利用规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9系统敲减α2δ1对人肝癌细胞系Hep-12干性的影响

目的 通过规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9(CRISPR/Cas9)系统敲减人肝癌细胞系Hep12中电压依赖性钙离子通道 α2δ1的表达，观察α2δ1敲减后对肝癌细胞干性的影响。方法 设计3对靶向α2δ1的向导 (sgRNA)，长度为20 bp，构建到lenti CRISPRv2-puro载体上，然后在体外检测sgRNA切割活性，利用慢病毒包装系统包装含有sgRNA的重组质粒，将包装好的病毒感染Hep-12细胞，2 d后加入嘌呤霉素筛选。利用Western blotting验证α2δ1的敲减效果和干性相关基因的表达。通过成球实验检测其体外自我更新能力的变化。结果 测序结果显示，sgRNA成功插入载体质粒；体外切割实验显示，3条sgRNA均有切割活性；Western blotting结果显示，α2δ1基因的表达显著降低，干性相关基因B细胞特异性莫洛尼白血病病毒插入位点1(BMI1)和Nanog的表达显著被抑制；无血清培养基成球实验结果表明，敲减α2δ1导致Hep-12细胞的体外自我更新能力减弱。结论 利用CRISPR/Cas9技术成功构建敲除α2δ1基因的Hep-12细胞系；敲除α2δ1基因后能抑制Hep-12细胞肿瘤干细胞样特性。     

多囊卵巢综合征中西医研究进展

多囊卵巢综合征是一种生殖功能障碍与糖代谢异常并存的内分泌紊乱综合征。是目前青中年妇女发病率较高的内分泌系统疾病，此病可由多方面因素诱发引起下丘脑-垂体-卵巢功能轴紊乱。是育龄期妇女月经不调，不孕等疾病的主要诱因。     

针刺联合西药对多囊卵巢综合征不孕患者子宫内膜厚度、排卵率及临床妊娠率的影响

目的观察针刺联合西药对多囊卵巢综合征(PCOS)不孕患者子宫内膜厚度、排卵率及临床妊娠率的影响。方法 64例PCOS不孕患者由随机数字表法分为对照组(32例)与观察组(32例)。对照组给予炔雌醇环丙孕酮片治疗,观察组在对照组的基础上联合针刺治疗。对比分析两组治疗前后的卵巢体积、窦卵细胞数目、子宫内膜厚度,治疗后月经恢复率、自主排卵率及复发率、生化和临床妊娠率,观察临床疗效及不良反应情况。结果观察组总有效率(93.8%)明显高于对照组(71.9%)(P0.05)。观察组患者月经恢复率、自主排卵率高于对照组(P0.05),复发率低于对照组(P0.05)。两组治疗前的卵巢体积、窦卵细胞数目、子宫内膜厚度比较差异无统计学意义(P0.05);两组治疗后卵巢体积、窦卵细胞数目下降(P0.05),子宫内膜厚度显著升高(P0.05),且观察组的卵巢体积、窦卵细胞数目低于对照组(P0.05),子宫内膜厚度高于对照组(P0.05)。观察组生化妊娠率及临床妊娠率均高于对照组(P0.05)。观察组不良反应发生率(12.5%)与对照组(18.8%)比较差异无统计学意义(P0.05)。结论针刺联合西药可有效改善PCOS不孕患者子宫内膜厚度,提高排卵率及临床妊娠率,安全性高。     

养精种玉汤的现代研究进展

养精种玉汤临床多用于治疗各种不孕症、多囊卵巢综合征、月经过少、闭经溢乳综合征、体外受精-胚胎移植等疾病,疗效确切。但是记载养精种玉汤的古代文献资料较少,现代研究大部分是临床试验和基础实验研究,且存在一些不足:①有些临床试验缺乏中医辨证,治疗疾病未辨证而直接辨病论治;②缺少治疗后随访及远期疗效评价,对妊娠结局的随访亦未予以特定的描述,不便于对研究结果做进一步分析;③相关研究中应完善血清激素水平指标的监测,以增加研究结果的说服力;④大部分研究样本量偏少,影响统计学结果,降低了结果的可靠性;⑤该方的安全性研究仅仅停留在动物实验阶段。因此,今后的研究应以辨证论治为基础,增加样本量,完善相关激素水平的检测,关注随访结果,为临床用药安全性提供更可靠的依据。     

