EHEC O157:H7志贺毒素ⅡA1亚单位蛋白的构建表达与免疫原性鉴定

目的 构建表达GST-STX2A1融合蛋白并鉴定其免疫原性.方法 通过PCR反应从EHEC O157:H7 EDL933标准株菌中扩增STX2A1基因,将此基因克隆到GST融合蛋白原核表达载体PGEX-6p-1,得到阳性克隆PGEX-6p-1/STX2A1,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导GST-STX2A1融合蛋白的表达,采用亲和层析纯化该蛋白,SDS-PAGE分析其表达量、表达形式和纯度;用纯化的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,免疫双向扩散鉴定抗血清效价,Western blotting鉴定抗血清的特异性.结果 成功构建重组质粒PGEX-6p-1/STX2A1,经DNA测序证实插入序列与设计完全一致,并在大肠杆菌中表达出Mr约为5.3×104大小的可溶性目的 蛋白,经亲和层析纯化后纯度可达90%,免疫Balb/c小鼠产生的抗血清效价为1:16,Western blotting表明可与天然STx2A蛋白反应.结论 在大肠杆菌中成功表达了可溶性的GST-STX2A1融合蛋白,该蛋白具有较好的免疫原性,为O157:H7亚单位疫苗及制备抗STX2A1的单克隆抗体提供了必要的物质基础.     

EHEC O157:H7志贺样毒素Ⅱ(Stx2)的克隆表达与活性研究

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157：H7志贺样毒素Ⅱ(Shiga like toxinⅡ,Stx2),并鉴定其生物学活性。方法采用PCR法自EHEC O157：H7基因组扩增志贺样毒素Ⅱ的编码基因stx2,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-11c(+)-six2,经测序鉴定后转化E．coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,以SDS-PAGE、Western blot分析目的蛋白的表达。以EHEC O157：H7野生菌株作对照,通过对HeLa细胞的细胞毒作用及对小鼠攻毒实验,鉴定重组蛋白的生物学活性。结果扩增的stx2基因约1230bp；原核表达质粒pET-11c(+)-stx2经酶切和测序鉴定与预期序列一致；并在E．coli BL21 (DE3)中得到表达,蛋白表达率约25％；PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(M_r)约72×10~3；重组蛋白Stx2对HeLa细胞具有细胞毒作用,CD_(50)为35pg/ml；Stx2对小鼠致死剂量LD_(100)为10μg。结论成功克隆并表达了Stx2重组蛋白,为探讨O157：H7菌的感染机制及其防治研究奠定了一定的基础。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7基因工程疫苗免疫小鼠的实验研究

目的 研究肠出血性大肠杆菌O157:H7基因工程疫苗免疫小鼠后对该菌感染的保护能力.方法 将60只BALB/c小鼠平均分为5组,分别为3种抗原单独免疫、三抗原联合免疫和PBS对照组,用注射方式免疫3次,抗原和佐剂均为每次100μg/只.采集免疫前和各次免疫后7d的小鼠血清检测抗体,末次免疫10d后以109CFU的0157全菌液经口感染小鼠.观察小鼠临床症状及死亡情况,检测粪便与肠道带菌情况,并作病理组织学检测.结果 各抗原免疫组小鼠特异抗体明显增加,感染后各组小鼠均有死亡,IntiminC300、Stx2B、HlyAN436和联合免疫组保护率分别为73%、64%、36%和91%.未病死小鼠粪便排菌情况:对照组22d,实验组为5～14d.肠道带菌情况:对照组阳性率为100%,实验组为25%～83%.病死小鼠肺脏、肝脏均有明显组织病理学改变.结论 Intim-inC300、Stx2B和HlyAN436疫苗对于O157感染具有一定的预防作用,而联合免疫效果又大于单独免疫.     

大安颗粒的抗惊作用和对获得性记忆障碍影响的实验研究

大安颗粒 (实验用其流浸膏 ,棕褐色 ,3 .0g(生药 )·ml 1)由成都中医药大学科技中试中心提供 ,以生理盐水配制成 1 3 5 %、67.3 %和 3 3 .7%浓度供实验用。　　 1、将一级SR小鼠以YLS 1A多功能小鼠自主活动记录仪输出方波电流刺激小鼠双耳出现发愣、竖尾、惊叫、跳动或伴有抽搐等持续 1 0”以上的模型小鼠1 0 0只 ,按体重、性别分为阴性对照组 (灌服生理盐水 )、阳性对照组 (灌服 0 .5 6%卡马西平溶液 3 0ml·kg 1,即 1 68mg·kg 1) ,高、中、低大安颗粒 (流浸膏 )组分别以 1 3 5 %、67.3 %和 3 3 .7%浓度灌服 3 0ml·kg 1(相当临床拟日…     

