精原干细胞体外转化和转分化的研究进展

精原干细胞(SSC)在睾丸曲细精管内微环境的精确调控下,只能单向分化为精子。然而,SSC可在特定条件下转化为多能干细胞,甚至直接重编程转分化为功能性终末分化细胞。该特殊潜能使其在再生和精准医学领域具有很好的运用前景。     

镰形棘豆总黄酮对糖尿病KKay小鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的 观察镰形棘豆总黄酮对糖尿病KKay小鼠肾小管上皮细胞转分化的影响。方法 选择糖尿病KKay小鼠模型，分别以低、中、高剂量(0.1、0.2、0.4 g/kg)的镰形棘豆总黄酮每日灌胃1次，连续4周。每天给药前观察动物一般状况；造模的第0、2、4周分别检测记录一般状况、体质量和空腹血糖；第5周时，取肾脏组织进行HE染色，采集的血清中肌酐(creatinine, Cr)、尿素氮(urea nitrogen, BUN)、尿酸(uric acid, UA)含量变化用于评价肾功能以及检测肾间质中的基因、蛋白表达。结果 与模型组比较，镰形棘豆总黄酮可以剂量相关性地减轻糖尿病KKay小鼠的体质量、血糖显著下降(P<0.05);24 h尿微量白蛋白(UAlb)显著下降，血清中Cr、BUN以及UA均显著降低(P<0.05);肾脏组织形态学观察肾组织中肾小球数量明显增多，肾小球细胞数目以及肾小球系膜区细胞外基质(extracelluar matrix, ECM)明显减少；抗体E-钙黏连蛋白(E-cadherin)的表达水平有所提高，而α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达显著下降(P<...     

瘦素促进肺成纤维细胞向肌纤维母细胞的转分化

目的探讨瘦素对肺成纤维细胞向肌纤维母细胞转分化的影响及其作用机制。方法体外培养HFL-1人胚肺成纤维细胞,用(0~200)ng/m L重组人瘦素(r HL)干预或联合转化生长因子β1(TGF-β1)处理HFL-1细胞,Western blot法测定α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化的AKT(p-AKT)的表达。CCK-8法测定细胞增殖,ELISA测定细胞上清液1型胶原蛋白含量。结果 (50、100、200)ng/m L的r HL处理HFL-1细胞48 h,α-SMA的蛋白表达水平均较对照组明显上调;与200 ng/m L r HL或5 ng/m L TGF-β1单独处理的细胞相比,200 ng/m L r HL和5 ng/m L TGF-β1联合处理HFL-1细胞48 h,HFL-1细胞α-SMA蛋白表达水平显著上调。r HL能够上调HFL-1细胞p-AKT的表达,LY294002可抑制r HL对HFL-1细胞α-SMA表达的诱导作用。与对照组相比,(12.5、25、50、100、200)ng/m L作用72 h,细胞存活率无显著性差异。(50~200)ng/m L r HL作用48 h,细胞上清液中1型胶原蛋白含量明显升高。结论瘦素能够促进肺成纤维细胞向肌纤维母细胞转分化,其作用机制与激活PI3K/AKT信号通路有关。     

阻断Rac1对转化生长因子-β诱导视网膜色素上皮细胞行为改变的作用研究

目的 观察转化生长因子β1(TGF-β1)诱导视网膜色素上皮(RPE)细胞间质样转分化(EMT)过程中Rac1在其细胞学行为改变中的作用.方法 人RPE-19细胞分为空白组、TGF-β1组、TGF-β1+NSC23766组、NSC23766组.所有实验于加入TGF-β1前2h给予NSC23766以封闭Rac1受体.免疫荧光、蛋白免疫印迹法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;细胞划痕、侵袭及凝胶收缩实验,观察NSC23766对细胞迁徙、侵袭、凝胶收缩作用.结果 TGF-β1组细胞中α-SMA荧光表达较空白组、TGF-β1+ NSC23766增强,差异有统计学意义(F=825.314,P=0.003);细胞划痕实验结果显示,TGF-β1组细胞间距小于TGF-β1+ NSC23766组,差异有统计学意义(P24h=0.04,P48h =0.001);与空白组细胞间距比较,差异无统计学差异(P=0.278).细胞侵袭实验结果显示,TGF-β1组穿过纤维膜的细胞数与空白组、TGF-β1+ NSC23766组、NSC23766组穿过纤维膜的细胞数比较,差异无统计学意义(F=0.371,P=0.055).凝胶收缩实验结果显示,TGF-β1组能明显增加细胞的促凝胶收缩能力,组间差异有统计学意义(F=40.473,P=0.014),TGF-β1组相对TGF-β1+ NSC23766组,差异有统计学意义(P=0.022).结论 Rac1在TGF-β1诱导RPE细胞凝胶收缩改变中发挥作用;NSC23766可通过调控Rac1活化抑制RPE细胞学行为的改变.     

