氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞ICAM-1及NO表达的影响

目的研究氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density liprotein,ox-LDL)对脐静脉内皮细胞细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)及一氧化氮(nitric oxide,NO)表达的影响.方法采用细胞ELISA法测定细胞表面ICAM-l的含量,硝酸还原酶法测定细胞培养上清液中NO,免疫组化法结合图象分析测定细胞一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)含量.结果 ox-LDL可明显增加脐静脉内皮细胞ICAM-l的表达,并减少NO及NOS的表达,且有浓度依赖性,但无明显的时间依赖性.结论 ox-LDL可损害内皮细胞的功能,减少内皮细胞NO、NOS的表达并增加内皮细胞ICAM-1的表达.这可能为ox-LDL促进动脉粥样硬化的机制之一.     

细胞性一氧化氮供体的建立及其对肿瘤细胞凋亡的诱导效应

目的一氧化氮（ＮＯ）供体细胞系的建立及其对肿瘤细胞凋亡的诱导效应研究。方法采用３Ｈ－胍氨酸转换法进行ＮＯ合成酶（ＮＯＳ）活性测定；亚硝酸盐检测；ＤＮＡ片段的提取及凝胶电泳分析；凋亡细胞的ＤＡＰＩ染色观察；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析。结果将ｉＮＯＳ真核表达质粒、ｐＣＭＶ／ｉＮＯＳ转染至Ｓｐ２／０骨髓瘤的变异株中，并获得能稳定表达ｉＮＯＳ和合成ＮＯ的重组细胞系（ＳＰｍｔ／ｉＮＯＳ），表达ｉＮＯＳ的效率为每升培养物含４００μｇ蛋白。利用该细胞作ＮＯ细胞性供体，成功地证实ＮＯ能诱导Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞发生凋亡。结论所建细胞性ＮＯ供体应用于ＮＯ的生物学功能研究具有ＮＯ合成稳定；更能模拟体内细胞间ＮＯ的信息传递过程；不需任何外源刺激即可合成ＮＯ等独特优点。所建ＮＯ供体细胞可以用于肿瘤细胞凋亡的研究。     

颈交感神经干离断对妊高征大鼠胎盘NO含量及NOS基因表达的影响

目的：观察颈交感神经干离断（TCST）对妊高征（PIH）大鼠胎盘一氧化氮（NO）含量及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达的影响。方法:妊娠大鼠随机分5组,每组15只。对照组（C）：自妊娠14 d开始皮下注射生理盐水至孕20 d;妊高征1组、2组（H1、H2）：自妊娠14 d开始皮下注射L-NAME分别为125 mg·kg-1·d-1和62.5 mg·kg-1·d-1，至孕20 d；手术组（O）：妊娠第14 d行右TCST，余同B1;假手术组（S）：妊娠第14 d行右颈交感神经干分离，但不离断，余同 H1。孕21 d剖宫取仔。观察孕鼠血压、尿蛋白，胎鼠的大小、体重、畸形率、死亡率，胎盘NO含量、eNOS mRNA、iNOS mRNA表达。结果:（1） 血压、尿蛋白除基础值外H1、H2组各时点值明显高于C组(P<0.01)；H2组明显低于H1组(P<0.01)；O组与C组相比差异无显著(P>0.05)。（2）胎鼠体重、大小 H1、H2组明显低于C组（P<0.01）；H1组明显低于H2组（P<0.05，P<0.01）;O组与C组相比差异无显著(P>0.05)。死亡率、畸形率变化与上述指标相反。（3）胎盘NO含量及eNOS mRNA、iNOS mRNA表达 H1、H2组明显低于C组（P<0.01）；H1组明显低于H2组（P<0.01，P<0.05）;O组明显高于H1组 （P<0.01），且与C组比无显著差异（P>0.05）。结论：TCST可保护孕鼠免受妊高征的影响，可能与其具有改善孕鼠胎盘组织eNOS mRNA、iNOS mRNA表达和NO含量有关。     

