咯利普兰在骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化中的作用

目的 研究咯利普兰在体外骨髓间充质干细胞向成骨细胞诱导分化过程中的作用.方法 体外分离培养小鼠股骨骨髓间充质干细胞,随机分为咯利普兰10 μmol/L组(A组)和对照组(B组).骨髓间充质干细胞向成骨诱导分化后,检测碱性磷酸酶(ALP)活性;Western blot检测Runx2和骨钙素表达;茜素红染色观察钙结节形成情况.结果 与B组相比,A组ALP活性及Runx2、骨钙素表达均增加(P＜0.01或P＜0.05),钙结节形成更加明显.结论 咯利普兰能提高体外骨髓间充质干细胞向成骨细胞诱导分化的能力.     

钙、维生素D缺乏大鼠长骨成骨细胞的维生素D受体水平

对正常、钙缺乏和维生素D缺乏的大鼠 ,观察其体外培养的长骨成骨细胞的维生素D受体最大结合容量 ,结果显示维生素D缺乏组显著低于正常组 (P <0 .0 1)。     

氟对成骨细胞中微小染色体维系蛋白3表达的影响

目的探讨氟对体外培养成骨细胞中微小染色体维系蛋白3（minichromosome maintenance deficient3，MCM3）表达的影响。方法采用免疫组织化学技术、原位杂交技术以及SYBR GreenI嵌合荧光实时定量PCR（realtime RT-PCR）方法，检测不同剂量氟（0、5、10、20、40mg／L，处理10d）对体外培养成骨细胞中MCM3表达的影响。结果0、5、10、20、40mg／L各组细胞中均有MCM3蛋白及其mRNA表达，主要在细胞核中表达，与对照组比较，染氟实验组阳性表达强度高于对照组，阳性细胞数多于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05），其中10mg／L组阳性表达高于其他实验组（P〈0．05），呈现双向作用。real time RT-PCR检测显示，各组均可检测到MCM3mRNA．相对定量比由对照组到高剂量组约为102：259：145：135：100：染氟实验组中5、10、20mg／L组表达量高于对照组和40mg／L组，以5mg／L组表达量最高，随着染氟剂量增加，基因表达量降低。结论不同剂量氟对成骨细胞中MCM3表达的影响不同，低剂量氟可以促进MCM3的表达，随剂量增加氟的促进作用减弱。     

Role of extracellular matrix in insulin-like growth factor (IGF) binding protein-2 regulation of IGF-II action in normal human osteoblasts

Insulin-like growth factor binding protein-2 (IGFBP-2) in its native form had little affinity for extracellular matrix (ECM) derived from human or rat osteoblastic cells. However, in the presence of IGFs, IGFBP-2 binding to ECM was markedly enhanced, with IGF-II being more effective than IGF-I. IGF-II-enhanced binding of IGFBP-2 to ECM was specific for IGFBP-2 of the six known IGFBPs. In the presence of IGF-II, IGFBP-2 bound with high affinity to heparin-Sepharose, but not to type I collagen, fibronectin, or laminin. Furthermore, heparin and heparan sulfate, but not chondroitin sulfate, inhibited IGFBP-2/IGF-II binding to ECM. High salt (100 mM NaCl) inhibited, while CaCl(2) enhanced binding of IGFBP-2/IGF-II to ECM. In the presence of ECM, IGFBP-2/IGF-II was as effective as IGF-II alone in stimulating [3H]thymidine and [3H]proline incorporation and in inhibiting apoptosis in cultured human osteoblasts. On the other hand, IGFBP-2 was a potent inhibitor of IGF-II action in human breast and ovarian carcinoma cells. There was no difference between soluble and ECM-associated IGFBP-2 in affinity for IGF-I and IGF-II. These data suggest a unique mechanism for targeting an anabolic IGFBP-2/IGF-II complex in bone.     

黄芩素对染氟成骨细胞氧化应激水平的影响

目的探讨黄芩素在染氟成骨细胞细胞内氧化还原水平的变化中发挥的抗氧化作用。方法观察染氟成骨细胞内脂质过氧化产物(MDA)及抗氧化酶(SOD、GPX)活性在黄芩素作用前后的变化。结果低浓度氟和高浓度氟均在成骨细胞引起不同程度的氧化应激态变化,联和应用黄芩素降低了染氟成骨细胞内的氧化应激水平。结论黄芩素很可能清除了成骨细胞内由氟诱导产生的过多氧自由基,进而减弱了不同浓度氟对成骨细胞的毒性作用。     

