不同底物在CIM试验检测革兰阴性杆菌碳青霉烯酶中的应用评价

目的评价不同碳青霉烯类抗生素作为指示底物对碳青霉烯类抗生素不活跃检测方法(CIM)结果的影响。方法分别用美罗培南、亚胺培南和厄他培南作为指示药物,对90株肠杆菌科细菌和105株非发酵菌进行CIM试验来检测碳青霉烯酶,并用PCR方法检测碳青霉烯酶基因。结果肠杆菌科细菌中碳青霉烯酶基因阳性菌株用美罗培南检出率为91.0%(71/78),亚胺培南检出率为92.3%(72/78),厄他培南检出率为85.9%(67/78),3种药物检出率差异无统计学意义(χ2=1.95,P=0.377);肠杆菌科细菌中碳青霉烯酶基因阴性菌株CIM试验用美罗培南、亚胺培南和厄他培南检测均阴性。非发酵菌碳青霉烯酶基因阳性菌株用美罗培南检出率为94.0%(63/67),亚胺培南检出率为74.6%(50/67),厄他培南检出率为70.1%(47/67),美罗培南检出率均高于厄他培南和亚胺培南的检出率,差异有统计学意义(P0.05)。32株碳青霉烯酶基因阴性鲍曼不动杆菌菌株中有2株美罗培南CIM试验阳性,而亚胺培南和厄他培南检测均阴性。结论应用美罗培南作为反应底物进行CIM试验与基因检测的一致性最高。此方法操作简单,成本低廉,结果易判断,适合在临床实验室开展。     

载脂蛋白M-1-磷酸鞘氨醇轴与炎症相关性疾病关系的研究进展

载脂蛋白M-1-磷酸鞘氨醇轴(apo M-S1P)由载脂蛋白M(apo M)、1-磷酸鞘氨醇(S1P)及其受体组成,其中apo M主要存在于高密度脂蛋白(HDL)中,大部分由肝脏和肾脏表达,在动脉粥样硬化、脓毒血症、糖尿病等炎症相关疾病过程中发挥重要作用,S1P作为apo M的伴侣分子,参与血管生成、淋巴细胞迁移、炎症因子和黏附分子表达等多种生理病理过程,现已明确apo M是S1P的生理性载体,可能载运S1P与其受体相结合,并调节S1P相关信号通路,从而调控炎症相关疾病的发生与发展。现就apo M与S1P之间相互关系以及apo M-S1P轴在动脉粥样硬化、脓毒血症等炎症相关性疾病中的研究进展作一综述。     

精神分裂症患者白细胞中循环miRNA的表达及其临床意义

目的探讨白细胞中循环miRNA在精神分裂症SZ的表达水平及其诊断价值。方法收集90例SZ患者作为疾病组,90例双相情感障碍(BPAD)患者作为病例对照组,90例体检健康者作为健康对照组,采用实时荧光定量PCR检测各组白细胞中8个miRNA(miR-31-5p、miR-99b-5p、miR-107、miR-134-5p、miR-487b-3p、miR-181b-3p、miR-431-5p和miR-433-5p)的表达水平,并进行统计学分析,以验证差异表达的miRNA;绘制受试者工作曲线(ROC)曲线,建立人工神经网络(ANN)诊断模型,并分析其诊断价值。结果 SZ患者存在6个显著低表达的miRNA,其ROC曲线下面积(AUCROC)分别为miR-31-5p:0.931,miR-487b-3p:0.887,miR-99b-5p:0.869,miR-431-3p:0.763,miR-134-3p:0.756,miR-107:0.721;在ANN模型中,最优模型的AUCROC为0.960,敏感性86.7%,特异性95.6%。结论白细胞中6个差异表达的miRNA可能作为SZ诊断的非侵袭性生物学标志物,而ANN诊断模型可以提高miRNA对SZ的诊断价值。     

Xist lncRNA在X染色体相关疾病中的表达和意义

哺乳动物基因组转录大量RNA转录本,包括编码RNA和非编码RNA(ncRNA)。随着对非编码RNA研究的不断深入,越来越多的研究表明,长链非编码RNA(lncRNA)在细胞调控中发挥着重要作用。Xist lncRNA被认为在雌性动物细胞内能够起到剂量补偿(dosage compensation)作用,在许多疾病中检测出Xist lncRNA的异常表达,表明Xist lncRNA可能在多种疾病包括肿瘤的发生、发展中发挥重要作用。该文就Xist lncRNA在X染色体相关疾病中的分布和作用作一综述。     