他克莫司对转化生长因子-β诱导的肾小管上皮细胞转分化的抑制作用及对核因子-κB活性的影响

目的:探讨他克莫司(FK506)对转化生长因子-β(TGF-β)诱导的肾小管上皮细胞转分化的作用,及其与核因子-κB(NF-κB)活性变化的关系.方法:以人类肾脏近曲小管上皮细胞株(Human kidney cell,HKC)为研究对象,分为以下4组:①阴性对照组;②TGF-β(8 ng/ml)组:③FK506(0.1、1、10、50 ng/ml)组:④TGF-β(8 ng/ml) FK506(0.1、1、10、50 ng/ml)组.应用形态学、间接免疫荧光法,免疫组化技术和酶联免疫吸附法观察FK506对TGF-β诱导的HKC细胞转分化的作用、细胞培养上清液纤连蛋白、Ⅰ型胶原的变化及FK506对HKC细胞NF-κB活性的影响.结果:FK506(1,10,50 ng/ml) TGF-β组比TGF-β组诱导的HKC细胞E-钙粘蛋白和细胞角蛋白表达有所增强,波形蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达比TGF-β组减弱(P＜0.05),同时HKC细胞NF-κB的活性比TGF-β组减弱(P＜0.05),培养上清液纤连蛋白及Ⅰ型胶原的浓度比TGF-β组降低(P＜0.05);FK506(1、10、50 ng/ml)使基础状态下HKC细胞NF-κB的活性明显下降(P＜0.05)和上清液中纤连蛋白及Ⅰ型胶原的水平明显降低(P＜0.05).结论:①FK506剂量依赖性地抑制TGF-β诱导的肾小管上皮细胞转分化和纤连蛋白及Ⅰ型胶原的形成及基础状态下和TGF-β诱导的HKC细胞NF-κB的表达.②FK506抑制TGF-β诱导的HKC细胞转分化很可能与NF-κB的表达下调有关,需要进一步研究.     

二十碳五烯酸对白蛋白诱导肾小管上皮细胞转分化的影响

目的 探讨二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)对人白蛋白诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)发生转分化的干预作用.方法 体外培养人HK-2细胞,随机分为6组:A组,空白对照组(未加任何刺激物);B组,单纯EPA组(加入30 μmol/L EPA);C组,血白蛋白(albumin,Alb)诱导组(加入5 mg/ml Alb);D组,低剂量EPA干预组(5mg/ml Alb+ 10 μmol/L EPA);E组,中剂量EPA干预组(5mg/ml Alb+ 30 μmol/L EPA);F组,高剂量EPA干预组(5 mg/ml Alb+ 50μmol/L EPA).细胞免疫荧光检测E钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle ac-tin,α-SMA)的表达;ELISA法检测纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的水平;采用RT-PCR检测转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)的mRNA表达.结果 与A组比较,B组TGF-β1mRNA、α-SMA、FN、E-cadherin表达均无统计学差异(P＞0.05);C组TGF-β1 mRNA、α-SMA、FN较其他各组表达明显增高(P＜0.05),而E-cadherin表达明显下降(P＜0.05).与C组比较,D组、E组、F组TGF-β1 mRNA、α-SMA、FN表达逐渐下降,两组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);E-cadherin的表达逐渐增高,各组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).提示EPA可显著抑制Alb刺激人肾小管上皮细胞表达E-cadherin、α-SMA,同时下调上清液中FN水平,且其抑制作用的强弱与EPA浓度密切相关.EPA还明显下调了Alb刺激后TGF-β1的表达.结论 一定浓度的人白蛋白可以诱导体外培养的HK-2细胞发生转分化;EPA可一定程度上抑制白蛋白诱导HK-2发生转分化过程,且呈剂量依赖性.     

