喉癌eIF4E基因的体外转录

目的 克隆喉癌eIF4E基因编码区的cDNA序列,并构建其体外转录载体,获得eIF4E基因编码区mRNA,以便进一步的体外实验研究.方法 利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法,以喉癌Hep-2细胞mRNA为模板,扩增获得全长eIF4E编码区eDNA,与pMD18T连接作全自动测序,并利用基因重组技术构建eIF4E基因mRNA体外转录载体pGEM-7 zf eIF4E.用内切酶XhoI将含有eIF4E基因mRNA的pGEM-7 zf eIF4E质粒消化成线性,以此为模板体外转录出用[a-32P]UTP标记的靶eID4E基因编码区mRNA.结果 经测序证实获得的eIF4E基因cDNA序列与Gene Bank一致,并成功构建了体外转录质粒pGEM-7 zf eIF4E.结论 成功构建了体外转录质粒pGEM-7 zf eIF4E,为进一步研究eIF4E的功能奠定了基础.     

喉鳞状细胞癌中RASSF1A基因启动子区甲基化及蛋白表达

目的：探讨RASSF1A基因启动子区甲基化与喉癌的关系。方法：运用甲基化特异性PCR,检测RASSF1A基因在48例喉癌组织、相对应癌旁组织及48例正常人外周血中的启动子区甲基化情况。用Western blotting方法检测喉癌组织、癌旁组织及正常人外周血中RASSF1A表达情况。结果：在48例喉癌组织、相对应的癌旁组织和48份正常人外周血中,RASSF1A基因启动子区分别有34例（70.83%）、11例（22.92%）和6例（12.50%）发生了甲基化, 喉癌组织甲基化程度明显高于癌旁组织和正常人外周血（P<0.05）。在48例喉癌组织中27例（56.25%）不能正常表达RASSF1A蛋白,而相对应癌旁组织中仅有8例（16.67%）,喉癌组织中RASSF1A蛋白的表达程度明显低于癌旁组织(P<0.01)。启动子区发生甲基化的34例喉癌组织中共有25例（73.53%）呈弱阳性,而7例未发生甲基化的喉癌组织中为1例（14.29%）,两组间比较差异具有显著性(P<0.05)。结论：RASSF1A基因启动子区甲基化与喉癌的发生有关,有望成为喉癌诊断的分子标志。     

siRNA沉默eIF4E诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡及其机制

目的:观察真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)基因的靶向小干扰RNA(siRNA)对喉癌Hep-2细胞中eIF4E基因表达的影响,探讨其诱导喉癌细胞凋亡的作用机制。方法:采用脂质体LipofectamineTM2000将siRNA-eIF4E转染入人喉癌Hep-2细胞(siRNA-eIF4E组),同时设空白对照组和空质粒组。MTT法检测siRNA对Hep-2细胞增殖的抑制作用,罗丹明染色检测转染后细胞内线粒体膜电位的变化,TUNEL染色法检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blotting法检测凋亡相关基因转录和蛋白表达水平的变化。结果:与空白对照组及空质粒组比较,siRNA-eIF4E组Hep-2细胞中eIF4E基因转录和表达水平明显下调(P<0.01),Hep-2细胞生存率下降(P<0.05),细胞线粒体膜电位降低(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05),凋亡相关基因Bim、Bid及Caspase-3表达上调(P<0.05)。结论:siRNA-eIF4E在体外可抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,其机制可能是通过激活线粒体凋亡途径诱导Hep-2细胞凋亡。     

顽固性咽部溃疡粘膜中炎细胞的病理学意义

目的 :观察顽固性咽部溃疡 ( RPU)患者咽部组织粘膜炎细胞的病理意义。方法 :采用组织病理学、免疫组织化学 SP技术随机检测 36例 RPU组溃疡粘膜的 HLA- DR抗原的表达 ,并进行统计学分析。结果 :RPU组溃疡粘膜经组织病理学检查均符合 RPU的诊断 ,病变粘膜中巨噬细胞、T淋巴细胞、上皮细胞、血管内皮细胞异常表达 HLA- DR抗原。结论 :RPU患者溃疡粘膜HLA- DR抗原的异常表达可能在递呈抗原及启动局部免疫过程中起关键作用 ,RPU是一种由T淋巴细胞介导的局部免疫反应。     

公共信息平台在内科学教学中的作用研究

在内科学教学过程中一直存在信息资源共享程度不够高以及师生之间交流不充足的情况,需要通过能够进行资源共享的信息平台进行学习交流.在内科教学改革的过程当中要通过一定的信息平台来实现教学所需的功能,一个运作良好的公共信息平台能提高信息分享程度,同时在信息共享的过程中要由教师来控制整个信息分享的过程,并根据教学内容以及实际教学形式建立或者选择特定的教学平台.就公共信息平台在内科学教学当中的作用展开研究,通过对内科教学公共信息平台的主要作用以及运用方式进行探讨并加以总结,希望对内科学教学有所帮助.     

