质谱技术对类风湿关节炎患者滑膜免疫复合物差异蛋白质的分析

目的利用质谱技术对类风湿关节炎(RA)患者关节滑膜中的免疫复合物进行全面的抗原谱分析。方法选取本院3例RA患者和3例骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者的关节滑膜,通过蛋白质提取、免疫沉淀、胶内酶解和液相色谱串联质谱系统,对滑膜免疫复合物进行抗原谱分析。用FOT值(fraction of total)评价蛋白质的丰度,通过FOT值的比较筛选出上调蛋白和下调蛋白。用David和String软件对差异蛋白质进行功能富集、相互作用网络和信号通路分析。结果在RA和OA患者的关节滑膜组织免疫复合物中分别鉴定出511和526种蛋白质。通过维恩图比较,仅在RA组出现的蛋白质有170种。RA组有45种蛋白质发生上调,85种蛋白质发生下调。结论热休克蛋白HSP90AA1、HSP70、人类白细胞抗原(HLA)-G、硫氧还蛋白、膜联蛋白A2和玻连蛋白可能通过不同的机制参与RA的发病过程,具有RA新的生物标志物的潜在应用价值。     

不同底物在CIM试验检测革兰阴性杆菌碳青霉烯酶中的应用评价

目的评价不同碳青霉烯类抗生素作为指示底物对碳青霉烯类抗生素不活跃检测方法(CIM)结果的影响。方法分别用美罗培南、亚胺培南和厄他培南作为指示药物,对90株肠杆菌科细菌和105株非发酵菌进行CIM试验来检测碳青霉烯酶,并用PCR方法检测碳青霉烯酶基因。结果肠杆菌科细菌中碳青霉烯酶基因阳性菌株用美罗培南检出率为91.0%(71/78),亚胺培南检出率为92.3%(72/78),厄他培南检出率为85.9%(67/78),3种药物检出率差异无统计学意义(χ2=1.95,P=0.377);肠杆菌科细菌中碳青霉烯酶基因阴性菌株CIM试验用美罗培南、亚胺培南和厄他培南检测均阴性。非发酵菌碳青霉烯酶基因阳性菌株用美罗培南检出率为94.0%(63/67),亚胺培南检出率为74.6%(50/67),厄他培南检出率为70.1%(47/67),美罗培南检出率均高于厄他培南和亚胺培南的检出率,差异有统计学意义(P0.05)。32株碳青霉烯酶基因阴性鲍曼不动杆菌菌株中有2株美罗培南CIM试验阳性,而亚胺培南和厄他培南检测均阴性。结论应用美罗培南作为反应底物进行CIM试验与基因检测的一致性最高。此方法操作简单,成本低廉,结果易判断,适合在临床实验室开展。     

肠道内、外感染气单胞菌的菌种分布特征及毒力基因分析

目的了解肠道内、外分离气单胞菌菌种分布及毒力基因谱的差异,探究该菌致病性与感染部位的关系。方法收集2013年5月至2015年9月急性腹泻患者及肠道外标本来源的气单胞菌156株,采用PCR方法检测其18种毒力基因hlyA、aerA、act、alt、ast、aexT、ascV、aopP、asc F-G、gcat、tapA、fla、Ser、exu、ahyB、epr CAI、lip、laf,并统计分析肠道内、外来源气单胞菌毒力基因谱的差异。结果 156株气单胞菌中肠道内气单胞菌79株,以豚鼠气单胞菌为主(51.9%);肠道外气单胞菌77株,主要为嗜水气单胞菌(48.1%)和豚鼠气单胞菌(39.0%)。gcat、act、fla、ahyB、exu、lip基因在肠道内、外气单胞菌中的检出率较高(45.57%),而aexT、aopP、asc F-G、ascV则较低(20.78%);gcat、ahyB、laf、ast、exu、lip、hlyA、aerA在肠道内气单胞菌中的检出率显著低于肠道外(P0.05);嗜水气单胞菌gcat、ahyB、exu、lip、epr CAI、hlyA在肠道外的检出率显著高于肠道内(P0.05);豚鼠气单胞菌lip、hlyA在肠道外的检出率显著高于肠道内(P0.05),而aopP反之;维氏气单胞菌毒力基因在肠道内、外的检出率差异无统计学意义。结论肠道内、外气单胞菌感染的菌种分布及携带的毒力基因谱存在差异,临床需区别对待。     

