广西慢性乙型肝炎患者HBV核心基因启动子突变的研究

目的 了解HBV核心基因启动子突变与肝损害程度或HBeAg状态的关系。方法 用套式PCR扩增59例慢性乙型肝炎患者血清HBV核心基因启动子,阳性者用直接测序法检测。结果35例HBV DNA阳性,阳性率为59.3％。无正常序列标本,最常见的突变类型是nt1762、1764发生双突(A→T、G→A),占57.1％;其次为nt1799位点突变,由C→G,占54.4%,为无义突变;nt1752位点突变,由A→G,使该密码由异亮氨酸变为缬氨酸,占37.1％;nt1753T→C,占20.0%。T_(1762)A_(1764)突变株在HBeAg阳性、阴性患者组中的分布分别为31.3％、79.0％,两者差异有显著性,x~2 8.068 8,P<0.05。结论 HBV核心基因启动子突变在广两慢性乙型肝炎患者较常见,T_(1762)A_(1764)突变株与HBeAg阴性及慢性肝炎有关。     

小鼠白蛋白基因启动子的克隆及其在不同细胞系中转录活性的检测

目的：对比小鼠白蛋白（mouse albumin promoter, ALB）启动子调控下的增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein, EGFP）在不同细胞系中的转录活性。方法：以小鼠全血基因组DNA为模板,聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）扩增ALB启动子序列,克隆至pEGFP-1中,构建重组体pALB-EGFP;在Lipofectamine介导下将pALB-EGFP、pEGFP-N1转染人胎肝细胞L02、人宫颈癌细胞HeLa、人结肠癌细胞SW480、人胰腺癌细胞Bxpc-3;荧光显微镜和流式细胞仪对各转染细胞中EGFP的表达进行检测。结果：pALB-EGFP构建成功;L02转染pALB-EGFP 72 h后,ALB启动子可起始EGFP的表达,转录活性为人巨细胞病毒（cytomegalovirus,CMV）启动子的1/4,其它转染细胞的ALB不能起始EGFP的转录;稳定筛选后,ALB的转录活性达到与CMV相当的水平。结论：构建的重组载体在肝脏来源细胞中具有较高的转录活性, 为建立肝脏特异性表达目的基因的转基因小鼠模型奠定了基础。     

人SREBP-1c启动子报告基因的构建和功能验证

目的 构建人SREBP-1c启动子的荧光素酶报告基因载体并进行功能的初步验证。 方法 提取人血基因组DNA,PCR扩增SREBP-1c的启动子,构建SREBP-1c启动子双荧光素酶的报告基因载体;用双荧光素酶活性检测其功能。Western blotting检测FoxO1对SREBP-1c蛋白的抑制作用。 结果 成功构建了pGL3-Basic-SREBP-1c-promoter的报告基因载体,共转染FoxO1明显抑制了人SREBP-1c启动子的活性,同时过表达FoxO1抑制了SREBP-1c的蛋白表达。 结论 FoxO1通过抑制SREBP-1c的转录来抑制SREBP-1c的表达。     

脑胶质瘤患者组织和血清MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子甲基化状态检测

目的 探讨脑胶质瘤患者组织和血清中MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子CpG岛甲基化发生率及相关性.方法 甲基化特异性PCR(MSP)检测39例脑胶质瘤组织样本及32例预处理的脑胶质瘤血清样本中MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子区的甲基化状态.结果 脑胶质瘤组织MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子区甲基化发生率分别为46.2 %、10.3 % 和20.5 %,肿瘤组织中至少有一种基因甲基化的发生率为64.1 % (25/39);在脑胶质瘤患者外周循环血液中检测到了相关基因甲基化系列,并且与组织中基因甲基化发生率明显相关.结论 MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子甲基化是脑胶质瘤发生过程中常见的分子事件,血清中相关基因DNA甲基化检测有可能为脑胶质瘤诊断和个体化化疗提供一种稳定的无创性检测指标.     

