肾小管上皮细胞转分化过程中ILK的表达变化及大黄素对其的干预效应

目的:研究信号蛋白ILK在IL-1β诱导的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化(TEMT)中的表达变化以及大黄素是否是通过抑制ILK的表达而影响IL-1β诱导的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化.方法:以体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞株(NRK52E)为研究对象,分为空白对照组、大黄素对照组、IL-1β诱导组、IL-1β加大黄素组.在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;免疫双标法检测a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)和E-钙黏连素(E-cadherin)的表达;免疫单染检测ILK的表达;ELISA法测定培养细胞分泌的纤维连接蛋白(FN)含量.结果:IL-1β诱导细胞转变为明显类似成纤维细胞形态,增加a-SMA的表达[(65.5±1.7)vs(140.4±3.0),P<0.05],减少E-cadherin的表达[(82.5±1.0)vs(36.0±2.8),P<0.05),促进ILK的表达[(36.1±3.1)vs(82.4±1.2),P<0.05],促进FN的合成[(54.6±3.1)mg/Lvs(124.8±3.2)mg/L,P<0.05],加入大黄素后上述变化受到明显抑制.结论:在IL-1β诱导的TEMT中ILK的表达是明显上调的,大黄素可能通过下调ILK的表达而抑制IL-1β诱导的TEMT.     

P-选择素与树突状细胞在IgA肾病肾小管间质病变中变化的临床意义

IgA肾病病理改变中广泛存在或伴随着肾小管间质损害 ,黏附分子介导的炎细胞浸润是肾小管间质免疫炎症反应重要前提。树突状细胞 (DC)是功能最强的专职抗原递呈细胞 ,其炎症组织迁移依赖于黏附分子P 、E 选择素介导。为此我们探讨了IgA肾病患者肾组织中P 选择素表达和DC分布变化 ,以及与肾小管间质病变之间的关系。选择经肾活检和临床资料确诊的4 5例IgA肾病患者 ,其中男 2 5例 ,女 2 0例 ,平均年龄 (4 5 .4± 1.5 )岁。根据肾小管间质病变程度分为 3组 :轻度组 2 9例 ,中度组 10例 ,重度组 6例 ;10例正常人肾组织为对照。用免疫组化法…     

重组hCGPx腺病毒对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧再复氧损伤的保护作用

目的:研究重组腺病毒介导的人胞质型谷胱甘肽过氧化物酶(hCGPx)转染对人肾小管上皮细胞缺氧再复氧损伤的保护作用。方法:将含hCGPXcDNA的质粒pGEM-T-hCG-Px和重组腺病毒穿梭质粒pACCMV-pLpA重组,构建pACC-MV-hCGPx穿梭质粒后,与包装质粒pJM17共转染293细胞,构建重组腺病毒AdCMV-hCGPx。以重组腺病毒载体AdCMV-hCGPx转染体外培养的人肾小管上皮细胞株HK-2,以转染空载体的HK-2细胞为对照组,检测转染细胞中CGPx的表达水平。将HK-2细胞经缺氧再复氧损伤处理后,分别检测细胞的存活率、凋亡率及死亡率。结果:各转染组细胞中CGPx的表达率显著高于对照组(P<0.01)。经缺氧再复氧损伤处理后,AdCMV-hCGPx转染组细胞的存活率较对照组明显增强,死亡细胞明显减少,细胞凋亡明显受到抑制。结论:重组腺病毒介导的hCGPx转染人肾小管上皮细胞可保护缺氧再复氧引起的损伤。     

大鼠成体骨髓干细胞在肾小管上皮细胞再生中的作用

目的：观察肾小管上皮细胞的更新、再生有无来源于骨髓干细胞。方法:建立性别不匹配大鼠间的骨髓移植和肾脏移植模型，通过激光切割技术，将肾小管上皮细胞切割下来，提取其基因组DNA，用针对大鼠Y染色体上性别决定基因（Sry基因）的引物进行PCR反应，以观察提取的DNA中有无Sry基因。结果:据PCR反应结果，在2种模型所取标本的肾小管上皮细胞中，大部分可见Sry基因的存在。结论:骨髓干细胞可能是肾小管上皮细胞再生的一个来源。     

缺氧-复氧诱导HK-2细胞黏附窒息新生儿中性粒细胞的作用机制

目的：探讨在缺氧／复氧（hypoxia／reoxygenalion，H／R）情况下，人近曲肾小管上皮细胞（HK-2）对窒息新生儿中性粒细胞黏附作用的影响及其胞内信号传导机制。方法：以人近曲肾小管上皮细胞（HK-2）为研究对象，实验共分为6个组：缺氧4、12、24h组和缺氧24h后复氧4、12、24h组，每个实验组均设立空白对照组和吡咯烷二硫氨基甲酸（PDTC）干预组。采用液体石蜡覆盖法造成缺氧环境，分别对上述各组用生化法检测培养上清中乳酸脱氢酶（LDH）含量、测细胞悬液中髓过氧化物酶（MPO）活性，判断肾小管上皮细胞介导窒息新生儿中性粒细胞的黏附能力；免疫组化法检测HK-2细胞ICAM-1的表达。结果：与对照组相比，HK-2细胞经过缺氧／复氧处理后，LDH含量升高，MPO活性增加，细胞膜表面的ICAM-1表达明显增高，在缺氧24h达高峰，具有统计学意义（P＜0．05），而PDTC干预组上述指标，无统计学意义（P＞0．05）。结论：缺氧／复氧可刺激人近曲肾小管上皮细胞诱导窒息新生儿中性粒细胞黏附作用，其胞内信号机制可能涉及到NF—KB活化，进而诱导小管上皮细胞表面ICAM-1表达和合成增多。     