精神分裂症患者白细胞中循环miRNA的表达及其临床意义

目的探讨白细胞中循环miRNA在精神分裂症SZ的表达水平及其诊断价值。方法收集90例SZ患者作为疾病组,90例双相情感障碍(BPAD)患者作为病例对照组,90例体检健康者作为健康对照组,采用实时荧光定量PCR检测各组白细胞中8个miRNA(miR-31-5p、miR-99b-5p、miR-107、miR-134-5p、miR-487b-3p、miR-181b-3p、miR-431-5p和miR-433-5p)的表达水平,并进行统计学分析,以验证差异表达的miRNA;绘制受试者工作曲线(ROC)曲线,建立人工神经网络(ANN)诊断模型,并分析其诊断价值。结果 SZ患者存在6个显著低表达的miRNA,其ROC曲线下面积(AUCROC)分别为miR-31-5p:0.931,miR-487b-3p:0.887,miR-99b-5p:0.869,miR-431-3p:0.763,miR-134-3p:0.756,miR-107:0.721;在ANN模型中,最优模型的AUCROC为0.960,敏感性86.7%,特异性95.6%。结论白细胞中6个差异表达的miRNA可能作为SZ诊断的非侵袭性生物学标志物,而ANN诊断模型可以提高miRNA对SZ的诊断价值。     

Xist lncRNA在X染色体相关疾病中的表达和意义

哺乳动物基因组转录大量RNA转录本,包括编码RNA和非编码RNA(ncRNA)。随着对非编码RNA研究的不断深入,越来越多的研究表明,长链非编码RNA(lncRNA)在细胞调控中发挥着重要作用。Xist lncRNA被认为在雌性动物细胞内能够起到剂量补偿(dosage compensation)作用,在许多疾病中检测出Xist lncRNA的异常表达,表明Xist lncRNA可能在多种疾病包括肿瘤的发生、发展中发挥重要作用。该文就Xist lncRNA在X染色体相关疾病中的分布和作用作一综述。     

MALAT1在子宫内膜异位症中的表达及研究

目的探讨肺腺癌转移相关转录因子1(MALAT1)在子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)中的表达及其诊断价值。方法于GCBI平台收集并分析EMS相关样本基因信息,筛选出MALAT1基因;提取EMS患者及非子宫内膜异位症患者(非EMS)组织及血清样本中的总RNA,qRT-PCR验证MALAT1基因的表达水平,并分析其与月经周期的关系,采用ROC曲线分析血清MALAT1鉴别EMS的效能。结果 GCBI平台基因信息分析结果提示,与非EMS组相比,EMS组中MALAT1基因表达下调1.35倍(t=-3.27,P0.01);EMS患者卵巢囊肿组织及在位内膜MALAT1的表达水平(0.41±0.18,0.61±0.12)均低于非EMS患者子宫内膜组织(1.05±0.34),差异有统计学意义(t分别为5.87和4.48,P0.01),但与EMS患者及非EMS患者月经周期均无关(t分别为1.54和1.52,P0.05);EMS患者卵巢异位囊肿组织MALAT1的表达水平低于其在位内膜(t=3.77,P0.01);EMS患者血清MALAT1表达水平(0.60±0.18)低于非EMS患者(1.05±0.32),差异有统计学意义(t=5.18,P0.01);ROC曲线下面积(AUCROC)为0.88,当cut-off值为0.74时,MALAT1鉴别EMS的敏感性和特异性分别为82.4%和92%,约登指数为74.4%。结论 MALAT1的低表达可能与EMS发生、发展有关,血清MALAT1水平对EMS具有一定的鉴别价值。     

