小鼠膝关节骨关节炎细胞因子的表达

目的 初步探讨实验性骨关节炎小鼠不同时间不同免疫应激情况下细胞因子的表达. 方法 8周龄健康清洁级C57小鼠随机分为实验组和对照组2组.实验组小鼠激活免疫系统,1周后实验组和对照组小鼠同时行右侧膝关节DMM手术(即手术部分切除右侧膝关节内侧半月板).分别于术后4,8周取膝关节病理标本,进行关节组织切片番红O快绿染色和mankin评分,免疫组织化学技术检测MMP13表达情况,RT qPCR检测滑膜组织IL-1β、IL-6、TNF-α等细胞因子以及X型胶原的表达. 结果 与对照组比较,手术后4,8周,实验组mankin评分、各细胞因子mRNA表达和X型胶原mRNA表达均高于对照组(P＜0.05). 结论 免疫应激条件下,关节组织中胶原及细胞因子呈现差异性表达.     

基于COSO框架的公立医院物资采购内部控制评价指标体系构建研究

目的 根据COSO内部控制框架理论,结合公立医院物资采购活动流程和工作内容,构建科学合理的物资采购内部控制评价指标体系.方法 运用改良德尔菲法,对广州市3家三甲医院共28名采购和设备管理工作领域专家进行三轮专家咨询,对指标进行统计学分析.结果 三轮专家咨询表回收率分别80％、100％和100％,专家权威系数分别为0.76、0.87、0.86,最终形成包括5个一级指标和39个二级指标的公立医院采购内部控制评价指标体系.结论 公立医院物资采购内部控制指标体系具有可靠性和广泛适用性,有利于健全公立医院内部控制制度、防范活动经济风险和提高医院运营经济效益.     

应用LISS钢板治疗老年股骨干骨折

目的本研究对老年性股骨干骨折采用闭合复位或结合有限切开复位LISS钢板内固定的患者进行临床分析。方法从2002年至2007年对17例65岁以上股骨干骨折的患者采用复位后LISS钢板内固定系统治疗,其中男性7例,女性10例,骨折发生时平均年龄为71岁,对这些患者进行临床评估。结果随访平均持续时间为14个月（7～26个月）,所有患者骨折愈合时间平均3．6月,本组病例没有使用同种异体骨条或自体骨植骨,没有出现并发症。结论LISS钢板在治疗老年性股骨干骨折时显示出相对于其他类型钢板的优势。微创的操作减少对骨折端血运的破坏,减低骨折不愈合等并发症,同时在这类骨质疏松性骨折中锁钉显示出良好的固定能力。     

个性化膝关节置换围术期血液管理方案的临床疗效评价

[目的]对行初次全膝关节表面置换术患者的个性化围术期血液管理方案进行临床疗效评价。[方法]对2011年12月~2016年12月在本院关节外科进行初次单侧全膝关节表面置换术的478例病例进行回顾性分析。实施围术期血液管理方案的患者共263例为试验组;未施行围术期血液管理方案的患者共215例为对照组。分别记录两组的术前及术后血红蛋白含量(术后第3 d),术中出血量,术后引流量,血制品输注量及住院时间。[结果]试验组患者术中出血量、术后引流量、输血量和输血率、术后血红蛋白下降量均少于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。另外,试验组患者的平均住院日稍高于对照组,但差异无统计学意义(P0.05)。[结论]依据患者实际情况,制定和应用个性化全膝关节置换术围术期血液管理方案十分必要,可以减少围手术期失血,促进患者早期恢复。     

