全文获取类型
收费全文 | 829篇 |
免费 | 32篇 |
国内免费 | 36篇 |
专业分类
耳鼻咽喉 | 10篇 |
儿科学 | 5篇 |
妇产科学 | 1篇 |
基础医学 | 117篇 |
临床医学 | 62篇 |
内科学 | 65篇 |
皮肤病学 | 13篇 |
特种医学 | 34篇 |
外国民族医学 | 1篇 |
外科学 | 19篇 |
综合类 | 211篇 |
预防医学 | 237篇 |
眼科学 | 4篇 |
药学 | 72篇 |
中国医学 | 14篇 |
肿瘤学 | 32篇 |
出版年
2024年 | 1篇 |
2023年 | 7篇 |
2022年 | 5篇 |
2021年 | 5篇 |
2020年 | 14篇 |
2019年 | 7篇 |
2018年 | 8篇 |
2017年 | 6篇 |
2016年 | 10篇 |
2015年 | 13篇 |
2014年 | 17篇 |
2013年 | 19篇 |
2012年 | 34篇 |
2011年 | 41篇 |
2010年 | 36篇 |
2009年 | 45篇 |
2008年 | 57篇 |
2007年 | 46篇 |
2006年 | 70篇 |
2005年 | 75篇 |
2004年 | 56篇 |
2003年 | 50篇 |
2002年 | 38篇 |
2001年 | 27篇 |
2000年 | 27篇 |
1999年 | 17篇 |
1998年 | 22篇 |
1997年 | 15篇 |
1996年 | 10篇 |
1995年 | 15篇 |
1994年 | 14篇 |
1993年 | 10篇 |
1992年 | 17篇 |
1991年 | 18篇 |
1990年 | 20篇 |
1989年 | 14篇 |
1988年 | 5篇 |
1986年 | 5篇 |
1982年 | 1篇 |
排序方式: 共有897条查询结果,搜索用时 125 毫秒
51.
幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白分子内佐剂融合疫苗的构建、纯化及活性研究 总被引:3,自引:0,他引:3
目的构建幽门螺杆菌(HP)中性粒细胞激活蛋白基因(napA)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(heat-labile enterotoxin B subunit,LTB)的分子内佐剂融合蛋白疫苗,并通过口服免疫小鼠研究其抗原性,为疫苗的开发奠定基础。方法利用分子克隆技术构建携带naDA—LTB融合基因的重组原核表达质粒pET-22b—napA—LTB,转化E、coli BL21(DE3),进行原核表达,重组表达蛋白采用亲和层析柱Chelating Sepharose进行纯化,Tris—Tricine电泳和Western blot鉴定,GM1-EUSA检测rNAP-LTB与神经节苷脂的结合。口服免疫BALB/c小鼠,检测重组融合蛋白的抗原性。结果重叠延伸PCR扩增出了约760bp的napA—LTB融合基因,其核苷酸序列与GenBank公布的相关序列一致。重组融合蛋白以可溶和包涵体两种形式表达,表达量约占细菌总蛋白的30%,Tris—Tricine初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约29000,纯化后纯度大于90%。Western blot检测其具有良好的抗原性。该重组蛋白保持了与GM1神经节苷脂结合的生物学活性。动物实验表明,分子内佐剂疫苗口服免疫小鼠后血清特异性IgG,IgA和胃黏液、肠黏液的抗原特异性sIgA抗体显著高于无佐剂单一亚单位疫苗。结论所获得的重组融合蛋白具有良好的抗原性和黏膜佐剂活性,为进一步的疫苗研究奠定了基础。 相似文献
52.
目的 克隆金黄色葡萄球菌肠毒素 A(SEA)全长基因并构建其表达载体。方法 以金黄色葡萄球菌的基因组 DNA为模板 ,用两条针对 SEA全长基因特异的引物 ,通过 PCR方法克隆 SEA全长基因 ,PCR产物与p GEM- T载体连接 ,经测序证实后进行亚克隆 ,构建其表达载体 p ET- 2 8b- SEA,再次测序验证。结果 克隆了 SEA全长基因 ,编码 2 5 7个氨基酸残基 ,经测序证实与 Genbank中收录的 SEA基因序列完全一致 ;并构建了 SEA的表达载体。结论 成功克隆了 SEA全长基因并构建了其表达载体 ,为进一步研究 SEA的融合蛋白的抗肿瘤活性奠定了基础 相似文献
53.
