血管内皮生长因子转基因细胞ECV-304辐射生物效应的研究

目的 通过建立正反义血管内皮生长因子(VEGF)转基因细胞系,研究VEGF对血管内皮细胞ECV-304的辐射生物学特性的影响。方法 鉴定VEGF正义表达载体,并构建其反义载体,建立转染VEGF正反义表达载体的血管内皮细胞系;应用MTT法、微核法研究转染细胞系的辐射生物学变化。结果 将VEGF正反义表达载体成功转染到ECV-304中,建立稳定细胞系。与正常细胞相比,转染正义表达载体的ECV-304稳定细胞系经过4 Gy γ射线照射后,细胞促生长率提高至(10.8±1.9)%(P＜0.05),细胞微核率(MNF)从(53.5±6.61)%减少到(42.5±2.46)%(P＜0.01),微核细胞率(MNCF)从(31.6±5.23)%减少至(23.7±2.27)%(P＜0.05);而转染反义表达载体的细胞系细胞促生长率降低至(-9.2±2.8)%(P＜0.05),MNF、MNCF分别增加至(62.1±1.96)%(P＜0.01)、(38.1±1.47)%(P＜0.05)。结论 VEGF对血管内皮细胞具有辐射防护作用,为今后进一步研究放射性溃疡的转基因治疗提供了实验和理论依据。     

重组腺相关病毒对NK92细胞的转导条件优化

为提高重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)对NK92细胞的转导效率，对转导细胞密度、培养基中IL-2浓度、rAAV血清型和用量进行优化；此外，用不同浓度的促进剂(ZnCl2、氯喹、聚乙烯醇和金雀异黄酮)溶液处理细胞，以进一步提高病毒转导效率。结果表明，在细胞密度为5×10⁵时，增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达效率相对较高；当培养基中IL-2的浓度为1 000 IU/mL时，NK92的细胞生长状态最适合病毒转导；不同血清型rAAV对NK92细胞的转导效率由高到低依次为rAAV6、rAAV2和rAAV9；用金雀异黄酮预处理NK92细胞，能够显著提高病毒转导效率，而其他促进剂的添加对病毒转导效率无显著影响。通过上述条件的优化，显著提高了rAAV对NK92细胞的转导效率，为rAAV载体介导工程化NK92细胞奠定基础。