基于λ Red重组系统敲除鼠伤寒沙门菌yejE基因

目的 采用改良的λ Red同源重组技术，以减毒沙门菌TT-16（ΔclpP TT-1）为前体菌，构建敲除yejE基因的减毒沙门菌TT-54（ΔclpP ΔyejE TT-1），为后续研究yejE基因的功能奠定基础。方法 （1）将重组质粒PKD46导入减毒沙门菌TT-16（ΔclpP TT-1），获得一次重组受体菌TT-51（ΔclpP PKD46 TT-1）；（2）通过PCR扩增获得yejE基因的一次同源重组打靶片段，将其导入TT-51（ΔclpP PKD46 TT-1），利用四环素平板筛选，获得重组菌TT-52（ΔclpP ΔyejE::tetRA TT-1）；（3）将重组质粒PKD46导入重组菌TT-52，获得同源重组受体菌TT-53（ΔclpP ΔyejE::tetRA PKD46 TT-1）；（4）将PCR扩增获得的yejE基因二次同源重组打靶片段导入TT-53（ΔclpP ΔyejE::tetRA PKD46 TT-1），通过四环素敏感平板筛选，获得敲除了yejE基因的减毒沙门菌TT-54（ΔclpP ΔyejE TT-1）。结果 通过两轮（一次和二次）λ Red同源重组，减毒沙门菌TT-16（ΔclpP TT-1）的yejE基因被成功敲除，PCR及测序鉴定结果符合预期。结论 基于模式菌（大肠杆菌）所构建的λ Red同源重组技术完全适用于沙门菌；通过两轮λ Red同源重组，可实现对沙门菌特定靶基因的无痕敲除。     

螺旋CT多平面重建术诊断骨关节损伤的准确性

目的探讨螺旋CT多平面重建术诊断骨关节损伤的准确性。方法选取2016年1月至2018年10月在医院接受治疗的骨关节损伤患者72例,均接受X线平片、CT轴位扫描、CT多平面重建术检查诊断,比较3种检查方法的检查结果。结果CT轴位扫描和CT多平面重建术对骨关节损伤患者的检出率明显高于X线片检查,差异有统计学意义(P<0.05);在对隐匿性骨关节损伤患者进行检查时,CT多平面重建术的诊断效果优势明显。结论骨关节损伤患者接受CT多平面重建术检查,可以对患者受损部位的骨关节进行全面探查,具有极高的疾病检出率。     

经皮微波消融治疗鼻咽癌局限肝转移的疗效分析

背景与目的：局限性肝转移瘤由于数目、大小可控,局部微创治疗可以有效提高患者的生存期,微波消融已经成为肝转移瘤的重要治疗手段。该研究旨在探讨经皮肝穿刺微波消融治疗局限性鼻咽癌肝转移瘤的应用价值。方法：收集湖南省肿瘤医院自2011年9月—2014年10月共26例晚期放化疗失败的鼻咽癌肝脏转移患者的临床资料。患者肿瘤病灶数目小于等于3个,直径小于等于5 cm,且无其他远处转移病灶。在B超引导下行经皮肝穿刺微波消融治疗,26例患者共完成43次消融治疗,术后1个月复查肝功能、增强CT或者MRI,在mRECIST标准评价肿瘤治疗疗效。观察患者术后并发症,统计患者无疾病进展时间(progression-free survival,PFS)及总生存期(overall survival,OS)。结果：26例患者共53个病灶,其中完全消融(complete ablation,CA)20例(20/26,77.0%),部分消融(part ablation,PA)3例(3/26,11.5%),整体有效率(CA+PA)为88.5%,无严重并发症出现,26例患者0.5、1和2年生存率分别为96.1%、65.3%和23.0%,PFS为11.4个月,中位生存期(median survival time,MST)为17.8个月,OS为23.7个月。结论：经皮肝穿刺微波消融治疗局限性鼻咽癌肝转移瘤是微创、安全、有效的治疗方法。     

柚皮苷对去势大鼠骨质疏松性骨折愈合的影响

目的:探讨柚皮苷对去势大鼠骨质疏松性骨折愈合过程的影响。方法:3月龄雌性Wistar大鼠50只,随机分成去势组(OVX)40只,假手术组(SHAM)10只。去势组采用背部双侧去卵巢术建立去势大鼠骨质疏松模型;3个月后,将去势组及假手术组大鼠均造成左侧股骨中点骨折(OPF),然后用克氏针髓内固定,建立骨质疏松性骨折模型。再将制成骨折模型的去势组随机分成模型空白组(OVX+N)和3个实验组(OVX+L/M/H),每组10只,3个实验组分别予以柚皮苷(低剂量组1 mg/kg,中剂量组10 mg/kg,高剂量组100 mg/kg)灌服,SHAM组和OVX+N组给予同体积的双蒸水灌服,共4周。于OPF术后当日、4周、8周,C型臂X光机行X片检查,观察髓内针位置和骨折断端愈合情况;OPF术后8周,处死大鼠,取骨折处骨痂组织,行光镜下组织学观察、血生化指标检测及三点弯曲实验,测量骨痂最大承载负荷。结果:1去势组骨密度值显著低于SHAM组(P0.05),骨质疏松模型建立。2组织学观察结果显示,术后8周SHAM组见大量成熟骨小梁形成;OVX+M组原始骨小梁逐渐改建成为成熟骨小梁;OVX+L、M两组有大量原始骨小梁,OVX组开始出现少量原始小梁状骨。3实验组中、高剂量组的碱性磷酸酶(B-ALP)、Ⅰ型前胶原羧基端肽(PICP)、骨钙素(BGP)水平较模型组明显降低(P0.05,P0.01);低、中、高剂量组之间差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。4放射学观察结果示,OPF术后4周X线检测结果示各组均有骨痂形成,SHAM组有大量骨痂,OVX+M、H组有少量骨痂,OVX+N及OVX+L组有较少骨痂。OPF术后8周X线检查示,SHAM组骨折线模糊,有连续骨痂通过骨折断端;OVX+H、M、L三组骨折线稍显模糊,生成骨痂大小依次为H组M组L组;OVX+N组骨折线仍清晰。5术后8周生物力学测定示,OVX+N组的三点弯曲载荷明显低于SHAM组(P0.01),实验组中、高剂量组的载荷较OVX+N组明显增高(P0.05,P0.01);低、中、高剂量组之间差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:柚皮苷对去卵巢大鼠OPF有促进骨折愈合的作用,且可能存在一定的剂量依赖关系。     