高危型人乳头瘤病毒感染宫颈病变患者体质特点探析

目的探究高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染的宫颈病变患者中医体质分布特点,分析其临床特征与体质类型的关系,为中医药防治HR-HPV感染导致的宫颈病变提供依据。方法采用流行病学研究方法,以问卷调查的方式收集135例HR-HPV感染的宫颈病变患者相关信息,进行体质判定,分析其体质分布特点及主要体质类型与宫颈病变程度、HR-HPV感染特点、年龄及p16抑癌蛋白表达强度的关系。结果HR-HPV感染的宫颈病变患者体质类型所占比例由高到低依次为湿热质、阳虚质、平和质、气虚质、气郁质、阴虚质、痰湿质、血瘀质、特禀质,差异有统计学意义(P<0.05)。不同体质类型患者的宫颈病变程度、HR-HPV感染特点、年龄、p16抑癌蛋白表达强度比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HR-HPV感染的宫颈病变患者体质类型以湿热质、阳虚质为主,其体质类型与宫颈病变程度、HR-HPV感染特点、年龄、p16抑癌蛋白表达强度有关。     

穴位埋线联合二甲双胍对肥胖型多囊卵巢综合征患者糖脂代谢的影响

目的观察穴位埋线联合二甲双胍对肥胖型多囊卵巢综合征患者糖脂代谢的影响。方法将84例肥胖型多囊卵巢综合征患者随机分为对照组42例,观察组42例。对照组给予二甲双胍口服,观察组给予二甲双胍口服同时予穴位埋线治疗。分别在治疗前后观察两组患者的体质量指数(BMI)、腰围、空腹胰岛素、胰岛素抵抗指数(HOMA-ZR)及血脂变化,并比较两组临床疗效。结果两组总有效率比较,观察组优于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。两组治疗前后BMI、腰围、空腹胰岛素及HOMA-ZR比较,差异有统计学意义(P0.05);治疗后,观察组BMI、空腹胰岛素及HOMA-ZR优于对照组(P0.05),两组腰围比较,差异无统计学意义(P0.05)。两组治疗后血脂水平与治疗前比较,差异有统计学意义(P0.05);治疗后,两组总胆固醇(TC)比较,差异无统计学意义(P0.05),两组甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论穴位埋线联合二甲双胍口服能有明显改善肥胖型多囊卵巢综合征患者糖脂代谢水平,提高临床疗效。     

伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞的增殖及细胞周期的影响

目的研究伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞的增殖及细胞周期的影响。方法通过MTT法比较在31.25μmol/L、62.50μmol/L、125μmol/L、250μmol/L、500μmol/L、1000μmol/L共6个浓度的伪士的宁培养24小时、48小时、72小时后对HT-29细胞增殖的抑制作用;通过显微镜细胞观察法检测细胞生长状态;利用流式细胞术检测250μmol/L伪士的宁对HT-29细胞周期的影响。结果伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞有一定的抑制作用,其抑制作用与浓度和作用时间呈正相关,1000μmol/L培养72小时作用最显著,抑制率为97.47%;随着伪士的宁浓度增加,作用时间增大,HT-29细胞密度逐渐变小,局部可见固缩细胞或死亡细胞。伪士的宁(250μmol/L)作用于HT-29细胞后,与空白组相比,G1期细胞数量明显增加,S期细胞数量不变,G2期细胞数量减少,差异有统计学意义(P<0.05),表明伪士的宁可诱使HT-29细胞在G1期发生阻滞,诱导细胞凋亡。结论伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞增殖具有显著抑制作用,且其作用呈现时间依赖和剂量依赖关系,其抑制作用机制可能与阻滞细胞周期有关。     

