供肝NK细胞对肝移植免疫反应中NF-κB 活性和IL-15表达的影响

 目的：观察大鼠移植肝组织内和外周血白细胞介素15（IL-15）的表达水平及脾组织内核因子κB(NF-κB)的表达活性变化,探讨供肝NK细胞减轻肝移植术后急性排斥反应的机制。方法：Lewis大鼠为肝移植供体,BN大鼠为受体,改良“二袖套”法建立大鼠肝移植模型。应用［60Co］射线照射清除供体免疫细胞和经门静脉回输供肝NK细胞等技术,实验设立3组。A组: 急性排斥组;B组: 单纯［60Co］照射排斥组;C组: ［60Co］照射+供肝NK细胞门静脉回输排斥组。移植术后第1、3、7天收集受鼠外周血清,ELISA法检测IL-15分泌水平,同时切取移植肝行病理学检查,Western blotting法检测移植肝组织IL-15蛋白的表达,凝胶电泳迁移实验（EMSA）检测受鼠脾组织NF-κB表达活性。另外每组各设亚组观察移植后大鼠自然生存时间。结果：B组术后大鼠自然存活时间较A、C组明显缩短,术后发生急性排斥反应程度较A、C组严重;术后第3、7天,3组受鼠外周血IL-15水平均较第1天时显著升高;移植术后第3、7天,B组大鼠血清IL-15 浓度均显著高于A、C组;术后第3、7天,移植肝组织中B组IL-15表达也显著高于A、C组,受鼠脾组织中B组NF-κB表达活性亦显著高于A、C组。结论：IL-15可能作为肝移植急性排斥反应的监测指标,对急性排斥反应的早期诊断和移植物的预后估计具有临床指导意义;供肝NK细胞可能通过下调NF-κB的表达活性来调节IL-15的水平,进而减轻肝移植术后急性排斥反应。     

酸性微环境下大蒜素增强大鼠自然杀伤细胞的功能活性

Objective To investigate the role of allicin on rat nature killer (NK) cell activity in vitro under acidic microenvironment, and its possible mechanism. Methods CD3- NKR-P1+ NK cells isolated from the rat spleen were cultured in the complete RPMI 1640 medium ( pH 5. 6, pH 6. 5, or pH 7. 2 respectively), and treated with allicin at final concentration of 30 mg/L. Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) was used to determine supernatant interferon (IFN)-γ levels. The percentage of NK cells proliferation and apopotosis was analyzed by flow cytometry. NK cell cytotoxicity toward YAC-1 tumor cells was detected by LDH release assay. Results Proliferation and cytotoxicity of NK cells were significantly suppressed by acidic microenvironment in vitro. Under the cultured condition of acidic pH below 7. 2, allicin seemed to promote NK cells proliferation, which reached to highest level of 33% at pH 5. 6 cultured for 16 h. Correspondingly, at pH of 5. 6, allicin induced a marked increase of IFN-γ concentration in the supernatant from (50. 07 ± 0. 38) (cultured for 4 h) to (64. 59 ± 0. 09) ng/L ( cultured for 16 h). The cytotoxicity of NK cells toward YAC-1 tumor cells was also found strongest under the condition of pH 5. 6 cultured for 16 h. Conclusion Allicin favored to enhance the cytotoxicity of NK cells under the acidic cultured condition, which might be related to the increase of IFN-γ production.     

大蒜素对大鼠NK细胞肿瘤杀伤活性的影响

目的: 研究大蒜素对体外培养的大鼠NK细胞肿瘤杀伤活性的影响,并初步分析其可能机制。方法: 免疫磁珠分选法分离大鼠脾脏NK细胞,流式细胞仪检测不同浓度的大蒜素对NK细胞的增殖和凋亡的影响,ELISA检测大鼠脾脏NK细胞IFN-γ的分泌水平,乳酸脱氢酶(LDH)法检测大鼠脾脏NK细胞对小鼠淋巴瘤Yac-1细胞的杀伤活性。结果: 大蒜素对体外培养的NK细胞有明显的促进增殖和抑制NK细胞自然凋亡的作用,并能提高NK细胞分泌IFN-γ的水平和增强对Yac-1细胞的杀伤毒性,且在一定的浓度范围内呈剂量依赖性,其中30 mg/L是大蒜素的相对适宜浓度。结论: 大蒜素可能通过上调NK细胞分泌IFN-γ的水平,增强其体外肿瘤杀伤能力。     