MALAT1在子宫内膜异位症中的表达及研究

目的探讨肺腺癌转移相关转录因子1(MALAT1)在子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)中的表达及其诊断价值。方法于GCBI平台收集并分析EMS相关样本基因信息,筛选出MALAT1基因;提取EMS患者及非子宫内膜异位症患者(非EMS)组织及血清样本中的总RNA,qRT-PCR验证MALAT1基因的表达水平,并分析其与月经周期的关系,采用ROC曲线分析血清MALAT1鉴别EMS的效能。结果 GCBI平台基因信息分析结果提示,与非EMS组相比,EMS组中MALAT1基因表达下调1.35倍(t=-3.27,P0.01);EMS患者卵巢囊肿组织及在位内膜MALAT1的表达水平(0.41±0.18,0.61±0.12)均低于非EMS患者子宫内膜组织(1.05±0.34),差异有统计学意义(t分别为5.87和4.48,P0.01),但与EMS患者及非EMS患者月经周期均无关(t分别为1.54和1.52,P0.05);EMS患者卵巢异位囊肿组织MALAT1的表达水平低于其在位内膜(t=3.77,P0.01);EMS患者血清MALAT1表达水平(0.60±0.18)低于非EMS患者(1.05±0.32),差异有统计学意义(t=5.18,P0.01);ROC曲线下面积(AUCROC)为0.88,当cut-off值为0.74时,MALAT1鉴别EMS的敏感性和特异性分别为82.4%和92%,约登指数为74.4%。结论 MALAT1的低表达可能与EMS发生、发展有关,血清MALAT1水平对EMS具有一定的鉴别价值。     

3 463例O型血孕妇产前IgG抗A（B）抗体效价分析

目的探讨微柱凝胶法检测IgG抗A(B)抗体效价的临界值,分析抗体效价水平变化和孕妇年龄与新生儿溶血病发生率的关系。方法根据围产期3 463例孕妇及其丈夫血型,分别用微柱凝胶法和试管法检测IgG抗A、抗B抗体效价。根据不同妊娠次数(1次、2次、≥3次),将1 620例O型孕妇分3组,从22周开始每隔4周检测血清中IgG抗A(B)的效价,分别用微柱凝胶法检测IgG抗A、抗B抗体效价,检测新生儿溶血病相关指标。结果微柱凝胶法抗体效价256作为参考值;3 463例围产期孕妇检测IgG抗A(B),IgG抗A检测共2 257人次,其几何平均效价为169,IgG抗B检测共1 711人次,其几何平均效价为143。连续监测1 620例不同孕次数O型血孕妇,首次妊娠896例中IgG抗A(B)抗体效价≥256的共260例(29.02%),2次妊娠248例IgG抗A(B)抗体效价≥256的共107例(43.15%),≥3次妊娠共476例IgG抗A(B)抗体效价≥256的共220例(46.70%);抗体效价滴度分别升高1、2、3个及以上孕妇的平均年龄分别为26.4、27.8、29.9岁,新生儿溶血病的发生率分别为21.66%、40.94%、84.90%。结论检测O型孕妇产前血清中IgG抗体时,微柱凝胶法的敏感性高于传统试管法,微柱凝胶法检测抗体效价的参考值高于试管法;多次妊娠者IgG抗A(B)抗体效价阳性率高于首次妊娠者;且当抗体效价升高2个及以上滴度时,年龄越高,HDN发病率越高。     

肾细胞癌患者组织中RASSF1A、hMLH1及ALU甲基化水平的分析

目的探讨错配修复基因(h MLH1)、RAS相关区域家族1A基因(RASSF1A)启动子区甲基化以及ALU基因甲基化水平与肾细胞癌(肾癌)的关系。方法巢式甲基化特异性PCR(n MSP)检测15例肾癌组织及其相应癌旁组织中h MLH1、RASSF1A基因启动子区的甲基化状态,联合亚硫酸氢钠限制酶分析方法(COBRA)分析ALU基因甲基化水平。结果 h MLH1基因在肾癌组织中的甲基化率(0.41±0.18)%高于癌旁组织(0.32±0.13)%,差异有统计学意义(t=2.52,P0.05);ALU基因在癌组织中的甲基化率(0.11±0.04)%低于癌旁组织(0.12±0.03)%,差异有统计学意义(t=3.82,P0.05)。而RASSF1A基因在肾癌组织和癌旁组织中的甲基化率分别为(0.75±0.11)%和(0.69±0.12)%,差异无统计学意义(t=1.35,P0.05)。结论 h MLH1基因启动子区甲基化以及ALU基因甲基化可能与肾癌的发病有关,RASSF1A基因启动子区甲基化与肾癌发病无关。     

