LRRC4通过MAPK信号通路阻滞U251细胞于G0/G1期

目的:探讨脑胶质瘤抑瘤基因LRRC4通过MAPK信号通路阻滞U251细胞于G0/G1的机制.方法:通过脂质体转染法将LRRC4基因转染至U251细胞,G418筛选构建稳定转染的LRRC4/U251细胞株并验证LRRC4的阳性表达;通过Western-blot检测LRRC4对MAPK信号通路的关键分子ERK,JNK及P38的表达影响;流式细胞仪、荧光素酶活性检测分析LRRC4对U251细胞周期及细胞周期素(cyclin D1)的影响.结果:LRRC4能够下调磷酸化ERK的表达,上调总蛋白JNK2和磷酸化c-Jun的表达.LRRC4下调了U251细胞中突变型P53的表达,以及cyclin D1的启动子活性和它的表达.LRRC4的重表达将U251细胞阻滞于G0/G1期.结论:LRRC4主要通过MAPK通路的关键分子JNK2上调磷酸化的c-Jun,抑制突变型的P53的表达,进而下调cyclin D1的启动子活性和cyclin D1的表达,将U251细胞阻滞于G0/G1期.     

LRRC4多抗制备及在构建不同级别脑胶质瘤差异表达中的应用

目的:制备兔抗脑瘤候选抑瘤基因LRRC4(leucine-rich repeats containing 4)的多克隆抗体,应用该抗体检测LRRC4表达与脑胶质瘤病理分级的相关性.方法:应用DS Gene1.1软件分析LRRC4全长蛋白,避开跨膜结构域,选取亲水性及抗原性均好的蛋白序列.构建相应的融合表达载体pGEX-4 T-2/276 bp,转入E.coli JM109中IPTG诱导表达.融合蛋白经纯化后免疫新西兰兔,收集并纯化抗血清,获得兔抗人LRRC4多抗,应用该抗体通过Western印迹和免疫组织化学检测LRRC4在正常人胚胎各器官组织中的表达及其在正常脑组织与各级脑胶质瘤中的表达差异.结果:制备了效价高、特异性好的兔抗人LRRC4多抗,进一步证实了LRRC4在正常人脑组织中相对特异高表达,在脑胶质瘤中表达下调(22例/37例)或缺失(15例/37例),其表达水平与脑胶质瘤的病理分级相关.结论:兔抗人LRRC4多抗效价高、特异性好,应用该抗体检测到LRRC4的表达水平与脑胶质瘤病理分级密切相关,为LRRC4后续的研究工作奠定了基础.     

高渗和低渗造影剂对人肾小管上皮细胞的毒性作用

目的 比较高渗造影剂（HOCM，泛影葡胺）和低渗造影剂（LOCM，欧乃派克）对人肾小管上皮细胞的毒性，探讨Bax／Bcl-2，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）-3在造影剂诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用。方法 以HKC细胞株为研究对象，实验分为7组：HOCM1组（111mgI／ml），HOCM2组（74mgI／m1），LOCMl组（111mgI／m1），LOCM2组（74mgI／ml），甘露醇高渗对照组，甘露醇低渗对照组，培养基对照组。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）试验和乳酸脱氢酶（LDH）检测造影剂对体外培养HKC细胞的毒性作用。采用Hoechst染色、TUNEL染色、DNA琼脂糖凝胶电泳、电镜和流式细胞仪DNA分析方法观察造影剂对HKC细胞凋亡的作用。采用Westem印迹方法检测Bax和Bcl-2蛋白含量的变化。采用荧光比色法检测caspase-3活性。结果 HOCM和LOCM组培养液中LDH水平较对照组显著增高（P〈0．05），细胞活力较对照组显著降低（P〈0．05），且与渗透浓度，作用时间及碘离子浓度有关。HOCM可诱导肾小管上皮细胞凋亡，且明显高于甘露醇高渗对照（P〈0．05）。LOCM在本实验剂量不能诱导肾小管上皮细胞凋亡。HOCM在诱导HKC细胞凋亡时伴随有Bax、Bcl-2表达的上调，caspase-3活性升高。结论 HOCM和LOCM对肾小管上皮细胞均有毒性作用，LOCM的毒性作用明显小于HOCM。HOCM可诱导人肾小管上皮细胞凋亡且与高渗及碘离子浓度有关。Bax／Bcl-2、caspase-3可能参与了造影剂诱导人肾小管上皮细胞凋亡的调控。     

应用混合探针文库筛选法克隆多个肿瘤差异表达基因

目的：进一步分离在鼻咽癌组织中表达下调／缺失的候选抑瘤基因。方法：采用PCR方法对有差异表达的cDNA序列（AF152605和AF091517）进行探针标记,Northern杂交确定其mRNA转录本大小,进而混合两种PCR探针对骨骼肌cDNA文库进行筛选,阳性克隆经PCR鉴定后直接测序。结果：克隆了转录本为2．2Kb、1．1Kb和1．4Kb三个基因,GenBank登录号分别为AF179285、AF170307和AF194971。结论：混合探针文库筛选法是同时、快速获得多个cDNA片段其全长序列的可借鉴实验手段。     