Ⅰ型胶原三维立体支架高密度培养软骨细胞的增殖及其分泌功能

目的：观察体外Ⅰ型胶原三维立体支架培养软骨细胞形态、增殖能力及Ⅱ型胶原表达的变化，并与单层培养结果相比较。方法：实验于2004—09／12在中山大学附属第三医院中心实验室完成。选择2周龄健康雄性一级新西兰大白兔1只，体质量0．5kg。体外分离兔双侧股骨髁关节软骨细胞后行单层贴壁培养，细胞铺满单层后，分别将细胞悬液按2&;#215;10^6／L，2&;#215;10^7／L，2&;#215;10^8／L密度传代培养。选择生长状态良好的第2，3代细胞置于Ⅰ型胶原三维立体支架培养。分别通过相差倒置显微镜、流式细胞仪、电镜检查以及组织学染色及免疫组织化学染色，分析软骨细胞的表型、增殖速度等生物学性状变化情况。结果：①单层培养随着时间的延长，增殖速度逐渐减慢，第6代细胞增殖能力较第2代明显下降，出现树突状的细胞突起，表现出细胞老化的趋势。分泌Ⅱ型胶原的能力也逐渐减低，第2代细胞Ⅱ型胶原免疫组化染色胞浆内呈阳性反应，至第6代呈阴性。在以低密度传代培养时上述过程出现较快，而以高密度传代培养时软骨细胞形态改变延迟。②在Ⅰ型胶原三维立体支架中培养时，软骨细胞大量增殖，能维持其细胞表型及分泌Ⅱ型胶原的功能。扫描电镜观察到软骨细胞成团吸附于支架孔隙网壁，说明支架吸附性良好，与软骨细胞相容性好。结论：软骨细胞在体外单层培养会失去细胞表型，不能分泌Ⅱ型胶原，高密度培养能减缓该过程。而在Ⅰ型胶原三维立体支架中培养，有利于维持软骨细胞的表型及分泌Ⅱ型胶原的功能。因此，建议采用在三维立体支架内高密度培养软骨细胞，构建有功能的组织工程软骨。     

细胞因子在体外诱导骨髓基质细胞向软骨细胞分化过程中的作用

背景:骨髓基质细胞持续稳定地向软骨细胞转化一过程中,物理、化学和生物等诸多因素均发挥着作用,某些因素的共同作用会更有利于细胞的转化,而转化生长因子β1和胰岛素样生长因子等均可诱导骨髓基质细胞向软骨细胞分化.目的:拟验证转化生长因子β1与胰岛素样生长因子在体外联合诱导犬骨髓基质细胞向软骨细胞分化的效果.设计、时间及地点:细胞观察,于2006-05/10在中山大学附属第三医院中心实验室完成.材料:清洁级12月龄雄性成年杂种犬1只,用于分离培养骨髓基质细胞.转化生长因子β1、胰岛素样生长因子I由美国Sigma公司生产.方法:自犬髂后嵴处抽取骨髓10mL,密度梯度法分离培养骨髓基质细胞,传至第3代,调整细胞密度为2×109L-1.诱导组向细胞内加入含10 μg/L转化生长因子β1、50 μg/L胰岛素样生长囚了I、50mg/L维生素C、10-7mol/L地塞米松、1%ITS-A、100U/mL青霉素、100 mg/L链霉素、10%胎牛血清的高糖DMEM培养基.对照组仪加入含10%胎牛血清的高糖DMEM进行常规培养.主要观察指标:诱导后细胞形态学变化.诱导后组织化学及免疫组化检测结果.结果:与对照组比较,第3代骨髓基质细胞成软骨诱导48 h后能明显促进细胞集落生长,细胞增殖加快,但细胞形态无变化,仍为长梭形;诱导14 d后大部分细胞呈多角形或圆形,折光性增强.诱导后番红O染色、甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色均呈阳性表达.结论:转化生长因子β1与胰岛素样生长因子I体外联合诱导可获得骨髓基质细胞源性软骨细胞.     

