人可溶性OX40L蛋白ELISA检测试剂盒的研制及其在自身免疫性疾病诊断中的应用

目的研制特异性检测人可溶性OX40L蛋白（sOX40L）的ELISA试剂盒,探讨其在自身免疫性疾病临床诊断中的应用。方法利用两株识别不同抗原表位的鼠抗人OX40L单克隆抗体1G1和4C12分别作为包被抗体和检测抗体,采用双抗体酶联免疫夹心法研制特异性检测人sOX40L的ELISA方法,并对其稳定性、精确性和特异性进行分析。结果①建立的检测人sOX40L酶联免疫试剂盒在抗原浓度为3.91～250ng/ml范围内有良好的线性关系,并具有良好的稳定性、较高的准确性和特异性。②利用该ELISA方法检测到sOX40L蛋白在肾病综合征和Graves’病患者血清中表达水平均显著高于健康对照组。结论成功建立了检测人sOX40L蛋白的ELISA试剂盒,应用该方法检测到sOX40L在多种自身免疫病患者血清中异常高表达。该试剂盒在OX40L分子基础研究以及自身免疫病的临床诊断方面具有潜在的应用价值。     

协同刺激分子B7-H4影响细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌预后的多因素COX模型分析

目的 探讨协同刺激分子B7-H4的表达与胃癌的关系,并分析B7-H4在胃癌组织中的不同表达水平对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)治疗胃癌患者的复发和死亡的风险.方法 对156例胃癌病例(1998年1月1日至2009年12月31日),采用免疫组织化学染色及IHS评估法确定B7-H4的表达状态,使用回顾性队列研究方法调查每位病例的人口学、临床资料及复发时间和死亡时间.应用COX多因素模型分析B7-H4高表达影响胃癌复发和死亡的风险.结果 胃癌组织B7-H4高表达组与B7-H4低表达组比较,患者中位无瘤生存时间(月)及95%CI分别为16(11.9～20.1)和47(22.4～71.6),中位生存时间(月)及95%CI分别为25(19.0～31.1)和43(35.2～50.8).在化学治疗组中,B7-H4低表达患者的中位生存时间明显高于B7-H4高表达患者(36比16),差异有统计学意义(x2=14.14,P<0.01).在化疗联合CIK治疗组中,B7-H4低表达患者的中位生存时间有高于B7-H4高表达患者的趋势(55比34),但差异无统计学意义(x2=1.78,P>0.05).在化学治疗组中,B7-H4低表达患者中位无瘤生存时间高于B7-H4高表达(33比11),差异有统计学意义(x2=18.956,P<0.01).在化疗联合CIK细胞治疗组中,B7-H4低表达患者中位无瘤生存时间显著高于高表达组(90比18),差异有统计学意义(x2=3.842,P<0.05).在调整了性别、年龄等混杂因素后,与B7-H4低表达比较,B7-H4高表达组病例的复发和死亡风险明显增加(RR=2.30,95%CI=1.41～3.75;RR=1.90,95%CI=1.20～3.01).结论 B7-H4高表达可能是提高胃癌复发和死亡风险的独立危险因素.采用CIK细胞回输治疗可控制和干预B7-H4的表达并延长胃癌患者的中位生存时间,胃癌B7-H4低表达可作为CIK细胞治疗的纳入标准.     

B7-H4表达对细胞因子激活的杀伤细胞治疗胃癌患者生存时间的影响

胃癌是威胁人类健康的主要恶性肿瘤之一.寻找新的胃癌预后指标和探索有效的治疗方法是十分紧迫的科学命题.合理应用辅助化学治疗与生物治疗等综合治疗是提高5年生存率的重要途径,确定新的分子靶位成为治疗胃癌新疗法的研究重点.     

人LIGHT基因转染细胞株的建立及其对T细胞协同刺激作用的研究

建立人协同刺激分子LIGHT的基因转染细胞株,探讨其体外对T细胞活化与增殖的协同刺激作用。采用RT-PCR法从活化的人外周血T细胞中克隆人LIGHT编码区全长基因,经EcoR I和BamH I双酶切后插入pIRES2-EGFP真核表达载体构建成pIRES2-EGFP-LIGHT重组子,脂质体法以重组质粒pIRES2-EGFP-LIGHT转染鼠L929细胞。经G418长期加压筛选,免疫荧光标记和流式细胞术分析LIGHT分子在基因转染的L929细胞膜上的表达,MTT法和酶联免疫吸附测定法(ELISA)探讨获得的基因转染细胞L929/LIGHT体外对T淋巴细胞增殖与活化的影响。结果:流式细胞术检测转基因L929/LIGHT细胞膜上能稳定高表达人LIGHT分子。体外细胞共培养试验表明,与未转染LIGHT基因的L929/mock细胞相比,L929/LIGHT能显著地促进抗人CD3单抗(mAb)刺激的T细胞增殖;同时L929/LIGHT亦能明显促进T细胞对IL-2、IFN-γ和IL-10的分泌。建立了稳定高表达人LIGHT分子的基因转染细胞株,LIGHT介导的信号在体外对T细胞增殖和相关细胞因子的分泌具有显著地促进作用。     

