青天葵黄酮F通过促进自噬减轻脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤

目的:探讨青天葵黄酮F(NF)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠的保护作用及其可能的作用靶点.方法:气管内注射LPS诱导大鼠ALI后,分别用高、中、低剂量(10.0、5.0、2.5mg/kg)NF和3mg/kg地塞米松(DEX)进行干预.采用苏木精一伊红染色(H&E染色)观察肺组织病理损伤;采用酶联免疫吸...     

γ射线照射前后IEC-6细胞蛋白质组的差异分析

目的　分析γ射线照射后肠上皮细胞系 (IEC 6)细胞蛋白质组的改变。方法　分别提取正常IEC 6细胞和经过 2 5Gy照射后细胞的蛋白样品 ,采用固相pH梯度双向凝胶电泳技术进行分离 ,考马斯亮蓝染色后经PDQuest软件分析双向电泳图谱 ,对部分差异的蛋白点进行胶内酶切、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)测定其肽质量指纹图谱 ,在网上检索数据库鉴定差异蛋白 ,并采用RT PCR间接证实其变化。结果　获得了较好的双向电泳图谱。图像分析显示 :在正常IEC 6细胞中检测到 ( 60 8± 3 9)个蛋白质点 ,细胞照射后的样品中检测到 ( 5 95± 3 1)个蛋白质点 ,其中匹配的蛋白点为 3 96个。对表达差异的 16个蛋白质点进行肽质量指纹图谱分析 ,经数据库检索后初步鉴定为一些与代谢、自由基清除、细胞骨架相关的蛋白。RT PCR证实了ERP2 9基因在照射后增强。结论　电离辐射可以诱导IEC 6细胞蛋白质组发生改变。     

重组VIP腺病毒载体的构建及其在293细胞的表达

目的 构建血管活性肠肽重组腺病毒载体,以期用于体内实验研究.方法 利用RT-PCR扩增小鼠大脑VIP mRNA,亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV,在pAdeasy内同源重组,筛选阳性克隆,酶切、测序鉴定正确,线性化后脂质体法转染293 细胞进行包装、扩增,利用报告基因EGFP对病毒滴度进行监测.PCR、免疫荧光鉴定pAdeasy-VIP感染293 细胞后VIP基因的表达,ELISA检测重组病毒转染后293细胞上清中的表达.结果 测序、酶切证实VIP基因重组腺病毒载体构建成功.RT-PCR,免疫荧光检测pAdeasy-VIP病毒感染的293细胞,均有VIP的表达.与对照组相比,重组病毒转染后293细胞上清中VIP多肽的表达明显增高.结论 成功构建了含小鼠VIP基因的重组腺病毒载体,并成功表达VIP多肽.     

血清CA125与抗子宫内膜抗体联合检测诊断子宫内膜异位症

目的探讨血清 CA1 2 5与抗子宫内膜抗体 (endometrial antibody,EMAb)联合检测对子宫内膜异位症的诊断价值。方法对 2 0 0 1年 1月— 2 0 0 1年 11月在本科住院需手术的 2 16例患者于术前行 CA1 2 5与抗子宫内膜抗体测定 ,根据术后病理确诊结果将患者分为内异症组 (4 8例 )和对照组 (16 8例 )。结果 CA1 2 5阳性率内异症组为 5 8.3% ,对照组为 12 .5 % ,两组间有非常显著性差异(P<0 .0 1)。EMAb阳性率内异症组为 31.3% ,对照组为 14 .3% ,两组间亦有非常显著性差异 (P<0 .0 1)。CA1 2 5单独测定的敏感性为 5 8.3% ,特异性为 87.5 % ;EMAb单独测定的敏感性为 31.3% ,特异性为 85 .7%。如以其中之一阳性作为诊断标准 ,则敏感性为 6 4 .6 % ,特异性为 73.2 %。如以两者均为阳性作为诊断标准 ,则敏感性为 2 5 .0 % ,特异性为 10 0 %。结论测定血清中 CA1 2 5及EMAb水平对子宫内膜异位症有较好的辅助诊断价值 ,联合测定则更能提高诊断的准确性。     

腹腔镜手术对良性妇科疾病患者免疫功能的影响

目的:比较腹腔镜手术与传统开腹手术对机体免疫功能的影响,从而为腹腔镜手术的微创性提供更多依据。方法:收集2008年1月~2009年8月在舟山市妇幼保健院就诊的因良性妇科疾病行腹腔镜手术者473例,行开腹手术者614例,对比腹腔镜组和开腹组手术前24 h,术后24 h、72 h患者外周血白细胞、中性粒细胞、细胞因子(IL-6、TNF-α)的变化情况,以及两组手术时间、术中出血量、术中术后并发症发生率、术后恢复情况及总住院费用等指标。结果:两组患者均术程顺利,腹腔镜组术中出血量、术后排气时间、术后住院时间均少于开腹组,但手术时间、治疗费用较开腹组多(P<0.0005)。开腹组术后24 h白细胞计数平均值明显高于术前;到术后72h有所下降,但仍高于术前水平。腹腔镜组术后24 h白细胞水平也高于术前,但其升高程度却低于开腹组,至术后72 h,白细胞数已接近术前水平。两组术后24 h中性粒细胞均明显升高,且两组间无统计学差异,至术后72 h两组中性粒细胞水平均已恢复到术前状态。血清IL-6水平在腹腔镜组和开腹组术前24 h均明显低于术后24 h,但腹腔镜组术后24 h血清IL-6浓度的峰值低于开腹组;两组术后72 h分别下降至术前水平。TNF-α在腹腔镜组和开腹手术组术前24 h均值明显高于术前水平,两组升高程度接近,术后72 h两组TNF-α水平分别下降至术前水平。结论:腹腔镜手术患者术中出血少,术后胃肠功能恢复快,住院天数短,但手术时间较长,住院总费用较高;两种手术途径对机体的吞噬细胞功能均有抑制作用,但其抑制程度在腹腔镜组低于开腹组。     