载脂蛋白M-1-磷酸鞘氨醇轴与炎症相关性疾病关系的研究进展

载脂蛋白M-1-磷酸鞘氨醇轴(apo M-S1P)由载脂蛋白M(apo M)、1-磷酸鞘氨醇(S1P)及其受体组成,其中apo M主要存在于高密度脂蛋白(HDL)中,大部分由肝脏和肾脏表达,在动脉粥样硬化、脓毒血症、糖尿病等炎症相关疾病过程中发挥重要作用,S1P作为apo M的伴侣分子,参与血管生成、淋巴细胞迁移、炎症因子和黏附分子表达等多种生理病理过程,现已明确apo M是S1P的生理性载体,可能载运S1P与其受体相结合,并调节S1P相关信号通路,从而调控炎症相关疾病的发生与发展。现就apo M与S1P之间相互关系以及apo M-S1P轴在动脉粥样硬化、脓毒血症等炎症相关性疾病中的研究进展作一综述。     

浙江省柯萨奇病毒A16 VP1基因特征分析及B细胞抗原表位预测

目的了解浙江省柯萨奇病毒A16(CA16)VP1基因特征及其变迁规律并预测VP1蛋白上B细胞抗原表位。方法在Gen Bank检索并下载35个浙江省CA16流行株及69个已知基因型CA16参考株的VP1基因序列,使用MEGA 6.0软件进行比对分析和构建种系进化树,确定浙江省CA16流行株的基因型,并分析VP1核苷酸和氨基酸同源性及氨基酸变异;运用DNA Star中的Protean模块预测VP1上可能的线性B淋巴细胞抗原表位。结果浙江省CA16病毒基因型为B1基因型(34株)和A基因型(1株)。B1型中以B1b亚型(24株)占绝对优势,其次为B1a亚型(10株)。浙江省CA16流行株VP1核苷酸和氨基酸同源性分别为75.5%~100%和89.5%~100%;VP1区氨基酸序列高度保守,但也存在部分变异。VP1中可能的B细胞抗原表位(氨基酸肽段)有13个,分别为10-20、30-38、57-62、73-79、98-106、118-123、159-168、173-177、184-189、240-246、265-273、274-284和289-295。结论浙江省CA16流行株存在A、B1 2个基因型,B1b和B1a为主要基因型,其VP1区氨基酸变异程度较低,VP1中13个预测的B细胞抗原表位可为CA16疫苗的研制提供科学依据。     

Xpert MTB/RIF和T-SPOT.TB对涂阴肺结核诊断价值的评估

目的评估并比较Xpert MTB/RIF和T-SPOT.TB对涂阴肺结核的诊断价值。方法收集2014年12月至2015年12月天津市海河医院门诊和住院的呼吸疾病患者208例,分为结核组125例和对照组83例,同时对其痰液样本行涂片镜检、液体快速培养和Xpert MTB/RIF检测,对其血液样本行T-SPOT.TB试验。结果 Xpert MTB/RIF诊断涂阴肺结核的敏感性、特异性、ROC曲线下面积(AUC)及优势比(odds ratio,OR)分别为56.5%(95%CI:45.8%~66.8%)、98.8%(95%CI:93.5%~100.0%)、0.777(95%CI:0.708~0.836)及106.60(χ~2=62.87,P0.01);T-SPOT.TB诊断涂阴肺结核的敏感性、特异性、AUC及OR值分别为83.7%(95%CI:74.5%~90.5%)、62.7%(95%CI:51.3%~73.0%)、0.732(95%CI:0.660~0.796)及8.61(χ~2=39.44,P0.01);两者敏感性(χ~2=18.58)和特异性(χ~2=28.03)的差异有统计学意义(P0.05),AUC的差异无统计学意义(Z=1.235,P0.05);Xpert MTB/RIF阴性的涂阴肺结核患者T-SPOT.TB阳性率为70.0%。结论 Xpert MTB/RIF和T-SPOT.TB均有助于早期、快速、准确地辅助诊断肺结核,T-SPOT.TB可以作为Xpert MTB/RIF的后续试验辅助诊断Xpert MTB/RIF阴性的涂阴肺结核。     

实时荧光定量PCR非特异性分析

聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)因灵敏度高、操作简便在各个领域得到了广泛的应用。然而,伴随其高灵敏度存在的非特异性问题在一定程度上限制了其应用。不同于普通检测方法,该技术的非特异性问题主要由可以指数扩增的引物二聚体(primer dimer,PD)引起。对此,引物设计时使用的中部同序引物对可以从根本上避免PD的产生,从而解决由其引起的非特异性问题。该文从PCR的发展和本质、PCR非特异性产生的原因和应对策略等方面作一总结及分析。