造血干细胞移植支持下大剂量化疗对高危乳腺癌患者血清细胞因子的影响

目的:观察造血干细胞移植支持下的大剂量化疗对高危乳腺癌患者Th1、Th2类细胞因子(IFN-γ、IL-2,IL-10)的影响。方法:应用ELISA方法测定14例高危乳腺癌患者大剂量化疗前后血清IFN-γ、IL-2、IL-10的变化。结果:14例患者大剂量化疗前后血清中IFN-γ、IL-2、IL-10的水平分别为12.79±4.60pg/ml、6.55±5.42pg/ml、9.04±8.28pg/ml及12.38±3.23pg/ml、6.16±2.84pg/ml、9.00±6.85pg/ml,前后对比无统计学意义(P>0.05)。不同病理类型患者大剂量化疗前后血清细胞因子亦无显著差异(P>0.05)。转移淋巴结数大于50%与少于50%组相比,IL-10水平在大剂量化疗前两组有显著差异(P<0.05),但化疗后这种差异消失(P>0.05)。结论:大剂量化疗对Th1及Th2类细胞因子无影响,而对淋巴结转移数大于50%者的Th2类细胞因子有调节作用。     

滑膜肉瘤中细胞凋亡、增殖活性的预后意义

滑膜肉瘤是一种高度恶性的软组织肉瘤，预后较差，但关于其预后因素的研究相对较少。本研究使用原位末端标记（TUNEL）技术检测滑膜肉瘤的细胞凋亡情况，免疫组化方法检测凋亡相关蛋白Bel-2、Bax和P53及细胞增殖指标Ki-67的表达，分析它们的预后意义，为了解滑膜肉瘤的生物学行为，指导治疗和判断预后提供依据。     

乳腺癌凋亡过程中细胞内Ca2+的变化与Caspase3、Caspase8蛋白酶相关作用机制的研究

目的:探讨不同途径给药乳腺癌BCML-TA299移植瘤组织中Ca2 的变化与Caspase3、Caspase8蛋白相互作用的机制.方法:用a-干扰素不同给药途径处理BCML-TA299移植瘤组织.采用流式细胞仪、免疫组化技术分别测定乳腺癌BCML-TA299细胞的DNA含量、细胞周期变化及细胞内钙离子浓度水平变化与Caspase3、Caspase8蛋白表达相关性.结果:细胞形态学观察显示瘤内注射组出现典型的凋亡改变.瘤内注射组胞内Ca2 和Caspase3、Caspase8蛋白表达明显高于皮下注射组和预防注射组(P＜0.01).结论:1)Caspase3、Caspase8和胞内Ca2 共同参与了乳腺癌BCML-TA299细胞的凋亡调控过程,可能在乳腺癌发生、发展中起重要作用.2)不同途径给药对肿瘤细胞Caspase3、Caspase8表达和Ca2 浓度可产生不同的影响.     

BH3结构域拟似物BH3I-2′诱导人白血病细胞凋亡机理的探讨

目的:探讨BH3结构域拟似物BH3I-2′诱导白血病细胞发生凋亡的潜在机制,为其临床应用提供理论依据.方法:应用流式细胞仪、ELISA分析、Western Blotting印渍技术检测BH3I-2′作用后白血病细胞K562、CEM的凋亡情况、线粒体△ψm、ROS变化、NF-κB活性及凋亡相关蛋白表达.结果:BH3I-2′能显著诱导白血病细胞凋亡,引起细胞线粒体跨膜电位△ψm下降、ROS生成并同时激活核转录因子NF-κB及抗凋亡蛋白的上调.结论:BH3结构域拟似物BH3I-2′通过消耗线粒体跨膜电位,诱导细胞氧自由基ROS生成,进而造成线粒体内膜损伤,触发线粒体通路引起细胞凋亡;并且也同时诱导了NF-κB、抗凋亡蛋白激活表达,提示药物诱导肿瘤细胞凋亡的同时也启动了细胞自身的保护机制.     

CD4+T细胞在抗肿瘤过继性免疫治疗中作用的研究

目的：观察CIK细胞中CD4^＋T细胞中Th1／Th2亚群分布情况。方法：体外大规模扩增CIK细胞，磁珠法纯化其中CD4^＋T细胞．采用胞内染色、ELISA和荧光定量RT—PCR法检测培养前后Th1／Th2细胞亚群的比例、Th1／Th2类细胞因子的分泌量和基因表达的变化。结果：富集CD4^＋细胞纯度达96％，CIK中Th1亚群和Th0亚群的比例较PBMC显著升高（P〈0．05），而Th2亚群无显著变化。CD4^＋CIK细胞中IL-2和IFN-γ等Th1类细胞因子释放量增高（P〈0．01），而IL－10和TGF-β等Th2类细胞因子释放量降低（P〈0．05）。但CD4^＋CIK细胞中除IFN-γ／的mRNA显著升高外（P〈0．05）．IL-2和IL-4的mRNA变化不明显。结论：CIK细胞中的CD4^＋T细胞具有明显的Th1优势。     