内外源性结缔组织生长因子对肾小管上皮细胞胶原合成的比较研究

目的：探讨内外源性结缔组织生长因子（CTGF）对人肾小管上皮细胞（HK2）胶原合成的作用。方法：将HK2细胞分为5组：（1）对照组；（2）TGF-β₁ 5 μg/L刺激组；（3）CTGF 5 μg/L刺激组；（4）TGF-β₁ 5 μg/L刺激＋CTGF反义ODN 3 mmol/L干预组；（5）TGF-β₁ 5 μg/L刺激＋CTGF正义ODN 3 mmol/L干预组。采用 RT-PCR 和Western blotting检测胶原Iα₁（Col Iα₁）、胶原IVα₁（Col IVα₁） mRNA水平和蛋白水平表达。 结果：TGF-β₁刺激可使HK2细胞Col Iα₁、Col IVα₁ mRNA和蛋白表达显著升高，而CTGF刺激则无此作用，CTGF反义ODN可拮抗TGF-β₁刺激引起Col Iα₁、Col IVα₁ mRNA和蛋白表达升高，正义ODN无拮抗作用。 结论：内源性CTGF介导了TGF-β₁刺激引起的HK2细胞胶原合成，外源性CTGF对HK2细胞胶原合成无影响。     

Role of angiotensin Ⅱ and JAK2 signal pathway in transdifferentation of renal tubular cells in mice after acute ischemic followed by reperfusion

Objective To investigate the effect of angiotensin (Ang) Ⅱ and its Janns-activated kinase-2 (JAK2) signal pathway in transdifferentiation of renal tubular cells under the challenge of acute ischemic reperfusion injury.Methods Models of acute ischemic reperfusion injury were established and the level of local Ang Ⅱ ,a key element of renin-angiotensin system (RAS),in kidney was measured using radioimmunity technique.The expression of α-smooth muscle actin (α-SMA),a phenotype of mesenchymal cells,was detected by RT-PCR and inununohistochemistry methods.Renal tubule cells ( NRK-52E) were cultured with various concentration of Ang Ⅱ ,followed by blocking of PD123319,Ang U receptor 2 antagonist,and AG490,an inhibitor of JAK2 signal pathway.Results Ang 0 of kidney tissue increased immediately after acute ischemic-reperfusion injury,in time dependent fashion.Expression of α-SMA in renal tubule cells was found at 48 hours after ischemic-reperfusion injury and in NRK-52E cells treated by high concentration of Ang Ⅱ and was dose and time dependent.The peak of α-SMA expression was seen after 30 minute treatment at the dose of 10-9'mol/L,which was interrupted by both of PD123319 and AG490.Conclusions Transdifferentiarion of renal tubular epithelial cells occurs under acute ischemic- reperfusion injury.Local renin-angiotensin system may play a role in the transdifferentiation of TEC through AT2 receptor and its JAK2 signal pathway.     

人肾小管上皮细胞血清饥饿法同步化方法的研究

目的：探讨采用血清饥饿法建立将人肾小管上皮细胞（HKC）的同步化方法。方法：将HKC分为6个不同低血清浓度组及对照组，分别采用胎牛血清浓度为0、1、2、3、4、5和100mL／L的DMEM培养液培养24h。根据流式细胞术结果选择的最佳同步化HKC的胎牛血清浓度。将HKC的同步化处理时间分别延长为24h、48h和72h，选择最佳同步化时间。用MTT法绘制生长曲线观察血清饥饿处理对HKC生长的影响。采用免疫细胞化学方法验证血清饥饿同步化处理HKC的效果。结果：选择无血清（0mL／L）和1mL／L为HKC最佳同步化的胎牛血清浓度，选择48h为HKC同步化最佳时间。细胞生长曲线表明采用1mL／L胎牛血清的DMEM培养液培养48h后恢复正常培养的HKC细胞，其生长曲线更接近于正常培养的细胞。Brdu进一步证明，用1mL／L胎牛血清的DMEM培养液培养48h可以使90％以上的HKC细胞处于G0／G1期。结论：用1mL／L胎牛血清的DMEM培养液培养48h可获得90％以上的G0／G1期HKC。     

放射性核素肾小管功能的测定

目前 ,测定肾小球滤过率 (ＧＦＲ)及有效肾血浆流量(ＥＲＰＦ)的方法主要为放射性核素法 ,包括γ -照像法及血浆样本清除法。其中血浆样本清除法更准确。Ｔａｕｘｅ最早用　131Ｉ -ＯＩＨ的清除作为ＥＲＰＦ值 ( 1971年 ) ,后来许多学者通过99Ｔｃｍ -ＭＡＧ3及99Ｔｃｍ -Ｌ ,Ｌ -ＥＣ的清除计算ＥＲＰＦ值[1～ 3] 。临床医生习惯用经该两种示踪剂的清除计算的ＥＲＰＦ值 ,但是它不如直接用99Ｔｃｍ-ＭＡＧ3及99Ｔｃｍ-Ｌ ,Ｌ -ＥＣ的清除值及肾小管摄取率 (ＴＥＲ)判断肾功能准确[1～ 6 ] 。本文介绍常用的肾小管摄取率及99Ｔｃｍ-ＭＡＧ3…