富亮氨酸重复超家族成员与脑瘤的研究进展

富亮氨酸重复（LRR）超家族成员已达4 000多种,它们在进化上保守、功能多样。许多研究表明,LRR蛋白在神经系统的发育及正常功能的维持中扮演重要角色,与脑瘤的发生发展亦存在一定的联系。LGI1,LRRC4主要分布于正常脑组织,与脑胶质瘤的恶性程度密切相关,随着胶质瘤恶性程度的增高,其表达逐渐下调甚至缺失。Slitrk,Slit及GAC1等亦参与了脑瘤的发生发展。     

阿托伐他汀对高胆固醇血症兔肺内炎性浸润的影响

目的：探讨阿托伐他汀对高胆固醇血症引起的肺部病变的影响。 方法：15只3月龄健康雄性新西兰兔,随机分为正常饮食组( 对照组)、高胆固醇饮食组( 高脂组)和高胆固醇饮食＋阿托伐他汀干预组( 他汀干预组),从第9周开始,他汀干预组每日加喂1.5 mg/（kg·d）阿托伐他汀。14周末终止实验。实验开始、8周末、14周末记录体质量并测血脂。14周末处死动物,取肺组织行各种病理检查; 并对离体肺行支气管肺泡灌洗,收集灌洗液并培养巨噬细胞;用免疫化学方法测定AM培养上清液中 NF-κB的活化率及肺组织增殖细胞核抗原阳性指数;用ELISA法检测血清、BALF及AM培养上清液中IL-6的浓度。结果：阿托伐他汀干预可减轻高胆固醇血症导致的肺部正常组织结构破坏和炎性细胞浸润,肺组织增殖细胞核抗原阳性指数升高;NF-κB活化率升高;血清、支气管肺泡灌洗液及巨噬细胞培养上清液中IL-6水平上升。 结论：阿托伐他汀可减轻高胆固醇血症所致的肺部损害。     

CSPG4基因在鼻咽癌中的表达分析

  目的  研究硫酸软骨素多糖蛋白4（CSPG4）基因在鼻咽癌及对照组织中的表达。  方法  采用实时荧光定量PCR测定CSPG4基因在4例正常鼻咽上皮和18例鼻咽癌组织（其中Ⅱ期6例,Ⅲ期5例,Ⅳ期7例）中的表达情况;通过构建包含92例对照和187例鼻咽癌的组织芯片,应用免疫组织化学检测CSPG4蛋白的表达和分布。  结果  正常鼻咽上皮中CSPG4基因mRNA表达水平较低,在鼻咽癌中CSPG4表达上调且与临床分期呈正相关,差异具有统计学意义（P=0.017）。免疫组织化学结果表明鼻咽癌中CSPG4蛋白表达水平高于对照组,91.98%的鼻咽癌组织中CSPG4为强阳性表达,而对照组的强阳性率为76.09%（P=0.001）。  结论  CSPG4在鼻咽癌中随着临床进展表达逐渐上调,可能参与了鼻咽癌的发生发展,具体机制及临床应用前景值得进一步深入研究。      

后基因组时代的生物信息学

生物信息学是80年代末随着基因组测序数据迅速猛增而逐渐兴起的一门全新的学科.后基因组时代的生物信息学面临新的研究任务,通过基因组功能注释,完整基因组比较,基因之间的相互作用,非编码区功能预测等研究将促进对人类及多种模式生物遗传密码的破译.     

代谢组学及其在恶性肿瘤研究中的应用

代谢组学是对某一生物或细胞所有低分子量代谢产物进行定性和定量分析的一门新学科.本文对代谢组学的概念、代谢组学研究的目的和领域以及代谢组学在恶性肿瘤研究中的应用方面进行了综述.     

人鼻咽上皮组织中间隙连接蛋白基因表达谱的研究

目的:研究细胞间隙连接蛋白基因(Cx)在正常人鼻咽上皮组织中的表达谱,在此基础上探索细胞间隙连接蛋白在鼻咽癌组织中的表达,为研究鼻咽组织癌变的原因和机理提供新思路。方法:根据基因库中人间隙连接蛋白基因的mRNA序列,合成间隙连接蛋白基因家族中13个基因的PCR引物,用RT-PCR的方法检测这些基因在鼻咽组织中的表达。结果:18例正常人鼻咽组织中,检出Cx30、31.1、37、40、43分别有16、16、17、15、17例表达,Cx26、31、32、45分别有10、11、9、9例表达,Cx36、46、46.6、50分别有1、0、1、3例表达。结论:正常人鼻咽组织中,主要表达的间隙连接蛋白为Cx30、31.1、37、40、43。