肺泡表面活性蛋白D、血管性血友病因子及白介素8对脓毒症诱发急性呼吸窘迫综合征的预测和预后意义

目的从D二聚体(D-dimmer)、血管性血友病因子(von Willebrand factor,v WF)、血小板(Platelet,PLT)、氨基末端B型钠尿肽前体(N terminal-pro brain natriuretic peptide,NT-Pro BNP)、白介素6(interleukin-6,IL-6)、白介素8(interleukin-8,IL-8)、肺泡表面活性蛋白D(Surfactant Protein D,SP-D)中筛选对脓毒症并发急性呼吸窘迫综合征(ARDS)具有预测价值的生物标志物。方法对48例脓毒症合并ARDS的患者和同期40例脓毒症患者进行前瞻性对照研究;在进入ICU 24 h内抽取静脉血标本,定量检测7种生物标志物的浓度/活性水平;构建脓毒症并发ARDS的风险预测模型和死亡预测模型,用Logistic回归筛选具有预测价值的生物标志物和临床指标。结果 SP-D、v WF、IL-8预测脓毒症合并ARDS的ROC曲线下面积分别为0.758(P0.01)、0.783(P0.01)、0.747(P0.01);三者联合时为0.847(P0.001);IL-8、年龄≥60岁、APACHEⅡ积分≥20对脓毒症合并ARDS具有死亡预测价值,OR值分别为12.138(ln IL-8)(P=0.022)、6.157(P=0.040)、7.415(P=0.014)。结论SP-D、v WF、IL-8对脓毒症合并ARDS具有早期预测价值,三者联合可以提高预测准确度;IL-8对脓毒症合并ARDS具有死亡预测价值,建议在临床实践中结合APACHE II评分、年龄综合评估。     

广泛耐药肺炎克雷伯菌生物膜形成能力及毒力基因相关分析

目的了解广泛耐药(extensively drug-resistant,XDR)肺炎克雷伯菌生物膜形成能力及毒力基因分布特征。方法收集温州医科大学附属第一医院2013年5月至7月暴发流行的XDR肺炎克雷伯菌15株和同时期分离的敏感肺炎克雷伯菌30株。采用结晶紫染色法检测肺炎克雷伯菌体外生物膜形成能力,PCR方法筛查菌株毒力相关基因携带情况,并比较分析2组菌株生物膜形成能力和毒力基因的分布情况。结果 XDR肺炎克雷伯菌株与敏感菌株形成生物膜A590 nm值分别为0.505 3±0.291 2和0.429 8±0.235 6,二者差异无统计学意义(t=0.87,P=0.38)。15株XDR肺炎克雷伯菌中未检出荚膜多糖基因,而敏感菌株中荚膜多糖基因wzy-K2、wzy-K3和wzy-K57的检出率分别为10.0%、3.3%和6.7%。其他毒力相关基因ure A、wab G、mrk D、fim H和uge在XDR耐药菌株和敏感菌株的检出率均为100.0%,除上述5种毒力基因外,仅1株XDR肺炎克雷伯菌检出kfu BC毒力基因(6.7%)。而敏感菌株中kfu BC、rmp A、wca G、all S、iuc B、iro NB和mag A中检出率分别为20.0%、20.0%、10.0%、16.7%、40.0%、10.0%和10.0%,毒力基因iuc B检出率与XDR菌株相比,差异具有统计学意义(χ2=6.264,P=0.012)。结论 XDR肺炎克雷伯菌的生物膜形成能力与敏感菌株间无明显差异,其毒力谱较为单一,携带的毒力因子种类亦较敏感菌株少。     

实时荧光定量PCR非特异性分析

聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)因灵敏度高、操作简便在各个领域得到了广泛的应用。然而,伴随其高灵敏度存在的非特异性问题在一定程度上限制了其应用。不同于普通检测方法,该技术的非特异性问题主要由可以指数扩增的引物二聚体(primer dimer,PD)引起。对此,引物设计时使用的中部同序引物对可以从根本上避免PD的产生,从而解决由其引起的非特异性问题。该文从PCR的发展和本质、PCR非特异性产生的原因和应对策略等方面作一总结及分析。