高纯度猪软骨Ⅱ型胶原的制备与检测

探讨以猪透明软骨为原材料制备高纯度Ⅱ型胶原的方法,为批量化生产提供依据。以猪透明软骨为原料,采用盐酸胍抽提蛋白多糖,酸性条件下酶解,中间过程经多步纯化去除杂胶原、降解及变性产物,最后经Sepharose H.P.阴离子柱层析纯化制备出产品并以Sigma公司产品作对照。SDS－PAGE电泳、氨基酸成份分析和紫外最大吸收光谱的结果表明,所提取的Ⅱ型胶原性质符合文献报导,纯度比Sigma公司的产品高。所提取的Ⅱ型胶原为高纯度的Ⅱ型胶原,由于采用肉用猪作原料,来源丰富,成本低,适合批量化的产品开发。     

猪软骨Ⅱ型胶原的制备及理化性能分析

目的建立一套完善的提取、纯化、检测Ⅱ型胶原的生产系统,供临床和科研应用.方法选取新鲜的猪透明软骨,经盐酸胍、胃蛋白酶等多步抽提,以及DEAE纤维素的柱层析,制备出高纯度的Ⅱ型胶原.结果通过SDS-PAGE电泳、氨基酸成分分析及羟脯氨酸的测定、紫外最大吸收光谱、电镜检测证实本法所制备的Ⅱ型胶原比Sigma(9007-34-5)公司的产品纯度高.结论用此方法制备的Ⅱ型胶原,材料来源广泛,程序简便,产品纯度高,易于大批量生产.     

以Ⅱ型胶原为基质长期传代培养软骨细胞

目的：建立以Ⅱ型胶原为基质的软骨细胞培养系统。方法：分离兔关节软骨细胞,于Ⅱ型胶原包被的培养板上培养。通过光镜和电镜检查、Ｓ－１００蛋白及尿酸检测,分析细胞的生物学特性。结果：原代软骨细胞接种４８ｈ贴壁,传代细胞８ｈ贴壁。连续培养至２３代,存活时间达５个月。前６代细胞增殖快,呈圆形或多角形,可见异染物沉积,多数细胞有Ｓ－１００蛋白表达。６代以后的细胞呈现反分化现象,增殖速度下降,异染物合成减少,Ｓ－１００蛋白的表达逐渐丧失。结论：以Ⅱ型胶原为基质培养软骨细胞是较理想的培养系统。     

关节腔注射治疗骨关节炎药物载体系统中的软骨靶向功能

背景：关节腔注射给药已经在骨关节炎治疗中占有重要地位，新型的药物递送系统的开发给予了更多选择。软骨靶向功能是针对治疗骨关节炎时药物附着或留置在软骨层中形成药库，达到缓释和精准药物递送。目的：综述关节腔注射治疗骨关节炎中各种软骨靶向生物材料和其特点。方法：以“骨关节炎，药物载体，软骨靶向，osteoarthritis,drug carrier,drug delivery,cartilage targeting,penetrate”为关键词在万方、中国知网、PubMed数据库进行文献检索，根据纳入与排除标准对文章进行筛选、最终选择67篇文章进行综述。结果与结论：针对软骨靶向生物材料的研究，主要分为两个方向。一是利用静电作用的相互结合，如携带正电荷的生物材料与软骨中的负电多糖结合，这类方案可操作性强，便于修饰，但受限于静电作用本身的缺点，在晚期骨关节炎中表现不佳；二是针对软骨内各成分的特异性结合，这种结合强而可靠，相关生物材料在晚期骨关节炎中表现优异，是未来软骨靶向治疗的重要方向。