新敷料,看我新功夫

皮肤,作为人体的重要体表器官,由表皮和真皮两部分组成,具有抵御外界微生物入侵、排泄及防止水分蒸发、调节体温、维持机体内环境稳定等重要作用。人们在日常生活和工作中,经常会不可避免地对皮肤造成各种损伤。创伤后皮肤的屏障作用丧失,引起疼痛、发炎等病理改变。敷料是一种能够起到暂时保护伤口、防止污染、促进愈合的医用材料,是对创伤进行治疗的有效手段。迄今为止,应用时间最长、范围最广的仍是传统的纱布类敷料,如纱布、棉球、绷带等。但是,这些传统敷料有着明显的缺点,如止血效果欠佳、无法保持创面润湿、妨碍组织细胞上皮化、延迟创面愈合等。最重要的是,这些敷料常常会与伤口发生粘连,让患者在换药时总要忍受多一点疼痛。     

应用生物荧光法检测三磷酸腺苷评估肝细胞功能储备*☆○

背景：合并肝硬化肝病变患者接受大体积肝脏切除或其后进行肝移植手术可能造成较高的并发症发生率和死亡率。目前公认的肝功能评估方法是Child 分级方法，包括了3个临床指标和2个生化指标，但它不能直接评估肝细胞的功能状态。 目的: 应用生物荧光法定量分析三磷酸腺苷作为肝功能监测手段的可行性。 设计、时间及地点：病例对比观察，于2005-01/2006-03在中山大学附属第二医院完成。 对象：选择肝部分切除患者32例，术中根据肝脏形态学改变分为3组：正常组7例，组织病理学没有明显硬化发现；大结节肝硬化组9例；微小结节型肝硬化组16例。 方法：所有患者均于术前进行常规及肝生化检查，包括谷草转氨酶、总胆红素等。无菌收集肝手术切除病变旁肝组织标本，酶解消化、细胞悬浮、培养、离心、肝细胞计数，提取三磷酸腺苷并检测其含量。 主要观察指标：换算出每个肝细胞的三磷酸腺苷含量，进一步将三磷酸腺苷含量与术前肝功能指标进行相关性分析。 结果：①大结节肝硬化组单位肝细胞三磷酸腺苷含量明显高于正常组及小结节肝硬化组（P=0.000 1，0.004）。小结节肝硬化组三磷酸腺苷含量也明显高于正常组（P=0.04）。②单位肝细胞三磷酸腺苷含量与术前血浆谷草转氨酶活性、总胆红素含量呈显著正相关(r=0.609 3, P=0.000 2；r=0.614 5, P=0.000 2)。 结论：肝细胞三磷酸腺苷水平检测可以评估肝实质储备功能，也可用于预测肝切除手术风险及选择肝移植手术时机。     

Ⅲ型肝门部胆管癌的外科治疗（附35例分析）

目的总结Ⅲ型肝门部胆管癌的手术经验。方法回顾性分析我院1999年1月至2006年12月，行手术切除的35例Ⅲ型肝门部胆管癌的临床资料。Ⅲa型16例，行肝门部胆管切除8例，行联合右半肝＋右侧尾状叶切除7例，行联合右半肝＋尾状叶切除、门静脉分叉部切除主干左支吻合1例。Ⅲb型19例，行肝门部胆管切除8例，行联合左半肝＋左侧尾状叶切除9例，行联合左半肝＋尾状叶切除、门静脉分叉部切除主干右支吻合1例．行联合左半肝＋尾状叶切除、门静脉分叉部切除主干右支吻合、肝固有动脉分叉部切除主干右支吻合1例。结果本组32例获得随访，随访时间18～113个月。肝门部胆管切除病例术后病理根治性切除率为37．5％，联合肝叶切除病例术后病理根治性切除率73．7％，3例联合肝叶切除＋血管切除病例均获术后病理根治性切除。肝门部胆管切除术后并发症发生率为31．3％，联合肝叶切除组术后并发症发生率为31．6％。3例联合肝叶切除＋血管切除病例术后均无胆肠吻合口漏、肝断面坏死、胆漏等严重并发症。结论联合肝叶切除，必要时行受累分叉部血管切除重建，有益于提高Ⅲ型肝门部胆管癌的根治性切除率，且不增加术后并发症的发生率。     