目的建立一种检测金黄色葡萄球菌肠毒素C的快速敏感PCR方法。方法根据金黄色葡萄球菌肠毒素C基因编码序列,设计1对PCR引物来特异性扩增靶基因片段,片段长度为600 bp,通过对1株金黄色葡萄球菌产肠毒素C菌株和5株非金黄色葡萄球菌产肠毒素C菌株进行检测来评价该方法的特异性;对金黄色葡萄球菌产肠毒素C菌株做一系列10倍稀释后进行PCR检测,并对其进行敏感性分析,对PCR扩增产物进行电泳和测序鉴定。结果1株金黄色葡萄球菌产肠毒素C菌株PCR扩增反应呈阳性,5株非金黄色葡萄球菌产肠毒素C菌株PCR扩增反应为阴性;通过基因测序证实了PCR产物的特异性;PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素C基因的检测下限为1.5×10^2cfu/ml。结论本研究建立了一个快速、特异、敏感的金黄色葡萄球菌肠毒素C基因PCR检测方法。 相似文献
54.
55.
目的探讨金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcus aureus enterotoxin B,SEB)对原代培养的人鼻黏膜上皮细胞释放促炎因子和(或)趋化因子的作用。方法将无血清原代培养的人鼻息肉及下鼻甲上皮细胞分别在SEB1、10、100ns/ml,白细胞介素(intedeukin,IL)1β 20ng/ml及SEB 10ng/ml+地塞米松13ng/ml等不同条件下孵育,12、24和48h后采用原位杂交方法检测鼻黏膜上皮细胞分泌的IL-5和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granuloyte macrophagc colony stimulating factor,GM-CSF)在mRNA水平的变化。结果①SEB刺激鼻黏膜上皮时,IL-5和GM—CSF mRNA表达增加,在一定范围内呈现时间和剂量依赖性,以10ng/ml、24h时最明显(P〈0.05),且鼻息肉组的表达高于下鼻甲组,差异具有统计学意义(P〈0.05);②IL-1β 20ng/ml组IL-5和GM-CSF mRNA表达增加不及SEB 10ng/ml组明显,差异具有统计学意义(P值均〈0.05);③SEB 10ng/ml+地塞米松13ng/ml组的IL-5和GM-CSF mRNA表达强度较SEB 10ng/ml组弱,差异具有统计学意义(P值均〈0.05)。结论SEB对原代培养的人鼻黏膜上皮细胞具有促炎作用。 相似文献
56.
57.
从健康人手分离出产肠毒素豚鼠气单胞菌的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
本文报道在1988年对健康人手指细菌学检测中,分离出两株生化不同的产肠毒素的豚鼠气单胞菌。以往文献报道豚鼠气单胞菌不产生肠毒素和溶血素,但本次分离菌株经乳鼠和家兔肠攀结扎试验均产生耐热肠毒素(ST),产生量和毒性均高于阳性对照产毒性大肠杆菌。其中1株能产生 ST和 LT(不耐热肠毒素)。 相似文献
58.
李红云 《国外医学:临床生物化学与检验学分册》2000,21(5):247-248,251
研究表明,金黄色葡萄球菌产生的肠毒素和中毒性休克毒素-1是极强的致病因子,它们在介导感染性休克及器官损害中可能具有一定意义。本文简要评论了肠毒素和中毒性休克毒素-1传统检测方法,着重介绍近年来该领域的若干新进展。 相似文献
59.
用 NalO_4醛化 Sepharose CL4B 微球。将兔抗 C_1 型葡萄球菌肠毒素抗体(兔抗SEC_1抗体)偶联到醛化的 Sepharose CL4B 微球上,制得 Sepharose CL4B 免疫微球。我们用 FITC 示标的兔抗 SEC_1抗体作示踪溶液,用上述免疫微球检验 SEC_1,用光学纤维显微荧光计测量标本的荧光发射。方法的检测敏感度为156ng SEC_1/ml。该方法也可用于检测其他可溶性抗原或抗体。 相似文献
60.
转染超抗原SEA肝癌细胞的构建及鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的用基因重组的方法将葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因转染至肝癌细胞.方法先从产SEA标准菌株中提取并扩增SEA全长基因,将SEA基因克隆及亚克隆至真核表达载体pLXSN构建pLXSN—SEA重组质粒,再将重组质粒转染至人肝癌细胞系BEL-7402细胞,用RT—PCR和ELISA法鉴定.结果从产SEA标准菌株ATCCl3565中提取并扩增出SEA基因全长片段;SEA基因克隆和亚克隆至真核表达载体pLXSN,经测序证实所得序列与GenBank中的标准序列完全一致;将pLXSN—SEA质粒转染肝癌细胞BEL-7402,经筛选获得稳定表达的抗性单克隆.RT—PCR扩增出约800bD的基因片段,经ELISA分析细胞培养上清中SEA蛋白的含量在皮克的水平.结论成功构建了重组超抗原SEA基因的克隆载体及真核表达载体,将SEA基因转染至肝癌细胞株BEL-7402细胞后癌细胞能够表达并持续分泌SEA蛋白. 相似文献