫学、细胞学、病理学、分子生物学等诸多学科融合在一起。     

多肿瘤标志物蛋白芯片检测及判别函数在妇科肿瘤诊断中的应用

目的 探讨多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统(简称C-12)及判别函数在妇科肿瘤临床诊断中的应用.方法 用该系统测定分析77例妇科恶性肿瘤、76例妇科良性病变及353例健康女性体检者血清12种肿瘤标志物(CA19-9、NSE、CEA、CA242、CA125、CA153、AFP、Ferritin、free-PSA、PSA、HCH、β-HCG)的水平. 结果 妇科肿瘤组的检测阳性率(62.33%)显著高于良性病变和对照组,单项检测阳性率以CA125最高(36.36%),CA125、CEA、CA19-9两两联合及三项联合检测阳性率均高于单项检测,其中又以三项联合检测为最高(50.29%),建立诊断判别函数对妇科肿瘤诊断准确率78.50%,显著高于单项或联合检测.结论 运用多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统及判别诊断函数可明显提高妇科恶性肿瘤诊断的准确率,有较高的临床参考价值.     

双功能基因APE1敲低后人体骨肉瘤细胞基因表达谱变化的研究

目的 探索APE1敲低后骨肉瘤细胞恶性表型受抑的可能机制,以及APE1相互作用的可能分子.方法 应用免疫印迹和AP核酸内切酶活性检测确证合成APE1 siRNA对人体骨肉瘤细胞HOS APE1基因的敲低作用;应用GEArrayTMQ系列cDNA微阵列研究HOS细胞APE1敲低后基因表达谱的改变.结果 APE1 siRNA对HOS细胞APE1基因具有特异性"敲低"作用,其抑制效率为91.5%.APE1抑制对cDNA微阵列六族途径均有影响,其中对细胞周期族基因影响较少;96个基因中有42个基因有明显变化(43.8%),其中CDK4、FGFR2、KAI1和NCAM1表达上升,其余38个基因表达均呈下降.结论 APE1的敲低对骨肉瘤细胞的细胞周期及DNA损伤、细胞凋亡、信号转导、细胞黏附、血管生成、肿瘤转移途径基因均有影响.     

小脑桥脑角恶性淋巴瘤1例报告

患者女性,４７岁,渐进性头晕头痛３月,加重伴恶心呕吐,站立不稳２０ｄ入院。查体：右面部麻痹,右眼球外展不能,右眼视乳头水肿,右下肢及右上肢麻木,站立不稳,共济失调,肌力ＩＶ级,ＣＴ发现左侧小脑桥脑角有一类圆形均质密度稍高影,肿瘤边缘较清楚,瘤体周围有不规则的低密度影,增强后肿瘤密度均匀增高,相近颅骨无破坏,听神经管未受侵犯。ＭＲＩ Ｔ１加权像显示右小脑桥脑角有一低密度肿块,Ｔ２加权像显示等密度肿块,向第四脑室和桥脑挤压。血管造影术显示该肿瘤无血管,脑脊液细胞学检查蛋白■１．０ ｇ／Ｌ淋巴细胞在（０…     

多肿瘤标志物蛋白质芯片检测系统对结直肠癌诊断的临床意义

目的探讨多肿瘤标志物蛋白质芯片检测系统（C-12）在结直肠癌诊断中的临床意义，并建立联合诊断结直肠癌的函数，以提高肿瘤标志物诊断结直肠癌的准确率。方法采用蛋白质芯片法检测239例结直肠癌、79例结直肠良性病变和1203例正常体检者12项肿瘤标志物的水平，并建立联合诊断函数。结果（1）结直肠癌组蛋白芯片的阳性率为71．97％，显著高于结直肠良性病变和正常体检组。C-12芯片检测结直肠癌的灵敏度是71．97％，特异度是55．7％，阳性预测值是83．09％，阴性预测值是39．64％；联合检测的阳性率显著高于单项肿瘤标志物的检测（P〈0．05）。（2）CA199、CEA、CA242、AFP、争HCG，HGH以及CA125阳性率明显高于良性病变组和正常体检组（P〈0．05），同时CA199、CEA、CA242和CA125联合检测的灵敏度和准确率明显高于单项检测指标。（3）CA199、CEA、CA242以及CA125表达强度和肿瘤预后相关。（4）建立结直肠癌判别诊断函数，对肿瘤的诊断准确率为86．4％．显著高于联合检测。结论联合检测多肿瘤标志物对结直肠癌的诊断和预后判断具有重要意义。本研究建立的联合诊断函数能提高结直肠癌诊断准确率。     