人CD133基因转染细胞株的建立及其生物学功能的初步研究

目的:构建人干细胞标记分子CD133-2转基因细胞并探讨CD133-2分子的生物学功能。方法:利用分段克隆和重叠PCR方法从人胎肝cDNA文库中克隆出人CD133-2全长基因,经双酶切后装入真核表达载体p IRES2-EGFP中,用脂质体法转染L929细胞,加入G418选择性培养基进行筛选。经RT-PCR、Western blot、流式细胞术(FCM)等方法鉴定转基因细胞;MTT法分析转基因细胞对T细胞的体外增殖作用;流式细胞仪分析T细胞表面活化分子标记CD4CD25、CD8CD25的表达。结果:成功克隆和构建了能稳定表达人CD133-2分子的转基因细胞CD133-2/L929,该转基因细胞与T细胞共培养可抑制其体外增殖,下调T细胞表面分子CD4CD25和CD8CD25的表达。结论:稳定表达CD133-2蛋白的转基因细胞株的建立为该基因功能的后续研究奠定了物质基础。     

可溶性B7-H3(sB7-H3)在急性白血病中的检测及临床意义

目的:检测sB7-H3在急性白血病病人脑脊液中的不同表达,以及分析该分子的表达与急性白血病的亚型的相关性。方法:采用ELISA的方法来检测sB7-H3在176位白血病病人脑脊液中的表达。依据国际公认的FAB(French-Amer-ican-British)分类系统将急性白血病病人分型。结果:sB7-H3在急性淋系白血病与急性髓系白血病中的表达差异显著(P=0.0381),这与人白血病细胞株的检测结果一致;在急性淋系白血病的亚型中,sB7-H3的表达没有显著性差异;在急性髓系白血病的亚型中,sB7-H3的表达在M3与M5和M4与M5之间存在显著性差异(分别为P=0.024 3和P=0.022 3)。结论:sB7-H3的表达与白血病的分型具有一定的相关性,同时也进一步证实B7-H3参与了人体免疫平衡的调节,可能会为今后急性白血病的临床诊断提供依据。     

细胞因子激活的杀伤细胞治疗胃癌次数与患者死亡风险的相关性研究

消化道肿瘤的治疗是临床关注的热点,根据个体的特征建立最优化的治疗方案是获得最佳疗效的理想方法.     

细胞因子诱导的杀伤细胞治疗老年人胃癌的次数对其生存期的影响

Objective To investigate the relevance between the times of cytokine-induced killer cell (CIK cell) adoptive immunotherapy and the survival of the elderly patients with gastric cancer.Methods Lymphocyte separation medium was used to isolate mononuclear cells, and then the cultured CIK cells were infused back into the patients with gastric cancer. A retrospective cohort study was adopted by using Kaplan-Meier to estimate median survival time and survival rate, using Log-rank test to analyze the impact of clinical factors on survival rate, and using RR and 95% CI to estimate the contact intensity of death outcome, survival time and CIK cell treatment. Results There were nostatistically significant differences in gender,age, tumor site, histological type, invasion depth, lymph node metastasis, pathological grade, tumor size or tumor distribution between chemotherapy group and CIK treatment group (all P＞0.05). The median survival time of patients with gastric cancer was significantly longer in CIK treatment group than in chemotherapy group (61 vs. 21, χ2=10.215, P=0.001). Compared with the patients treated by chemotherapy alone, the increased times of CIK treatment induced more survival rate and 2-5 years life spans (χ2=12. 461, P=0.006). Conclusions With the treatment that CIK cells are infused back into the elderly patients with gastric cancer, the risk of death is reduced, and the lifespan is prolonged, which is associated with the CIK cell treatment times.     

细胞因子治疗^60Coγ射线照射所致急性放射病的实验研究

目的观察重组人白细胞介素-11（rhIL-11）和重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）联用对60Coγ射线照射所致急性放射病的疗效。方法16只比格狗随机分为对照组（5只）、对症治疗组（5只）和细胞因子治疗组（6只）。所有动物均接受4.5Gy60Coγ射线照射,并在照后当天开始治疗,对症治疗组仅给予积极的对症支持治疗,细胞因子治疗组在对症治疗的基础上,加用rhIL-11和rhG-CSF,对照组不给予任何治疗。观察动物的一般情况、外周血象、外周血有核细胞早期凋亡率和坏死率、血浆中细胞因子含量及组织病理学变化。结果细胞因子治疗组动物的45d存活率升高,外周血象也明显改善;外周血有核细胞早期凋亡率和坏死率明显降低;外周血血浆中IL-2和IFN-γ含量在早期均升高,随后IL-2迅速下降,IFN-γ含量相对比较稳定;骨髓组织病理学结果显示造血功能明显恢复。结论rhIL-11和rhG-CSF联用可促进急性放射病比格狗的造血和免疫功能恢复,是治疗急性放射病的有效方法。     

X射线照射对小鼠小肠黏膜杯状细胞的影响

目的通过建立急性辐射损伤动物模型,研究小鼠小肠黏膜急性辐射损伤后的形态学改变及其机制。方法将健康C57BL/6小鼠随机分成正常组和照射组,建立急性辐射损伤模型。照后观察记录小鼠的生存情况,绘制生存曲线;观察小肠黏膜的形态学改变及计数杯状细胞数量;透射电镜观察杯状细胞的超微结构变化;检测小鼠小肠黏膜组织中肿瘤坏死因子（TNF）-α的变化。结果建立急性辐射损伤模型成功;照后小鼠在3d内小肠绒毛被严重破坏并且肠绒毛上杯状细胞显著增多（P〈0.01）;照后杯状细胞出现了典型的坏死特征;小肠黏膜中TNF-α的含量在照后2 d、3 d后较正常小鼠有显著的下降（P〈0.01）。结论小鼠急性辐射损伤后,随着病程的进展,肠道功能受损严重,小肠黏膜中的杯状细胞逐渐增多,同时杯状细胞因照射出现坏死。肠道TNF-α的减少可能加重肠道的辐射损伤效应。