关节镜下手术治疗胫骨平台骨折

目的评价关节镜下手术治疗胫骨平台骨折的可行性和效果。方法自2002年1月～2003年12月,对36例闭合性胫骨平台骨折Schatzker'sⅠ～Ⅲ型患者,施行关节镜辅助下复位内固定手术。结果术中发现,合并半月板损伤7例、交叉韧带损伤4例,手术时间(91.6±26.8)min,解剖复位率97.2%;术后关节屈曲至120°时间为(5.9±1.4)周,36例患者随访11～20个月,关节功能优良率86.1%。结论关节镜下手术治疗Schatzker'sⅠ～Ⅲ型胫骨平台骨折,方法切实可行,术中易于处理合并损伤,易于精确复位,内固定可靠,软组织损伤大大减小,术后关节功能恢复快,近期临床效果满意,值得提倡。     

关节镜下锚钉固定治疗肩关节Bankart损伤

目的探讨关节镜下TWINFIX双固定锚钉固定治疗肩关节Bankart损伤的疗效。方法采用关节镜下TWINFIX双固定锚钉治疗复发性肩关节前脱位损伤28例,术前均常规拍摄肩关节前后位、出口位X片及肩关节MRI检查,经关节镜探查明确肩关节Bankart损伤,清理损伤创面直到骨面出血,将肩关节囊-韧带-盂唇复合体牵向盂唇缘,采用缝合锚钉2~3枚固定于肩盂骨内,缝合盂唇组织。采用美国加州洛杉矶大学UCLA功能评分标准。结果术后随访平均12个月,28例患者术后,27例肩关节稳定性良好,1例复发。UCLA评分术前平均评分(21.15±4.5)分,终末随访平均(32.07±4.8)分,大部分患者表现出了良好的运动(包括外旋),大多恢复正常生活与工作且恢复到了以前的运动水平。结论关节镜下TWINFIX双固定锚钉固定治疗肩关节Bankart损伤创伤小、操作简便和固定可靠,联合术后严格锻炼,有利于肩关节功能康复。     

重组人白细胞介素1受体拮抗蛋白荧光质粒在软骨细胞的表达

背景：白细胞介素1受体拮抗蛋白能延缓骨性关节炎进程,通过转基因方法可以使白细胞介素1受体拮抗蛋白表达的增加。目的：观察重组人重组人白细胞介素1受体拮抗蛋白荧光质粒的构建及经脂质体转染软骨细胞的表达情况。方法：双酶切法切取重组人白细胞介素1受体拮抗蛋白的c-DNA片段,通过T4DNA连接酶连接到pEGFP-C1载体上。体外分离培养兔关节软骨细胞,然后用构建的重组人白细胞介素1受体拮抗蛋白质粒经脂质体转染软骨细胞,通过荧光显微镜观察转基因的表达和荧光定量PCR检测其表达。结果与结论：获得重组人pEGFP-C1-IL-1Ra真核表达载体质粒,酶切及测序结果证明表达质粒的DNA序列完全正确。荧光显微镜观察有绿色荧光蛋白表达,荧光定量PCR鉴定证实转染的软骨细胞基因得到表达。     

转IL-1Ra和TGF-β1基因治疗兔骨性关节炎的体外实验研究

目的 探讨重组人IL-1Ra和TGF-β1双基因在体外对兔骨性关节炎软骨退变的治疗效果.方法 取新西兰大白兔关节软骨,经消化分离,软骨细胞以1.5×105/ml浓度培养于6孔培养板.软骨细胞分为5组,转染IL-1Ra组、转染TGF-β1组、转染IL-1Ra＋TGF-β1双基因组、未转染组、空白组.上述转染组均以LipofectamineTM 2000 Reagent脂质体为转染媒介.各组加入软骨块,除空白组外,其余各组均加入20 ng IL-1β.于第6天后每组各取4孔1.5 ml培养基,ELISA法检测TGF-β1和IL-1Ra的含量,RIA法检测IL-1β和TNF-α的含量.收集软骨块做HE染色、阿尔新蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化检测等组织学观察.结果 转染组IL-1Ra或TGF-β1有较高的表达水平;转染组IL-1β和TNF-α的表达水平降低,在双基因组降低最明显,与单基因组之间有显著性差异（P〈0.05）.转基因组基质染色均比未转染组着色较深.在双基因组软骨细胞排列尚整齐,细胞数量多,基质深染.结论 联合基因治疗效果优于单基因,为体外骨性关节炎的基因治疗提供实验基础.