免疫组化法检测大肠肿瘤DNA修复基因APE1表达和细胞定位

目的 探讨DNA修复基因脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(apurinic/apyrimidinic endonuclease 1,APE1)在大肠癌发生、发展中的作用.方法 应用免疫组化PowerVisionTM法检测125例大肠癌、72例大肠腺瘤、60例癌旁大肠黏膜和40例正常大肠黏膜中APE1的表达和细胞定位,并分析其与大肠癌临床病理之间的关系.结果 正常大肠黏膜APE1呈胞核表达,大肠腺瘤和大肠癌组织APE 1表达特征发生改变,呈胞核表达、单纯胞浆表达或核浆共同表达,大肠癌组织APE1胞浆异位表达率为73.6%,大肠腺瘤APE1胞浆异位表达率为83.3%,二者差异无统计学意义(P＞0.05),但均显著高于癌旁大肠黏膜(10%)和正常大肠黏膜(0) (P＜0.01).APE1胞浆异位表达与大肠癌临床分期和淋巴结转移有关(P＜0.01、P＜0.05).结论 APE1胞浆异位表达可能在大肠癌的发生、发展中起重要作用.     

多肿瘤标志物蛋白芯片联合诊断胰腺癌判别函数的建立和应用

目的 建立12种肿瘤标志物蛋白芯片联合诊断胰腺癌的判别诊断函数,以提高肿瘤标志物诊断胰腺癌的准确率.方法 用C-12蛋白芯片检测系统测定分析77例胰腺癌患者,39例胰腺良性病变患者和1 203例健康体检者血清中常见的12种肿瘤标志物(CA19-9,NSE,CEA,CA242,β-HCG,Ferrintin, AFP,free-PSA,PSA,CA125,HGH,CA153),分析比较单项指标及联合指标的阳性率,建立判别诊断函数.所有胰腺癌患者均经细胞学或组织学确诊.结果 胰腺癌患者的阳性率(72.73%)显著高于胰腺良性病变患者(48.72%)和健康体检者(10.59%),差异有统计学意义(P＜0.01).有诊断意义的指标是CA19-9、CEA和CA242(P＜0.01),3项联合检测敏感度最高为71.43%,准确率最高为73.59%.建立的判别诊断函数诊断准确率为88.37%,较3项联合检测的准确率显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 本研究所建立的多指标联合判别函数诊断胰腺癌的准确率较CA242 、CA19-9 和CEA 联合检测的诊断准确率明显升高.     

多肿瘤标志物蛋白芯片对泌尿系肿瘤和男性生殖系肿瘤诊断的临床价值

目的：探讨多肿瘤标志物蛋白质芯片在泌尿系肿瘤和男性生殖系肿瘤诊断中的临床应用价值,并建立12项肿瘤标志物联合诊断泌尿系和男性生殖系肿瘤的函数。方法：采用C-12多肿瘤标志物蛋白质芯片检测57例泌尿系肿瘤患者、38例男性生殖系肿瘤患者、11例泌尿系良性病变患者、25例男性生殖系良性病变患者,以及1203例正常体检者。所有患者均经病理学、影像学或临床确诊。结果：用C-12芯片检测泌尿系肿瘤的灵敏度是49.12%,特异度是81.81%,阳性预测值是93.33%,阴性预测值是23.68%;男性生殖系肿瘤的灵敏度是62.16%,特异度是48.00%,阳性预测值是64.86%,阴性预测值是46.15%。除前列腺癌外,C-12芯片联合检测的阳性率在泌尿系肿瘤和其他男性生殖系肿瘤中显著高于单项肿瘤标志物的检测（P〈0.05）。建立的诊断判别函数对肾癌、膀胱输尿管肿瘤、前列腺癌、睾丸癌的诊断准确率分别为81.3%、94.5%、94.0%、91.0%,显著高于单项标志物检测（P〈0.01）。结论：除前列腺癌外,用多肿瘤标志物蛋白质芯片检测泌尿系和男性生殖系肿瘤可提高诊断的灵敏度,优于单项肿瘤标志物;诊断判别函数可明显提高泌尿系及男性生殖系肿瘤诊断的准确率,具有一定的临床参考价值。     

APE1 siRNA表达载体的构建及其对骨肉瘤细胞APE1表达的抑制作用

目的构建DNA损伤修复基因脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶APE1 siRNA表达载体pSilence APE1,观察其对骨肉瘤细胞HOS和9901APE1蛋白表达的抑制作用.方法设计合成APE1 siRNA cDNA序列与线性化pSilence 2.0-U6质粒连接后构建APE1 siRNA表达载体pSilence APE1,经酶切鉴定和测序确认.应用免疫组化检测骨肉瘤细胞APE1蛋白的表达,同时应用免疫印迹检测其对APE1基因的敲低作用的量效和时效关系.结果通过双酶切鉴定和测序分析,成功构建了APE1 siRNA表达载体.免疫组化和免疫印迹证实pSilence APE1对骨肉瘤细胞APE1基因具有特异性"敲低"作用,其抑制APE1基因表达效率为72%～95%,而且其抑制作用以3.0μg pSilence APE1转染第3天最为显著.结论成功构建了APE1 siRNA表达载体pSilence APE1,并且该载体能有效地敲低骨肉瘤细胞APE1基因表达.