恒河猴异种自然抗体滴度的测定

目的：探讨不同个体恒河猴体内预存之异种自然抗体是否存在差异。方法：培养猪股动脉内皮细胞，采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）测定恒河猴异各上自然抗体ＩｇＭ滴度。结果：１２只猴中异种自然抗体ＩｇＭ最小值为１：３２，最大值为１：２５６。结论：不同个体恒河猴异种自然抗体滴度差别较大，恒河猴进入异种器官移植前，为避免选择性偏倚，测定其异种自然抗体滴度是必要的。     

肝移植中使用受体脾动脉行肝动脉重建

目的探讨在肝移植中受体肝动脉存在病变的情况下肝动脉重建的方法。方法在二例肝移植病人中,选用受体脾动脉与供体肝动脉端端吻合以重建肝动脉。结果术后分别随访5个月和2年,肝动脉通畅,肝功能正常,无胆管并发症,无脾梗塞和脾功能异常。结论肝移植中受体的脾动脉可以用来行肝动脉重建。     

肝外伤诊断与治疗的体会(附38例报告)

肝脏是人体内最大的实质性脏器,质地脆,易受外伤,是腹部外伤最常见的死亡原因之一。我科及华西医科大学附一院普外科自1997年1月至1999年7月共收治肝外伤38例。现总结报道如下。yh1　临床资料11　一般资料　本组男性27例,女性11例。年龄9～63岁。开放性损伤13例,闭合性损伤25例。单纯性肝外伤14例,合并伤24例(后腹血肿9例,膈肌破裂2例,胃肠破裂3例,脾破裂5例,血气胸1例,颅脑外伤4例)。本组腹穿检查34例,阳性31例。手术治疗33例,非手术治疗5例。12　损伤程度　按1989年美国创伤外科学会(ＡＡＳＴ)分级[1]:手术组33例(Ⅰ级9例,Ⅱ级7例,Ⅲ级13…     

β-干扰素抑制裸鼠荷人肝癌切除术后复发和生长的实验研究

目的:研究β-干扰素(INF-β)对肝癌根治性切除后复发和生长的抑制作用。 方法:将人肝癌组织植入25只BALB/c裸鼠肝脏，建立人肝癌原位移植瘤模型。第10 d完整切除荷瘤后，随机分为3组：A组对照组（生理盐水皮下注射）；B组小剂量实验组（INF-β 3×105U/d皮下注射）;C组大剂量实验组（INF-β 6×105U/d皮下注射）。连续注射35 d后处死裸鼠，观察肿瘤复发情况，测量肿瘤大小和体积；免疫组织化学法检测肿瘤增殖核抗原(Ki-67)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达。 结果:A组肿瘤复发率为100%，B组为87.5%，C组为77.8%，3组比较无显著差异（P>0.05）。B组和C组抑瘤率分别为73.6%和94.3%，与A组比较差异显著（P<0.05）。B组和C组肿瘤组织iNOS、Ki-67的表达明显低于A组，而caspase3的表达明显高于A组（P<0.05）。 结论:β-干扰素可有效抑制肝癌切除术后复发肿瘤的生长。大剂量β-干扰素较小剂量对肝癌的生长抑制作用更强，其机制可能与肿瘤组织内iNOS、Ki-67和caspase3的表达有关。