EHECO157：H7紧密粘附素胞外特异性片段（intiminC）的表达纯化及免疫检测的初步应用

目的:克隆表达并纯化肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7紧密粘附素胞外特异性片段(intiminC),摸索其免疫检测的初步应用.方法:设计引物采用PCR法自EHEC O157:H7基因组扩增紧密粘附素胞外特异性片段的编码基因eaeC,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-21a( )-eaeC,经测序鉴定后转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,PAGE检测.目的蛋白经包涵体洗涤,使用含谷胱甘肽氧化还原系统的复性缓冲液进行稀释并结合透析复性后,再用阴离子交换柱Resource Q和分子筛柱Superdex 200进行纯化.将所得高纯度目的蛋白包被ELISA酶标板,对实验动物的免疫血清进行检测.结果:PCR法自EHEC O157:H7基因组扩增出了约570 bp的目的片段;原核表达质粒pET-21a( )-eaeC经酶切及测序鉴定与设计序列-致.转化E coli BL21(DE3)后IPTG诱导目的蛋白表达率约35%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约20×103,破菌后电泳证实目的蛋白均以包涵体形式表达.包涵体复性后目的蛋白纯化效果明显,高纯度的intiminC蛋白包被ELISA板,对实验室动物免疫血清的检测效果良好.结论:EHEC O157:H7紧密粘附素胞外特异性片段经基因克隆后获得了较好的表达,复性纯化后获得高纯度的目的蛋白intiminC,在此基础上建立的ELISA检测方法对实验室动物免疫血清的检测效果良好.为进-步的人血清抗体检测及EHEC O157:H7感染的流行病学研究奠定了基础.     

厄贝沙坦治疗肾功轻度异常高血压的疗效观察

目的:研究厄贝沙坦治疗肾功轻度异常的高血压的安全性及有效性。方法:入选40例肾功轻度异常的原发性高血压病患者,随机分为两组,分别给予厄贝沙坦或波依定治疗4周,每2周随访1次,并于服药前后进行24小时动态血压监测、肾功、电解质测定。结果:厄贝沙坦降压总效率达80%,波依定降压有效率为74%,同时对肾功无恶化,电解质无影响。结论:厄贝沙坦治疗肾功能轻度异常安全、有效。     

矢状窦中部巨大窦镰旁脑膜瘤的显微外科手术治疗

目的：探讨经显微外科手术切除的矢状窦中部巨大型窦镰旁脑膜瘤患者的疗效,并进一步总结该病的显微外科手术策略。方法回顾性分析我院2004年1月至2013年5月经显微外科手术治疗的23例矢状窦中部巨大型窦镰旁脑膜瘤患者的临床资料,分析并总结显微外科手术过程及策略。结果本组患者中,肿瘤累及上矢状窦窦顶或一侧窦壁外层15例,肿瘤突入窦腔4例（其中1例完全闭塞窦腔）,肿瘤位于镰旁未累及上矢状窦4例。达 Simpson I 级切除5例,II 级切除15例,III 级切除3例。全部23例患者平均随访期21.3个月（3～72个月）,9例术前合并不全偏瘫症状的患者中有7例术后有不同程度改善,2例术后短期内加重,3个月后改善同术前。术后3个月复查头部 MRI 示有肿瘤残留者3例,全部患者在随访期内复查均未见肿瘤复发。结论中央区皮质及重要桥静脉的保护是显微外科手术切除矢状窦中部巨大窦镰旁脑膜瘤的关键。娴熟的显微外科技术与合理的手术策略可取得令人满意的疗效,显著提高手术安全性。     

高血压脑出血的手术治疗效果分析

目的探讨高血压脑出血的手术治疗效果。方法对163例高血压脑出血患者采用开颅血肿清除99例,小骨窗开颅血肿清除49例,钻孔引流尿激酶冲洗15例。应用SPSS 11.5统计学软件进行统计学处理,以评价治疗效果。结果开颅血肿清除99例中,良好5例,中残56例,重残20例,植物生存及死亡18例;小骨窗开颅及钻孔引流64例中,良好10例,中残34例,重残12例,植物生存及死亡8例。高血压脑出血的预后与早期手术、血肿部位和血肿大小等相关（P〈0.05）;与手术方法、年龄和性别无关（P〉0.05）。结论掌握好高血压脑出血的手术时机,根据出血量的大小、部位来选择手术方法,可以提高患者的生存率,降低死亡率及致残率。     

外伤性脑梗死原因分析

目的探讨颅脑损伤发生脑梗死的原因、预防及治疗措施。方法分析1999年-2009年间收治的110例重型颅脑外伤病例,分析颅脑损伤后脑梗死的相关因素。结果重型颅脑损伤后并发脑梗死与GCS评分、年龄、有无蛛网膜下腔出血、手术方法、脑疝及时间长短、损伤部位、是否大骨瓣减压等有关（P〈0.05）,与患者性别无关。结论临床救治重型颅脑损伤时应采取合适的手术方法 ,并予以相关措施预防脑梗死。     

肠出血性大肠杆菌0157:H7感染动物模型的建立

目的　建立肠出血性大肠杆菌O15 7:H7感染小鼠动物模型。方法　不同大小(5、7和9周龄)的Balb/c小鼠分别随机分成3组,先以链霉素处理3d ,再分别以不同剂量(1×10 10 CFU和1×10 9CFU)经口感染具链霉素抗性的0 15 7:H7 SMR2菌株,进行临床观察和微生物学、病理学检查。结果　5和7周龄实验组小鼠在感染后2～5d有33%～83%死亡,肾、肝、肺和肠道出现不同程度的病理变化,所有实验组未死小鼠粪便排菌时间在13～2 2d以上。结论　小鼠感染O15 7后可表现出人类感染O15 7所出现的主要临床症状和病理变化,对研究EHEC的致病机制和疫苗研究有重要意义。