诱导型成骨细胞特异Stat3基因敲除小鼠的构建及验证

目的：运用Cre-Loxp基因敲除系统,构建诱导型条件性Stat3基因敲除小鼠并验证其敲除效率。方法：通过Stat3^fl/fl与Col1 creERT2基因型的C57小鼠多代杂交,构建诱导型成骨细胞特异Stat3敲除小鼠Stat3^Col1ERT2。取其骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells, BMSCs）,加入4-羟基他莫西芬（4-OTH）后,采用实时定量PCR技术和免疫印迹技术在mRNA与蛋白水平分别体外验证Stat3敲除效果。于小鼠腹腔注射他莫昔芬,采用免疫荧光染色技术,观察小鼠上颌牙槽骨区域STAT3的表达,以体内验证敲除效果。采用SPSS 24.0软件包对数据进行统计学分析。结果：实时定量PCR和免疫印迹结果显示,Stat3^Col1ERT2小鼠BMSCs体外加药诱导敲除后,STAT3的mRNA水平显著下调（P<0.05）、蛋白表达降低（P<0.05）。免疫荧光染色结果显示,Stat3^Col1ERT2小鼠体内上颌牙槽骨区域成骨细胞的STAT3表达显著降低（P<0.05）。结论：本研究成功构建了诱导型成骨细胞特异Stat3基因敲除小鼠,使基因敲除可受观察者时空调控,为今后正畸牙移动、颌骨牵引成骨、颌骨骨折等牙槽骨改建机制的研究提供了新的思路及依据。     

孕激素对人成骨样细胞膜型基质金属蛋白酶-1表达和明胶酶-A激活的影响

目的研究孕激素对人成骨样细胞MG-63膜型基质金属蛋白酶(MT1-MMP)表达和明胶酶-A激活的影响,探讨孕激素治疗绝经后骨质疏松症(OP)的作用机制.方法MG-63细胞用孕酮干预;半定量逆转录聚合酶链反应、Western杂交和激光共聚焦显微系统免疫荧光法分别检测MT1-MMPmRNA和蛋白质表达;明胶酶-A激活用明胶酶谱和酶联免疫吸附(ELISA)检测.结果观察到孕酮增强MG-63细胞MT1-MMPmRNA表达呈剂量依赖性,其中10-9mol/L孕酮组为对照组的(127±11)%(P＜0.01),10-8mol/L孕酮组为对照组的(171±19)%(P＜0.001).孕酮增强MG-63细胞MT1-MMP蛋白质表达呈剂量依赖关系,其中10-9mol/L孕酮组为对照组的(188±85)%(P＜0.001),10-8mol/L孕酮组为对照组的(233±25)%(P＜0.0001).激光共聚焦显微系统免疫荧光法证实孕酮促进MT1-MMP蛋白质表达增强,MT1-MMP蛋白质表达于细胞膜和细胞质中.孕酮对明胶酶-A激活无影响(P＞0.05),即孕酮诱导的MG-63细胞MT1-MMP表达增强不能增强明胶酶-A的激活.结论MT1-MMP在骨重建过程中起着维持骨形成的关键作用,孕激素可通过诱导人成骨样细胞MT1-MMP表达增强促进骨形成.     

含纳米SiO 2或纳米TiO 2微弧氧化纯镁生物涂层可促进成骨细胞增殖及活性

背景：微弧氧化技术可增强镁及其合金的耐腐蚀性,提高其表面生物性能。
　　目的：为了调控医用纯镁的生物活性,在镀液中添加纳米 SiO2或纳米 TiO2对纯镁微弧氧化涂层改良,研究其对成骨细胞增殖及分化的影响。
　　方法：将圆形镁片分为3组,其中两组分别置入含7.5 g/L纳米SiO2或4.8 g/L纳米TiO2的硅酸盐电解液中进行表面微弧氧化处理,以未作任何处理的纯镁作为对照。将第3代成骨细胞分别接种于3组试件表面,观察成骨细胞的早期形态、增殖与碱性磷酸酶活性。
　　结果与结论：成骨细胞在纳米SiO2组、纳米TiO2组试件表面生长状态良好,轮廓清晰,呈长梭形,多角形;在对照组表面生长状态较差。CCK-8检测显示,3组细胞吸光度值与碱性磷酸酶活性随时间推移呈上升趋势,纳米SiO2组、纳米TiO2组试件接种1,3,5 d的细胞增殖活性高于对照组;纳米SiO2组、纳米TiO2组接种3,5 d的细胞碱性磷酸酶活性高于对照组。结果表明纳米SiO2或纳米TiO2微弧氧化生物涂层可促进成骨细胞增殖及成骨活性,具有良好的生物相容性。