DMD启动子在基因治疗中作用的研究进展

假肥大型进行性肌营养不良(DMD)是一类X连锁隐性退行性肌肉萎缩病。目前,关于DMD基因外显子缺失,内含子断裂点以及所编码dystrophin蛋白的结构已经明确,这对DMD的临床诊断有很大价值;但对于基因治疗来说,明确DMD基因启动子的顺式元件以及反式因子的结构及相互作用关系是十分关键的,这些元件的相互作用对于dystrophin蛋白的转录水平及表达起关键调节作用;研究表明,人工合成的DMD肌启动子活性比生物体内DMD基因启动子活性高,找出启动子关键元件构建特异性高效启动子,将其应用于基因治疗,这是一条新的途径。     

载TK基因PEG-PEI Fe3O4纳米磁流体体外肿瘤细胞抑制的研究

目的:研究载TK基因PEG-PEI Fe3O4纳米磁流体体外肿瘤细胞抑制特性.方法:以RT-PCR方法鉴定其在各细胞系中mRNA水平上的表达状况.采用MTT法研究载TK基因纳米颗粒体外抑制肿瘤细胞的生长作用.结果:PEG-PEI Fe3O4纳米磁流体能有效的转染pAFP-TK进入AFP阳性的HepG2细胞,并在细胞内得以正常表达.MTT法显示,AFP阳性的细胞在转染pAFP-TK后对GCV的敏感性大大提高,细胞存活率明显下降.结论:PEG-PEI Fe3O4纳米磁流体能高效转染pAFP-TK质粒进入细胞,并在AFP阳性肝癌细胞中获得特异性表达,加用GCV后,还可高效杀伤AFP阳性肝癌细胞.     

DNA甲基化与脑肿瘤

随着人类对肿瘤研究的日益深入,许多学者已经清楚地认识到,肿瘤的发生、发展不仅与细胞内基因突变、缺失等因核苷酸序列改变所导致的遗传调控紊乱有关,还与表观遗传调控异常有着密切的联系[1].所谓表观遗传,是指通过DNA甲基化、组蛋白乙酰化和甲基化、染色质构型变化等所导致的在基因表达水平的改变.它只影响基因的转录活性而不影响核苷酸序列的改变[2].其中,DNA甲基化作为常见的表观遗传学修饰模式,在哺乳动物基因表达调控中起着重要的作用.异常甲基化可导致癌基冈的活化、非必需重复序列的转录、抑癌基因及DNA修复基因的沉默等,并能以半保留的方式高保真地传递到子代细胞的基岗组中,最终引发肿瘤[1].     

载TK 基因PEG-PEI Fe3O4纳米磁流体的制备及其相关性质*

目的：制备载pAFP-TK基因PEG-PEI Fe3O4纳米磁流体并探讨其相关特性。 方法：用化学共沉淀法制备PEG-PEI Fe3O4纳米磁流体,将pAFP-TK自杀基因表达质粒包裹,形成载TK基因的PEG-PEI Fe3O4纳米磁流体。 结果：粒径分析仪及原子力显微镜检测载TK基因PEG-PEI Fe3O4纳米磁流体平均粒径202.6 nm,分布均匀,无黏附团聚。琼脂糖凝胶电泳分析PEG-PEI Fe3O4纳米磁流体与DNA比例达10∶1时,结合率最高,达93.56%。PEG-PEI Fe3O4纳米磁流体中的DNA在37 ℃、DNaseI及血清存在下消化数小时后,仍然保持结构的完整。 结论：载pAFP-TK基因表达质粒的PEG-PEI Fe3O4纳米磁流体与DNA有较高的结合率,可以有效地保护质粒DNA等特性。     

人甲状腺鳞癌细胞中端粒酶启动子功能分析

目的 观察不同长度的人端粒酶催化亚单位(hTERT)的启动子对启动增强型绿色荧光蛋白(EGFP)能力的差异,评价启动子启动功能与长度的关系.方法 克隆4段不同长度的端粒酶基因起始位点(ATG)上游序列长约2068、1135、333和142 bp的启动子片段,通过观察EGFP的荧光强度,确定启动效率.结果 显微镜观察荧光亮度及荧光分光光度计检测荧光强度随着启动子长度的缩短而减弱,荧光强度由高至低依次为8.56,7.81,6,88,3.62.结论 人端粒酶的表达强度及端粒酶的活性变化与其启动子的长度有关,而肿瘤细胞的端粒酶表达相对增强,可通过下调启动子活性,为肿瘤的靶向性基因治疗提供新思路.