高效液相色谱法测定灯盏花素片中野黄芩苷的含量

目的 建立高效液相色谱法(HPLC)测定灯盏花素片中野黄芩苷的含量.方法 采用色谱柱为kromasilC 18 (4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液(20∶80),检测波长335 nm,流速1.0 mL/min,测定野黄芩苷的对照品及供试品.结果 野黄芩苷在7.04～35.2 μg/mL的浓度范围内,浓度对峰面积具有良好的线性关系.野黄芩苷平均回收率为99.64％(n=6),RSD为1.01％.结论 建立的HPLC法简便、快速、准确,重现性、稳定性好,回收率高,可为灯盏花素片的质量控制提供依据.     

Scutellarin and caffeic acid ester fraction,active components of Dengzhanxixin injection,upregulate neurotrophins synthesis and release in hypoxia/reoxygenation rat astrocytes

Ethnopharmacological relevance

Scutellarin (Scu) and caffeic acid ester fraction (Caf), the extracts from the traditional Chinese herb, Erigeron breviscapus, are known to ameliorate post ischemic neuronal dysfunction.

Aim of the study

Neurotrophic factors (NTFs) are essential for neuronal growth and survival. We explored the neuroprotective effect of Scu and Caf by synthesis and release of NGF, BDNF and GDNF in rat astrocytes exposed to hypoxia/reoxygenation and MACO rats. And the neuroprotection of Scu and Caf was also explored.

Materials and methods

The primary rat astrocytes were cultured in vitro. The temporal mRNA and protein expression profile during hypoxia/reoxygenation were analyzed using real-time RT-PCR and ELISA. The expression of p-CREB, p-Akt, p-MAPKs and Bax were analyzed by western blotting. Cell viability of neuro-2A was measured using CCK-8 and cell cytotoxicity was measured with LDH release.

Results

During hypoxia/reoxygenation a similar decrease pattern of NTFs (NGF, BDNF and GDNF) was observed in both mRNA and protein; Scu and Caf enhanced the expressions of NGF, BDNF and GDNF mRNA and protein in astrocytes under hypoxia/reoxygenation condition. CREB and Akt, but not MAPKs ( p-JNK, p-ERK1/2 and p-38) may be involved in the expression of NTFs. Concomitantly, conditioned medium from astrocytes which was treated by Scu or Caf after hypo3 h/Reox24 h significantly reduced neurotoxicity compared with conditioned medium from hypo3 h/Reox24 h astrocytes alone, and they show the tendency of increased neurons viability accompanied with Bax changes.

Conclusions

These results indicate that the neuroprotective effect of Scu and Caf might be mediated, at least in part, via a stimulation of the production and release of NTFs through p-CREB and p-Akt signaling. Furthermore, Scu and Caf could antagonistic the hypoxia induced toxicity through astrocytes conditioned medium. Those results suggested that Scu and Caf might have therapeutic potential for stroke.     

仙慈丹的质量标准研究

目的：建立仙慈丹（XCD）的质量标准。方法：采用薄层色谱法进行定性鉴别,RP-HPLC法进行定量测定。结果：建立了半枝莲、三七、姜黄、苏木的薄层色谱鉴别方法,建立了野黄芩苷的测定方法,野黄芩苷的加样回收率为100.55%（RSD为1.54%,n=6）,线性范围为0.032~0.481μg（r=0.999 9）。结论：所建立的定性、定量方法简便、准确、重复性好,专属性强,可较全面地控制仙慈丹的质量。     

半枝莲总黄酮微丸的制备及含量测定

目的:制备半枝莲总黄酮微丸并建立其含量测定方法.方法:采用挤出滚圆法制备半枝莲总黄酮微丸,采用正交实验法优化最佳制备工艺,采用吸光光度法测定半枝莲总黄酮(以野黄芩苷和木犀草素计)含量.结果:按照最佳工艺制得的半枝莲总黄酮微丸外形美观,圆整度良好,大小均匀,平均得率为97.06％;半枝莲总黄酮含量以野黄芩苷计5.02 mg/g,RSD为1.60％;以木犀草素计2.03 mg/g,RSD为0.84％.结论:最佳制备工艺稳定可行,所建立的含量测定方法准确可靠,可用于半枝莲总黄酮微丸制备及质量控制.     

灯盏乙素对对乙酰氨基酚和脂多糖致小鼠肝功能损伤和致死率的影响

目的观察灯盏乙素对对乙酰氨基酚和脂多糖致小鼠肝功能损伤和致死率的影响。方法分别给不同模型的小鼠灌胃给予灯盏乙素25~500 mg.kg-1,1次/d。7~14 d后,一次性腹腔注射不同剂量的对乙酰氨基酚和脂多糖,观察小鼠肝功能变化和致死情况。结果小剂量的灯盏乙素不影响对乙酰氨基酚所致小鼠肝功能损伤,但加大剂量后小鼠致死率明显升高;小剂量的灯盏乙素就能显著加重脂多糖所致小鼠肝功能损伤、明显增加脂多糖致小鼠死亡率。结论使用灯盏乙素治疗心或脑血管疾病,当病人遇到感染性疾病时,要注意灯盏乙素的使用剂量,灯盏乙素的不当使用可能会加重脂多糖(内毒素)诱导的肝损伤;使用对乙酰氨基酚治疗各种疾病所致发热时,合用灯盏乙素也要注意灯盏乙素的使用剂量。     

