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81.
目的:构建Cdh1小干扰RNA载体,并将其转染至Hela细胞进行鉴定.方法:根据pENTRTM/H1/TO中间载体要求,设计Cdh1小干扰RNA载体的干扰序列及无干扰作用的对照序列,合成相应的DNA单链,退火后连接到pENTRTM/H1/TO线性载体,形成完整载体,进行测序鉴定.分别将测序鉴定成功的Cdh1小干扰RNA载体及对照载体采用脂质体法转染Hela细胞,转染后48 h提取细胞总RNA及细胞总蛋白,采用实时定量PCR和Western Blot检测Cdh1的表达.结果:经测序鉴定成功构建Cdh1小干扰RNA载体和对照载体,分别命名为pENTR/shCdh1和pENTR/shcontrol.与未转染及转染pENTR/shcontrol的Hela细胞相比,转染pENTR/shCdh1的Hela细胞Cdh1表达降低(P《0.05).结论:成功构建Cdh1小干扰RNA载体,并能下调Hela细胞Cdh1的表达. 相似文献
82.
男性不育症患者中YRRM2基因缺陷的研究 总被引:2,自引:1,他引:1
YRRM基因是控制精子生成与成熟的一个重要因素,一旦该基因缺陷,将会造成无精或少精。本研究对340例无精与少精患者的外周血标本进行了PCR基因扩增筛查,结果发现7例为该基因缺陷,占2%。证明YRRM2的缺陷也是造成中国人群男性不育的一个原因,从而可作为指导医生采用适当治疗方法的一个可靠指标。在实验过程中,采用直接加热白细胞提取基因组DNA,并以此作为模板对YRRM2基因进行扩增,既节省时间和经费,又保持良好的扩增效果,使之可用于临床医院作为常规检查。 相似文献
83.
目的:建立一种应用T7 RNA聚合酶体外转录合成大量siRNA的方法。方法:以萤火虫荧光素酶为靶标,应用T7 RNA聚合酶体外转录合成siRNA,脂质体转染法将其导入HepG2细胞中,通过测定荧光素酶的量,评价siRNA对萤火虫荧光素酶基因表达的抑制作用。结果:合成了以萤火虫荧光素酶为靶标的siRNA,合成的siRNA能特异性地抑制荧光素酶基因的表达,抑制率为80%。结论:建立了一种经济简便的体外合成siRNA的方法。 相似文献
84.
次氯酸对人血清白蛋白的氧化修饰影响及与高级氧化蛋白产物的关系 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 研究次氯酸对人血清白蛋白(HSA)的氧化修饰影响及与高级氧化蛋白产物(AOPPs)之间的关系。 方法 有氧条件下在恒定浓度的HSA(60 mg/ml)内加入不同浓度次氯酸(0、1、5、10、20、30、40、50、60 mmol/L,最终浓度),观察氧化剂对HSA的修饰作用。凝胶排阻色谱法检验HSA氧化修饰结果,在线光谱扫描(190 nm~400 nm)分析修饰产物的光谱特性。结果 次氯酸可氧化修饰人血清白蛋白,其修饰产物主要为二聚体HSA和六聚体HSA。发现次氯酸对HSA单体和HSA二聚体的氧化修饰为一级反应;对诱导生成的AOPPs为准一级反应;而对诱导生成的HSA六聚体则为二级修饰反应。同时发现白蛋白对AOPPs的主要贡献者是六聚体形式的HSA,光谱分析表明HSA聚集体的最大吸收峰发生红移,提示HSA聚集体是由于蛋白中的酪氨酸残基通过氧化交联方式而聚集形成的。 结论 HSA经次氯酸处理后主要发生了蛋白聚集。而对AOPPs的主要贡献者是六聚体形式的HSA。 相似文献
85.
人正、反义转化生长因子beta1基因真核表达载体的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 :构建人转化生长因子beta 1(TGFβ1)正、反义基因真核表达载体。方法 :从人胎脑的cDNA文库中扩增出TGFβ1共 12 84bp长的DNA片段后 ,与T载体直接进行高效连接 ,并测序证实无突变。接着利用TGFβ1引物两端所设计的酶切位点将目的片段定向亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1( )。构建的正反义表达重组体 (pcDNA3.1 TGFβ1和pcDNA3.1 antiTGFβ1)经限制性内切酶消化证实其中有目的片段完整插入。结果 :本实验成功构建了人正、反义TGFβ1基因真核表达载体。结论 :人正、反义TGFβ1基因真核表达载体的构建 ,为今后研究腹膜纤维化的防治奠定了实验基础。 相似文献
86.