MicroRNA与糖尿病肾病

糖尿病肾病是糖尿病最常见的慢性并发症之一,Micro RNA通过调控细胞外基质蛋白合成、肾小管上皮-间充质转分化及足细胞功能参与糖尿病肾病的发生。此外,它们可作为潜在的糖尿病的生物标志物和治疗靶点。本文针对Micro RNA在糖尿病肾病方面的研究进展做一综述,目的在于从分子水平为糖尿病肾病的诊断和治疗提供新的思路和研究方向。     

瘦素对人肾小管上皮细胞转分化和转化生长因子-β1表达的影响

目的观察瘦素(LP)对人近端肾小管上皮细胞(HK-2)转分化及与转化生长因子-β1(TGF-βl)表达的影响,探讨其诱导转分化的机制。方法不同浓度LP(10、50、100ng/ml)刺激体外培养的HK-2细胞,以及LP作用不同时间(24、48、72h)进行分组,倒置显微镜下观察细胞形态学变化;RTPCR法和Western blot法检测细胞α-SMA、E-cadherin、TGF-βl、FN的表达水平;ELISA法检测上清中TGF-βl蛋白表达量。抗TGF-βl抗体中和实验分析LP对HK-2细胞转分化及与TGF-βl的关系。结果 (1)LP可使HK-2细胞逐渐由椭圆形变成长梭形,类似肌成纤维细胞的形态;(2)LP可下调E-cadherin的表达,同时上调α-SMA、TGF-βl的表达,其作用呈一定的剂量及时间依赖性;(3)抗TGF-βl抗体能够逆转LP诱导的转分化作用。结论 LP通过诱导HK-2细胞发生转分化,参与肾间质纤维化的发生发展,其作用机制与上调TGF-βl的表达有关。     

鳖甲煎丸对腹膜透析相关腹膜纤维化的影响及机制探讨

目的探讨鳖甲煎丸对腹膜透析(PD)小鼠腹膜纤维化的抑制作用及可能机制。方法采用ICR小鼠4.25%腹透液2.0 mL每日腹腔注射一次,并于第3、5、7天联合脂多糖0.8 mg/kg腹腔注射造模;鳖甲煎丸1.2 g/kg每日灌胃一次,干预6周后,测腹透超滤量,HE染色和Masson染色观察壁层腹膜形态改变及腹膜厚度;Western blot检测脏层腹膜组织N-cadherin、ZO-1的蛋白表达水平,及pAkt、总Akt的蛋白表达水平。结果腹膜透析(PD)组、鳖甲煎丸(BJJW)组与对照(Control)组比较,超滤量均显著下降(P0.05);壁层腹膜均显著增厚(P0.01)。脏层腹膜ZO-1蛋白表达降低,N-cadherin蛋白表达升高,pAkt也明显升高(均P0.01)。BJJW组与PD组比较,超滤量明显改善(P0.05),壁层腹膜厚度降低(P0.01);脏层腹膜ZO-1蛋白表达增加,N-cadherin蛋白表达下降,pAkt也明显下降(均P0.01)。结论鳖甲煎丸抑制腹膜纤维化,PI3K/Akt信号调节腹膜间皮细胞上皮-间质细胞转分化(EMT)是其机制之一。     

Connexin43通过SIRT1-HIF1-α通路改善糖尿病肾小管间质纤维化的研究

目的研究Connexin 43(Cx43)影响糖尿病状态下肾小管上皮细胞间充质转分化(EMT)以及肾小管间质纤维化的病理进程及其作用机制。方法采用db/db自发性糖尿病小鼠模型,通过尾静脉注射Cx43腺病毒过表达载体,观察糖尿病动物肾病理改变及肾功能指标的变化并检测Cx43、E-cadherin等EMT标志分子、FN等细胞外基质(ECM)成分等以及SIRT1,HIF1-α的表达变化;采用高糖培养的NRK-52E细胞,应用Cx43过表达或shRNA或分别转染野生型Cx43质粒、羧基末端缺失型Cx43ΔCT质粒和只表达Cx43羧基末端Cx43CT质粒等方法处理,检测Cx43、EMT标志分子、ECM成分、SIRT1与HIF1-α的表达变化,以及对HIF1-α活性的影响。结果在db/db糖尿病模型小鼠的肾脏以及高糖培养的NRK-52E中,Cx43表达下调;对db/db小鼠进行尾静脉注射Cx43过表达腺病毒,能改善其肾损伤,减少EMT标记物以及ECM成分的产生,并能上调SIRT1、降低HIF1-α的表达。在高糖培养的NRK-52E中过表达Cx43抑制高糖刺激诱导的EMT过程,减少ECM成分表达;干扰Cx43促进EMT过程,增加ECM成分表达;Cx43对EMT的影响主要通过其羧基端上调SIRT1表达,增强SIRT1对HIF1-α的去乙酰化作用,降低HIF1-α的活性,从而抑制糖尿病状态下肾脏EMT及肾小管间质纤维化。结论 Cx43通过其羧基端上调SIRT1表达,增强SIRT1对HIF1-α的去乙酰化作用,降低HIF1-α的活性,从而改善糖尿病状态下肾脏EMT及肾小管间质纤维化。