库仑阵列电化学HPLC法测定人血浆中灯盏乙素的浓度

目的:建立以库仑阵列电化学HPLC法测定人血浆中灯盏乙素浓度的方法。方法:血浆样品采用甲醇沉淀蛋白后进样,其中流动相为0·083mol·L-1磷酸二氢钠-甲醇-乙腈-四氢呋喃(60:30:10:0·4),每1000mL滴加磷酸100μL,柱温为室温,检测电压为100mV,保护电压为500mV,流速为1mL·min-1,进样量为20μL。结果:灯盏乙素检测浓度在20·0～400·0μg·L-1范围内与峰面积积分值线性关系良好(r=0·9999);方法回收率为96·79%～108·50%;日内、日间RSD均<5%。结论:本方法准确、灵敏、简便,可用于灯盏乙素体内浓度的测定及药动学研究。     

灯盏乙素对小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的观察灯盏乙素对卡介苗(BCG)和脂多糖(LPS)诱导的小鼠免疫性肝损伤的影响。方法给雄性小鼠尾静脉注射卡介苗(BCG,每鼠0.025 mg),12 d后尾静脉注射脂多糖4μg,建立小鼠免疫性肝损伤模型,在注射LPS前,小鼠灌胃给予不同剂量的灯盏乙素(50 mg.k·g 1,100 mg.k·g 1),1次/d,连续12 d。测定血清丙氨酸氨基转氨酶(ALT)活性,计算肝脏、脾脏、胸腺指数,并进行肝脏病理组织检查。结果灯盏乙素可显著抑制免疫性肝损伤小鼠血清ALT活性,灯盏乙素能显著降低肝损伤小鼠的肝脏指数和脾指数,减轻肝组织病理损伤程度。结论灯盏乙素对BCG LPS诱导的小鼠免疫性肝损伤有明显的保护作用。     

灯盏花素对角叉菜胶诱导的血栓模型大鼠血液流变学参数的影响

目的:观察灯盏花素不同作用时间对角叉菜胶诱导的血栓模型大鼠血液流变学参数的影响。方法:Wistar大鼠sc角叉菜胶5mg.kg-1复制血栓模型;尾静脉注射36 mg.kg-1灯盏花素后不同时间腹主动脉取血进行血液流变学参数的测定。结果:灯盏花素在药后30min能显著抑制血小板聚集、降低全血黏度,血浆黏度随药物作用时间的延长有降低的趋势;而对红细胞压积和纤维蛋白含量没有显著影响。结论:灯盏花素对血栓模型大鼠血液流变学参数的影响可能是原形药物与代谢产物共同作用的结果。     

青光眼家兔玻璃体内游离谷氨酸盐浓度的测定

[目的]建立高效液相荧光检测法,测定青光眼家兔玻璃体游离谷氨酸盐浓度。[方法]于青光眼家兔玻璃体分别灌注葛根素和灯盏乙素阳离子脂质纳米粒和药物溶液,在色谱条件为Diamonsil C18色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相为50 mmol磷酸盐缓冲液∶甲醇(25∶75),流速为1.0 mL/min,柱温30℃,荧光检测器的激发波长(λex)350 nm,发射波长(λem)450 nm下测定透析液中游离谷氨酸盐浓度。[结果]玻璃体内植入探针的在体回收率为33.60%(r=0.970 6)。在玻璃体内灌注葛根素和灯盏乙素阳离子脂质纳米粒组与药物溶液组后,测定不同时间点的游离谷氨酸盐浓度,结果表明与溶液组相比,制剂组谷氨酸盐浓度降低1.59倍,有统计学差异(P0.05)。[结论]该方法简便、准确、可靠,为玻璃体游离谷氨酸盐的测定提供参考。     

不同分子量灯盏乙素-PEG酯的合成、性质及小肠吸收研究

为探讨小分子药物PEG化（PEGylation）对口服吸收的影响规律，合成了多种分子量的灯盏乙素PEG衍生物。对产物在不同条件下的理化常数、稳定性及大鼠在体小肠吸收情况进行了考察。灯盏乙素经PEG化后水溶性提高，并获得了适于口服吸收的理想的分配系数。体外试验中，该类衍生物表现出前药的特性，在pH7．4的PBS缓冲液中t1/2超过12h（37℃），而在血浆中则快速降解释放出灯盏乙素，t1／2约为1．5～3h；灯盏乙素经PEG化后，口服吸收明显增加，但PEG化物的吸收随PEG片断分子量的增大而减少。综合考虑反应收率、产物稳定性和口服吸收等情况，用于灯盏乙素修饰的PEG分子量应在400～1000 Da之间。