I. Ibarrola M. L. Sanz† P. M. Gamboa‡ A. Mir§ D. Benahmed§ A. Ferrer¶ M. C. Arilla A. Martínez J. A. Asturias 《Clinical and experimental allergy》2004,34(2):303-309
BACKGROUND: Allergoids are widely used in specific immunotherapy (SIT) for the treatment of IgE-mediated allergic diseases, but all techniques for standardization of conventional allergic extracts may not be appropriate for standardization of a glutaraldehyde (GA)-modified extract because of the unique characteristics of these extracts. OBJECTIVE: To assess an accurate methodology for standardization of chemically modified extracts. METHODS: GA-modified extracts from Parietaria judaica pollen were purified by diafiltration. Biochemical properties were investigated by determination of amino groups, chromatography, and SDS-PAGE. The IgE-binding activity was determined by skin prick test, enzyme allergosorbent test inhibition, basophil activation, and histamine release tests. Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from P. judaica pollen-allergic subjects were stimulated with either native or allergoid extracts, and proliferation was measured. RESULTS: Biochemical data indicated a high degree of allergen polymerization resulting in extract components higher than 100 kDa. IgE-binding activity, both in vivo and in vitro, was reduced by more than 99.8%. Both allergen and allergoid induced PBMC proliferation and synthesis of blocking IgG antibodies at similar rates. Moreover, no evidence of introduction of new determinants by chemical modification was found. CONCLUSIONS: The preparation of GA-modified extracts by diafiltration is faster and more reliable than previous chromatographic methods. These modified extracts have drastically reduced their allergenicity while maintaining their immunogenicity, and therefore they can be used in safer and shortened schedules of SIT. 相似文献
87.
Down-regulation amyloid β-protein 42 production by interfering with transcript of presenilin 1 gene with siRNA 总被引:2,自引:0,他引:2
Huan-min LUO Hui DENG Fei XIAO Qin GAO Wen WENG Pei-fen ZHANG Xiao-guang LI Neuropharmacological Research Laboratory College ofPharmacy Ji-nan University Guangzhou China 《Acta pharmacologica Sinica》2004,(12)
AIM:ToinvestigatethepathogenesisofAβ42yieldingandnewdrugtargetsaswellasthepossibilityofRNAinterference(RNAi)techniquefortreatmentofAlzheimerdisease(AD).METHODS:HumanADpresenilin1(PS1)cDNAsequencewasobtainedfromNCBIwebsite.ThethreesitesofRNAiactionandonemissensecontrolsitewereselectedinPS1cDNAthroughonlinedesignofAmbioncompany.Toconfirmspecificityofthesesites,weconductedaBLASTsearchoftheIMAGEESTlibrary.Thecorrespondingdouble-strandedDNAwasusedtoconstructpSilencer3.1-H1p… 相似文献
88.
目的构建并筛选大鼠胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达抑制短发夹样RNA(shRNA)真核表达载体。方法针对GFAP基因全编码序列设计并合成三对9bp茎环结构、19bp干扰序列特异性shRNA模板,体外定向克隆构建特异性重组质粒真核表达载体;通过体外大鼠脊髓源星形胶质细胞GFAP表达抑制模型,脂质体介导RNA干扰分子转染,实时荧光定量RT—PCR及Wesem blot技术观察RNA干扰后原代星形胶质细胞GFAP表达抑制效果.筛选最佳GFAP表达干扰抑制真核表达载体。结果序列测定证实GFAP—shRNA重组质粒真核表达载体构建成功,三对shRNA模板在mRNA及蛋白表达水平抑制靶基因表达效率分别为81%、63%、56%。结论高效率的GFAP—shRNA真核表达载体在大鼠原代星形胶质细胞GFAP表达抑制模型中能高效抑制GFAP基因表达,为后续多靶点RNA干扰技术在脊髓损伤胶质瘢痕抑制基因治疗中的应用奠定了前期基础。 相似文献
89.
A brief mechanical or electrical stimulus to peripheral nerve afferents from the upper and lower limbs elicited a small and inconsistent EMG response of the orbicularis oculi muscles. This response was facilitated when the stimuli were delivered at fixed leading time intervals, of 45–300 ms, with respect to a supraorbital nerve electrical stimulus. Also, the peripheral nerve stimulus modified the conventional blink reflex responses, inducing facilitation of R1 and inhibition of R2. These results suggest a complex processing of sensory inputs from the face and the limbs at the brainstem, where they are probably integrated in a network of interneurons influencing the excitability of facial motoneurons. 相似文献
90.