乳腺癌保乳手术安全范围的研究

目的:探讨适合中国女性保乳手术的安全切除范围.方法:对48例切缘阴性象限切除标本大切片观察乳腺内原发癌及癌旁病变累犯范围;并对62例全乳腺切除标本采用免疫组化及分子生物学方法,检测癌和癌旁组织PCNA、p53、C-erbB-2等表达情况,分析癌瘤向周边浸润及周围组织癌变趋向的规律.结果:随距原发癌越远,癌旁发生高危病变、PCNA、C-erbB-2及p53阳性的比例逐渐降低(P＜0.05);近乳头端和肿瘤两侧癌旁危险因素阳性病变较远侧端范围广泛(P＜0.05);癌旁不同范围危险因素比例与乳腺原发癌伴有广泛的导管内癌成分(EIC)、C-erbB-2及p53阳性有关(P＜0.05);原发癌组织学Ⅰ级者癌旁未见危险因素存在.结论:保乳术后复发危险因素绝大多数(95.2%)在瘤缘外2cm以内存在,因此推荐以癌旁2cm作为保乳手术的安全切除范围,远离乳头端可缩小手术范围至癌旁1cm处;同时对原发癌EIC( )、C-erbB-2和/或p53阳性表达者应扩大切除范围,达到切缘阴性,降低局部复发率.     

BH3结构域拟似物BH3I-2''''诱导人白血病细胞凋亡机理的探讨

目的:探讨BH3结构域拟似物BH3I-2'诱导白血病细胞发生凋亡的潜在机制,为其临床应用提供理论依据。方法:应用流式细胞仪、ELISA分析、WesternBlotting印渍技术检测BH3I-2'作用后白血病细胞K562、CEM的凋亡情况、线粒体△Ψm、ROS变化、NF-κB活性及凋亡相关蛋白表达。结果:BH3I-2'能显著诱导白血病细胞凋亡,引起细胞线粒体跨膜电位△Ψm下降、ROS生成并同时激活核转录因子NF-κB及抗凋亡蛋白的上调。结论:BH3结构域拟似物BH3I-2'通过消耗线粒体跨膜电位,诱导细胞氧自由基ROS生成,进而造成线粒体内膜损伤,触发线粒体通路引起细胞凋亡;并且也同时诱导了NF-κB、抗凋亡蛋白激活表达,提示药物诱导肿瘤细胞凋亡的同时也启动了细胞自身的保护机制。     

双向分化肿瘤血管生成拟态分子机制初步观察

目的研究肿瘤细胞分泌Ⅳ型胶原和PAS阳性物质在血管生成拟态(VM)中的作用以及VM对肿瘤细胞表达VEGF的影响。方法收集双向分化恶性肿瘤石蜡包埋样本158例，制作成组织芯片，进行CD31和VEGF重复染色及Ⅳ型胶原染色。通过网格计数法，比较CD31与PAS阳性图案围成的管道面积差别及分布特点，以及有VM的点阵和无VM的点阵VEGF表达的差别。结果VM的基底膜样结构表现为PAS及Ⅳ型胶原阳性；无VM的双向分化肿瘤VEGF表达高于有VM者，其中在恶性黑色素瘤及腺泡型横纹肌肉瘤中，二者VEGF的表达差异有显著性(P<0．05)。结论PAS阳性物质和Ⅳ型胶原参与构建了VM的管壁，VEGF表达的差别表明VM的存在可以提供肿瘤细胞氧气和营养物质。     

外周血中循环血管内皮细胞及血管内皮前体细胞的扩增与鉴定

目的证实外周血中循环血管内皮细胞(circulating endothelial cells,CECs)及血管内皮前体细胞(circulating endothelial precursors,CEPs)的存在,以及内皮前体细胞的增殖分化能力.方法应用流式细胞法检测57例肿瘤患者及15例正常人外周血中的CECs/CEPs.选择经造血干细胞动员的肿瘤患者,分离单个核细胞(mononuclear cells,MNCs),在VEGF、IGF及bFGF条件下培养血管内皮细胞,并应用透射电镜法对培养细胞进行鉴定.结果肿瘤患者外周血中CECs/CEPs含量分别为0.378±0.047%、0.059±0.013%,高于正常对照组.培养细胞透射电镜下可见Weibel-Palade小体,为血管内皮细胞的特异性标志.结论外周血中存在CECs/CEPs,在肿瘤患者体内存在血管内皮及其前体细胞的动员,循环血管内皮干/祖细胞可进一步分化成熟.     

RNA转染树突状细胞肿瘤疫苗研究进展

与DNA疫苗相比，RNA核酸疫苗在安全性和可操作性方面更具有优势。树突状细胞(DC)作为人体内功能强大的抗原递呈细胞，在肿瘤免疫治疗中的作用已得到广泛认可。现就RNA转染DC这一新型治疗型肿瘤核酸疫苗研究和应用进展作一综述。