沉默LIMK1抑制人结肠癌SW480细胞上皮-间质转化

目的:研究沉默LIMK1对人结肠癌SW480细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transformation，EMT）的影响。方法:RT-PCR、Western blot、免疫荧光与免疫组化检测沉默LIMK1对EMT相关分子表达的影响。裸鼠实验检测沉默LIMK1对移植瘤生长的影响。结果:RT-PCR检测显示，沉默LIMK1可下调Vimentin和上调E-cadherin mRNA表达(P<0.05)。Western blot显示，沉默LIMK1可明显下调SW480细胞Snail及Vimentin蛋白表达和上调E-cadherin表达(P<0.05)。免疫荧光显示，LIMK1沉默细胞Snail与Vimentin阳性信号较对照组明显减弱，而E-cadherin阳性信号显著增强。裸鼠实验结果显示，沉默组肿瘤生长速度较SW480组明显减慢(P<0.05)。沉默组移植瘤瘤重（0.16±0.079）g较SW480组（0.86±0.165）g明显减少，瘤重抑制率为97.7%(P<0.05)。LIMK1沉默组移植瘤较对照组的Ki-67、Vimentin、Snail与CD34阳性表达明显减弱，而E-cadherin表达明显增加。结论:沉默LIMK1可体外抑制人结肠癌SW480细胞EMT。     

来曲唑对多囊卵巢综合征患者性激素结合球蛋白水平及糖脂代谢指标的影响

目的探究来曲唑(LE)对多囊卵巢综合征(PCOS)患者性激素结合球蛋白(SHBG)水平及糖脂代谢指标的影响。方法选取2016年6月至2019年6月本院诊治的80例PCOS患者为研究对象。根据非随机临床同期对照研究及患者自愿原则分为观察组、对照组,每组40例,对照组患者口服枸橼酸氯米芬片(初始剂量50 mg/d,无排卵反应后增至100mg/d)治疗,观察组给予LE(月经第5天口服LE,5 mg/d)治疗,两组均持续给药5 d,比较治疗前、疗程结束后两组糖脂代谢指标[总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDLC)、三酰甘油(TG)及空腹胰岛素(INS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)]、SHBG水平、性激素[卵泡生成素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、睾酮(T)]水平、排卵、妊娠情况及药物安全性。结果与同组治疗前比较,疗程结束后两组TC、LDLC、TG、INS、HOMA-IR明显降低(P<0.05),且观察组INS、HOMA-IR明显低于对照组(P<0.05),与同组治疗前比较,疗程结束后两组SHBG、FSH明显升高、LH、E2、T明显降低,且观察组SHBG、FSH相较于对照组显著升高、LH、E2、T显著降低(P<0.05),观察组周期排卵率、临床妊娠率明显高于对照组(χ^2=4.228、4.073,P<0.05),观察组不良反应总发生率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论LE治疗PCOS患者的促排卵效果显著,可明显降低SHBG水平、调节性激素水平并提高临床妊娠率,而促排卵治疗前需指导应用抗雄激素药物、胰岛素增敏剂以有效调节患者的糖脂代谢指标。     

经阴道超声在宫外孕破裂与卵巢黄体破裂鉴别诊断中的应用

宫外孕也称异位妊娠,是指体内受精卵在机体宫腔外部着床,宫外孕破裂出血是妇产科较为严重的一种急腹症,其临床常见表现为突发性下腹疼痛、停经、阴道流血等[1]。卵巢黄体破裂是妇科临床较为常见的一种急症,其发病原因一般包括自发性破裂及外力作用,如下腹受到撞击、用力咳嗽、剧烈奔跑、解大便等促使腹腔压力升高,致使体内黄体破裂[2]。由于两者均存在一定程度的下腹疼痛,故临床诊断时易出现误诊等情况,若不及时正确诊断和治疗,将严重威胁患者的身体健康[3]。故本研究进一步分析经阴道超声在宫外孕破裂与卵巢黄体破裂鉴别诊断中的应用价值。