谢林运用风药治疗椎动脉型颈椎病

椎动脉型颈椎病是骨科临床常见疾病,目前其发病机理尚不明确,临床治疗效果欠佳,中医药在治疗中取得较好效果。风药与椎动脉型颈椎病病因病机的联系密切相关。谢林认为风药有疏风解表、平肝息风、升阳益气、化痰胜湿、行气通瘀、引经报使等功效,在辨证施治中适当应用风药,常有点睛之妙。附验案1则以佐证。     

ClpXP蛋白复合物对沙门氏菌囊泡结构稳定性的影响初探

目的 初探ClpXP蛋白复合物是否会对沙门氏菌囊泡（Salmonella - containing vacuole, SCV）结构稳定性产生影响。方法 （1）将表达绿色荧光蛋白的质粒（pGEX - 6P - 1 - sf - GFP）通过电转化方式导入野生型鼠伤寒沙门氏菌TT - 1（Wild - type）及敲除了clpP基因的鼠伤寒沙门氏菌TT - 16（ΔclpP TT - 1），分别获得表达绿色荧光蛋白的野生型鼠伤寒沙门氏菌TT - 84（pGEX - 6P - 1 - sf - GFP TT - 1）和敲除了clpP基因的鼠伤寒沙门氏菌TT - 85（ΔclpP pGEX - 6P - 1 - sf - GFP TT - 1）；（2）将构建好的菌株以100∶1的感染复数感染小鼠巨噬细胞RAW264.7，于感染后2 h和6 h收集细胞进行免疫荧光染色，采用激光共聚焦显微镜观察并计数SCV内部和外部的细菌数量，计算逃逸率。结果 感染2 h和6 h后，敲除了clpP基因的鼠伤寒沙门氏菌TT - 85（ΔclpP pGEX - 6P - 1 - sf - GFP TT - 1），其SCV逃逸率显著高于野生型鼠伤寒沙门氏菌。结论 ClpXP蛋白复合物对SCV的结构稳定性具有显著影响。     

耳穴埋豆联合随身灸干预大学生原发性痛经的护理

目的 观察耳穴埋豆联合随身灸对大学生原发性痛经的改善情况。方法 选取2021年4-9月纳入原发性痛经女大学生114例作为研究对象，将其随机分为对照组、随身灸组、联合组(耳穴埋豆联合随身灸组),每组38例。对照组采用健康教育，随身灸组采用健康教育和随身灸，联合组采用健康教育、随身灸和耳穴埋豆联合治疗，通过对比分析三组疼痛视觉模拟量表及痛经症状评分量表评分分值，观察耳穴埋豆联合随身灸对大学生原发性痛经的改善情况。结果 随身灸组、联合组疗效与治疗前比较，差异均有统计学统计意义(P<0.05),且联合组效果最佳，随身灸组次之，对照组无明显疗效。三组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 耳穴埋豆联合随身灸改善大学生原发性痛经作用效果明显，简单方便，具有推广性。     

高糖及高胰岛素对人血管平滑肌细胞增殖、迁移及miR-145水平的影响

目的探讨高血糖和高胰岛素对人miR-145水平的影响。方法将人血管平滑肌细胞(VSMC)分为正常组、高糖组(25 mmol/L)、高胰岛素组(300 m U/L)和高糖高胰岛素组,各组细胞培养72 h后,用real-time PCR测定各组VSMC中miR-145的水平;用四甲基偶氮唑盐(MTT)法及细胞划痕法分别测定VSMC的增殖及迁移。miR-145病毒转染VSMC 48 h后,再分为上述4组,用上述方法测定病毒转染后VSMC的增殖与迁移。结果与正常组相比,其他3组miR-145水平均不同程度下降(P0.05),尤以高糖高胰岛素组下降最明显(P0.01);高糖及高胰岛素促进VSMC的增殖和迁移。miR-145病毒转染后,各组VSMC的增殖和迁移均较转染前明显降低(P0.05)。结论高血糖及高胰岛素降低VSMC中miR-145的表达,miR-145的过表达可抑制VSMC的增殖和迁移。