喉癌喉部分切除术术后喉囊肿一例及文献复习

正患者男,60岁,因"喉恶性肿瘤"于2014年3月于外院行"垂直半喉切除术",术后半年声嘶伴呼吸困难1个月后就诊于我院。电子喉镜示:喉术后改变,右侧喉室膨隆,凸向喉腔,喉口狭窄,黏膜光滑(图1)。喉部CT示:会厌软骨右侧可见团块状软组织密度影,CT值约39 HU,与会厌分界不清,向下累及右侧杓会厌皱襞、右侧声带,局部突向喉腔。喉腔受压变形,病变沿甲状软骨右上间隙突入颈部软组     

转化生长因子β1含量与喉癌侵袭转移

本文应用免疫学双抗体夹心法检测喉癌患者血清中转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)含量,旨在探讨TGF-β1含量变化与喉癌生物学行为的关系。68例喉癌患者血清均为我科住院患者提供,均有病理诊断。根据病理分级I级18例,Ⅱ级24例,Ⅲ级26例。临床分期:T116例     

喉癌病人外周血中期因子水平与喉癌临床特征及预后的关系

目的　研究喉癌病人外周血中期因子 (midkine,MK)水平与喉癌临床特征及预后的关系。方法　采用酶联免疫吸附测定检测喉癌病人及健康体检者 (对照组 )外周血中MK水平 ,通过SPSS软件分析MK与喉癌临床特征及预后的关系。结果　喉癌病人血清MK水平为 (40 0± 2 2 9) pg/ml,对照组为(1 1 8± 97) pg/ml,差异有统计学意义 (P <0 .0 0 1 )。以 30 0 pg/ml为分界值 ,MK阳性率随喉癌进展呈上升趋势 (P <0 .0 1 ) :I期 5 3%(1 0 / 1 9) ,Ⅱ期 6 0 %(1 8/ 30 ) ,Ⅲ期 6 2 %(2 8/ 4 5 ) ,Ⅳ期 75 %(1 5 / 2 0 )。MK水平与T分期成正相关 (P <0 .0 1 )。随访病例 5 8例 ,经Kaplan Meier生存曲线分析 ,5年生存率MK阳性者为 5 3%,阴性者为 77%,差异有统计学意义(P <0 .0 5 )。结论　高水平的MK(≥ 30 0 pg/ml)与不良预后相关。血清MK水平可以作为预测喉癌病人的生存期的一个临床指标。     

10-23脱氧核酶靶向抑制喉癌eIF4E基因表达的实验研究

目的：在细胞水平上探讨10-23脱氧核酶（DNAzyme）成为新型喉癌基因治疗药物的可能性。方法：设计合成针对原癌基因eIF4EmRNA编码区的1059位点的10—23DNAzyme，并对其进行硫代磷酸化修饰，经脂质体转染Hep-2细胞，倒置相差荧光显微镜观察Hep-2细胞对5-FAM荧光素标记10—23DNAzyme的摄取，流式细胞仪计算转染效率，半定量RT-PCR、westernblot观察其对喉癌eIF4E基因表达的抑制效应。结果：倒置相差荧光显微镜观察在转染12、24、36、48h后，阳性转染的细胞均可发出绿色荧光，流式细胞仪检测转染效率分别为60％、85％、90％、89％；修饰的10—23DNAzyme作用于Hep-2细胞后可显著抑制eIF4E基因的表达，明显低于作为对照的转染空脂质体组和Hep-2细胞组（均P＜0．05）。结论：经过硫代化修饰的10—23DNAzyme在细胞水平上能高效阻断eIF4E基因的表达，是一种高度特异性的、高效的基因治疗剂。     

RH-EGF结合等离子消融术治疗老年变应性鼻炎的疗效

目的研究老年常年变应性鼻炎患者低温等离子消融术后应用重组人表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor,RH-EGF)的临床效果。方法 50例老年常年变应性鼻炎患者随机分为试验组和对照组,各25例,均在鼻内镜下行低温等离子射频消融术。试验组术后鼻腔用RH-EGF凝胶,对照组术后鼻喷生理盐水,总疗程2 w。术后随访6个月。观察临床疗效及糖精实验观察术后6个月鼻腔黏液纤毛传输功能。结果①试验组和对照组临床有效率分别为86.84%、100%。术后6个月试验组的MTR较对照组明显缩短,两组比较有统计学意义(P<0.05)。结论 RH-EGF可有效促进老年变应性鼻炎患者术后创面恢复。