败血症休克大鼠血管L-精氨酸/一氧化氮途径的变化

目的:观察败血症休克大鼠主动脉内膜、中膜和外膜一氧化氮合成途径的改变。方法:雄性Wistar大鼠盲肠结扎并穿孔复制败血症休克模型,分别测定假手术组、早期休克组和晚期休克组大鼠主动脉内膜、中膜和外膜的亚硝酸盐(NO^-₂)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性及L-精氨酸(L-Arg)转运;免疫组化染色检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在主动脉各层的分布。结果:早期及晚期败血症休克大鼠主动脉内膜产生的NO^-₂含量、NOS活性及L-Arg转运速率均低于假手术组,而中膜和外膜的NO^-₂、NOS活性及L-Arg转运速率则显著高于假手术组,外膜增加的程度尤为显著。免疫组织化学染色显示,败血症休克时血管中膜和外膜尤其是外膜iNOS阳性染色明显较强。结论:败血症休克时血管内膜NO合成受到抑制,而中膜和外膜NO合成显著增强,这一改变与休克状态下血管中L-Arg转运、iNOS表达及其活性的变化有关。     

一氧化氮诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡机制研究

目的:研究一氧化氮(NO)诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)凋亡的作用机制。方法:体外培养Wistar大鼠PASMC,加入NO供体硝普钠(SNP)于常氧和低氧条件下孵育12h或24h,通过流式细胞术碘化丙啶染色法观察PASMC细胞周期时段及凋亡亚二倍体峰变化,应用细胞免疫化学法检测PASMCcaspase-3和NF-κB的表达,同时行DNA断裂琼脂糖凝胶电泳。结果:SNP作用后PASMC出现剂量-依赖性促凋亡作用(P＜0.01),表现为凋亡指数与caspase-3表达的不同程度的增强。随凋亡的进展,出现PASMC凋亡核小体DNAladder,同时PASMCNF-κB阳性核表达较对照组少(P＜0.01)。结论:外源性NO诱导大鼠PASMC凋亡,caspase-3与NF-κB可能涉及PASMC凋亡的调控信号途径。     

N G-nitro-l-arginine antagonizes endothelium-dependent dilator responses by inhibiting endothelium-derived relaxing factor release in the isolated rabbit heart

The effects of a recently described inhibitor of endothelial NO synthesis, N ^G-nitro-l-arginine (l-NNA), on the vasomotor responses to endothelium-dependent and independent vasodilators, and on the release of endothelium-derived relaxing factor (EDRF), were studied in the isolated saline-perfused rabbit heart. Infusion of l-NNA (30 M) resulted in a 52±12% increase in basal coronary perfusion pressure. The vasomotor responses to 1 M acetylcholine (ACh) and serotonin after l-NNA became biphasic, showing a small transient dilation followed by a pronounced vasoconstriction. In contrast, the dilation observed with sodium nitroprusside was not affected by l-NNA. None of the above-mentioned effects was elicited by the Stereo-isomer d-NNA. Similarly, an increase in the basal coronary perfusion pressure by endothelin-1 (0.3 nM) to the same level as observed with l-NNA did not alter the vasomotor responses to ACh and sodium nitroprusside. The increase in cyclic GMP (cGMP) in platelets passing through the coronary vascular bed was used as an index of EDRF release. Platelet cGMP amounted to 0.50±0.10 pmol/mg protein after passage through the coronary bed of the unstimulated heart. When platelets were injected during an ACh infusion (1 M), a 2.7 fold increase in cGMP was observed (P<0.01). After a 30-min infusion with l-NNA, the cGMP content of platelets passing through the unstimulated heart was reduced by 62%. Likewise, the ACh-induced increase in platelet cGMP was totally blocked. These results show that l-NNA inhibits EDRF release, and is thus a potent and selective inhibitor of EDRF-mediated dilation in the isolated rabbit heart.     

实验性肺水肿大鼠血浆中内皮素、一氧化氮含量的变化以及硝普钠、川芎嗪对其的影响

在肾上腺素所致大鼠肺水肿实验中，发现其血浆中内皮素（ET－1）明显升高，一氧化氮（NO）稍有增高，但ET－1的增幅远远大于NO的增幅，动物均在15min内死亡。ET的增高与儿茶酚胺的升高有密切关系。经硝普纳（NP）、川芎嗪（TMP）预防后，ET－1与NO基本恢复正常，趋于平衡，动物长期存活。提示：肺水肿时NO相对于ET－1明显降低，NP、TMP可对NO与ET的平衡起调节作用。     