免疫性血小板减少症患儿骨髓间充质干细胞与其他来源的间充质干细胞免疫调节作用的比较研究

目的比较免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia,ITP)患儿与正常人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)及脐带来源间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)的性质及其对正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)分泌干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、白介素-10(interleukin-10,IL-10)的调节能力。方法用密度梯度离心法体外分离培养16例ITP患儿和8例正常成人BMMSCs至5-6代,用酶消化法从10例健康胎儿脐带组织中分离培养UC-MSCs至5-6代。在培养过程中观察三种来源间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)形态,进行细胞表面分子及成脂成骨分化鉴定并用细胞增殖检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测三种MSCs的增殖能力。将上述三种MSCs用丝裂霉素(mitomycin C,MMC)处理后与植物血凝素(phytohaemagglutinin,PHA)刺激的PBMC按不同比例(1∶40,3∶40,9∶40)混合培养3 d,收集培养上清液。用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组共培养上清液中IL-10和IFN-γ的含量。结果三种MSCs有相似的细胞形态,UC-MSCs增殖速度最快,正常成人BMMSCs次之,ITP患儿BMMSCs最慢;三种MSCs有相似的分化能力。三种来源MSCs与PBMC以不同比例混合培养,随着MSCs比例的增加,PBMC分泌IL-10增加,在ITP患儿BMMSCs组中不同比例之间差异有显著性(P<0.05),而在正常人BMMSCs、UC-MSCs组中不同比例之间差异有非常显著性(P<0.01);随着MSCs比例的增加,PBMC分泌的IFN-γ减少,在ITP患儿及正常人BMMSCs组中不同比例之间差异有显著性(P<0.05),而在UC-MSCs组中不同比例之间差异有非常显著性(P<0.01)。在相同共培养比例条件下,三种MSCs刺激PBMC分泌IL-10和IFN-γ的量差异均无显著性(P>0.05)。结论 ITP患儿BMMSCs较其他两种来源的MSCs增殖速度慢,说明其体外增殖存在缺陷。但ITP患儿BMMSCs与其他两种来源MSCs对PBMC分泌IL-10、IFN-γ的调节具有相同的特点,即促进IL-10分泌,抑制IFN-γ分泌,均呈剂量依赖性,即三种细胞调节PBMC分泌IL-10及IFN-γ能力未见明显差异。     

大鼠肠上皮细胞系IEC-6的恶性转化研究

目的建立N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍（N-methyl-N’-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG）、佛波酯（12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate,PMA）对大鼠肠上皮细胞系IEC-6的恶性转化模型。方法通过克隆形成率实验确定MNNG、PMA对IEC-6细胞转化浓度,对IEC-6细胞进行分阶段多次干预。用软琼脂集落形成实验和裸鼠体内致瘤实验鉴定细胞恶性转化程度。结果经MNNG、PMA多次处理IEC-6细胞至24次后,细胞生长速度加快,排列紊乱,失去接触抑制,出现复层生长,并可在软琼脂上生长,且呈剂量反应关系,但在第24次之前的细胞则不能在软琼脂上生长。转化细胞在裸鼠体内形成瘤,病理组织学证实为低分化肠上皮细胞癌。结论MNNG、PMA具有使IEC-6细胞发生恶性转化的能力。     

严重畸形的膝骨关节病人工关节置换术

目前,人工全膝关节置换的手术技术已基本成熟,但也有一些例外的病人,那就是严重畸形的骨关节病病人.这些病人往往畸形严重,手术中取得软组织及韧带的平衡非常复杂,取得完全的平衡是很困难的,以下简要介绍我院在处理这些病例的经验及手术技巧.     

木村病1例报告

患者男,43岁,因"发现左腹股沟肿块7个月"人院.患者7个月前无意中发现左腹股沟区有一鸽蛋大小肿块,质地较硬,无明显疼痛,无局部皮肤红肿.起病后患者到当地县医院就诊,查左腹股沟彩超示:"左腹股沟实质性肿块",诊断为:"慢性淋巴结炎",予"阿奇霉素"口服治疗后肿块无明显变化,但患者未再进一步治疗.     

口服与阴道置米前列醇应用于中期妊娠引产效果的比较

目的：对于中期妊娠引产,阴道置米索前列醇（下称米索）是否比口服更优越。方法;选择孕14－28周需终止妊娠的健康孕妇100例,平均分为二组,一组为口服米索3粒,每次间隔4－6小时,最多3次;另一组为阴道放置米索3粒,间隔4－6小时,最多3次。结果：两组用药至宫缩发动时间、宫缩至胎儿排出时间、产时出血等无显著差异（P＞0．05）。口服者胃肠道反应略多,需追服第二剂、第三剂者多、但口服省时、省力,且感染机会少。结论：口服米索前列醇与阴道置药对中期妊娠效果相同。