增强型体外反搏对冠心病患者血浆内皮素和一氧化氮的影响

目的:探讨增强型体外反搏对冠心病患者血浆内皮素(ET)和一氧化氮(NO)的影响。方法:把62例确诊冠心病的患者随机分为体外反搏治疗组(29例)和药物治疗组(32例), 反搏组在常规药物治疗的基础上接受增强型体外反搏仪治疗36d(1h/d), 药物组接受常规药物治疗相同天数;分别于治疗前后应用放射免疫法测定患者的血浆ET含量, 应用硝酸盐还原酶法测定患者血浆NO^-₂/NO^-₃含量, 以间接反映NO的浓度;并测定30例健康人的ET和NO^-₂/NO^-₃值作为对照。结果:治疗前反搏组和药物组的ET水平(116.4±44.9)ng/L, (111.9±44.4)ng/L明显高于正常人(65.8±15.6)ng/L(P＜0.01)。治疗后反搏组ET水平(78.9±30.2)ng/L明显低于药物组(148.0±39.5)ng/L(P＜0.01)。NO^-₂/NO^-₃水平, 治疗前反搏组(64.4±14.8)μmol/L和药物组(67.0±24.0)μmol/L, 稍低于正常人(70.1±13.9)μmol/L, 但P＞0.05;治疗后反搏组(89.6±30.3)μmol/L高于正常人(P＜0.01), 药物组NO^-₂/NO^-₃(83.4±23.0)μmol/L与正常人比较无明显差异(P＞0.05)。体现血管收缩和舒张平衡关系的ET/(NO^-₂/NO^-₃)比值, 治疗前反搏组(1.9±0.8)和对照组(1.8±0.9)均高于正常人(1.0±0.3)(P＜0.01), 治疗后反搏组该值(0.9±0.4)下降(P＜0.01), 并接近正常人水平(P＞0.05), 而药物组(1.8±0.7)与治疗前比较无明显差异(P＞0.05)。结论:增强型体外反搏可改善冠心病患者的内皮功能。     

人类精液中一氧化氮和尿酸含量检测的关系

目的探讨人精液中一氧化氮(N0)与尿酸含量的关系,对精了质量的影响。方法参照WHO标准方法,进行精液常规分析,按精子密度、活动率不同分为(正常、<20、20~40、>40)4个组。采用镀铜镉还原荧光法检测NO代谢产物硝酸盐(NO3-)。采用尿酸酶一过氧化物酶偶联法检测精液尿酸含量。结果70例不育组精液中尿酸含量和NO含量为(236.4±47.8)μmol/L、(78.7±1.6)μmol/L与正常生育组(398.6±52.3)μmol/L、(41.84±1.6)μmol/L呈显著性差异(P<0.01)。将尿酸含量与NO含量进行相关性分析,两者呈显著性负相关(r=-0.96,P<0.05)。不育各精子密度和活动率组精液尿酸含量随精子密度及活动率增加而上升,N0含量随之下降(P<0.01),结论精液尿酸含量测定可作为评价精子受活性氧损害的重要指标,证明尿酸对活性氧尤其在医学领域极为重视的NO损害精子具有保护性作用。     

糖尿病大鼠心肌NF-κB、iNOS、COX-2表达的研究

目的：观察核因子-κＢ（ＮＦ-κＢ）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）以及环氧化酶-2（COX-2）3种炎症因子在糖尿病大鼠心肌组织的表达。方法:30只SD大鼠随机分为正常对照组和糖尿病组，糖尿病组大鼠按60 mg/kg的剂量1次性腹腔注射链脲菌素。实验于24周末结束，观察2组大鼠的体重、平均血糖浓度、心重指数。并取心肌组织石蜡切片分别行NF-κＢ、iNOS和COX-2免疫组化染色。同时用凝胶电泳迁移率（EMSA）的方法测定心肌组织ＮＦ-κＢ活性。结果:(1)糖尿病大鼠心肌组织ＮＦ-κＢ阳性表达细胞明显多于对照组；（2）EMSA方法显示，糖尿病大鼠心肌组织ＮＦ-κＢ表达强度明显高于对照组；（3）对照组大鼠心肌组织未见iNOS的表达，糖尿病大鼠见明显iNOS的表达；（4）对照组大鼠心肌组织偶见COX-2的表达，糖尿病大鼠见明显COX-2的表达。结论:NF-κＢ、iNOS和COX-2在糖尿病大鼠心肌组织中表达活性明显增强。