三种基因转录因子在大鼠耳蜗大上皮嵴的表达

目的检测Mathl、Hesl及Hess在大鼠耳蜗大上皮嵴（greater epithelial ridge，GER）的表达，初步探讨各基因对毛细胞分化和再生的作用。方法分别取出生当天（P0），出生后第1天（P1）、第3天（P3）、第4天（P4）和第5天（P5）大鼠耳蜗，利用机械分离和酶消化相结合的方法分离出相对纯化的GER细胞。Trizol法提取GER细胞总RNA，逆转录聚合酶链反应检测Mathl、Hesl及Hes5在GER的表达，琼脂糖凝胶电泳检测结果。结果Mathl在P0—P5大鼠GER均有表达，Hesl只在P0～P3大鼠GER有表达，而Hes5在P0—P5大鼠GER中均无表达。结论Mathl的表达水平可能只有累积至一定量，才能诱导GER增殖、分化成毛细胞，并且此过程可能同时受Hesl的控制。     

耳蜗毛细胞凋亡早期的检测方法

目的：介绍一种耳蜗毛细胞凋亡早期的检测方法。方法：将豚鼠暴露于155dB SPL的脉冲噪声75次，于噪声暴露后5min解剖取耳蜗。采用异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽(FITC-labeled phalloidin)进行毛细胞表皮板和纤毛肌动蛋白的染色，DNA荧光染料碘化丙锭(propidium Iodide，PI)进行细胞核染色，标记鉴别毛细胞死亡方式。原位末端标记法(TUNEL)进一步确认凋亡的毛细胞，荧光显微镜下观察凋亡的毛细胞形态学变化。结果：异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽和PI双重染色发现毛细胞核发生轻微固缩时，其表皮板结构完好。TUNEL阳性标记物存在于固缩的细胞核内。结论：应用异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽和PI双重染色法能够发现凋亡早期的毛细胞。     

活性氧与内耳毛细胞凋亡相关的信号转导及基因调控

许多内耳疾病中均可检测到不同程度的毛细胞凋亡及相关的信号转导途径和基因的表达调控,而活性氧也在耳蜗组织损伤中发挥重要作用。本文对活性氧与内耳组织损伤、内耳细胞凋亡及其相关信号转导和基因调控和两者之间的关系等方面进行综述。     

热休克蛋白27在耳蜗基底膜上的表达及其意义

目的探讨热休克蛋白27(HSP27)在耳蜗基底膜上的分布及意义。方法应用免疫荧光标记技术和激光扫描共聚焦显微镜技术(laserscanningconfocalmicroscopy,LSCM)检测HSP27在正常成年大鼠耳蜗基底膜上的表达。结果HSP27主要表达于耳蜗基底膜Corti器中外毛细胞的表皮板及其侧壁、内外柱细胞表面、外柱细胞的头、体及其足板,而内毛细胞及其它支持细胞上未见其表达。结论在发育成熟的正常耳蜗中,HSP27主要是通过稳定肌动蛋白微丝的正常结构,维持细胞骨架的稳定,维持耳蜗内活性氧在正常水平及执行分子伴侣的功能,保护细胞,从而达到维持耳蜗正常生理功能的作用。     

豚鼠耳蜗毛细胞暴露非聚焦超声后的酶组织化学观察

目的　探讨非聚焦超声 (non focusedultrasound ,NFU)对耳蜗毛细胞的影响。方法　以A型超声波诊断仪为超声发射器 ,分别以 2 5MHz、8MHz照射各 15耳豚鼠耳蜗 6h后 30min和 8h行耳蜗基底膜毛细胞铺片及冰冻切片观察琥珀酸脱氢酶 (succinatedehydrogenase ,SDH)组织化学变化。结果　 2 5MHz、8MHzNFU照射豚鼠耳蜗 6h后 8h能引起不同节段基底膜毛细胞SDH酶活性降低 ,其中外毛细胞较内毛细胞SDH酶活性降低更甚。照射后 8h组较照射后 30min组SDH酶活性有明显恢复。结论不同频率NFU超声照射耳蜗达一定剂量可以引起不同部位基底膜毛细胞的病理性缺氧改变 ,而这种缺氧病理改变在一定暴露剂量下是可逆或部分可逆的。提示耳蜗毛细胞可能与超声感受有关 ,其中外毛细胞可能起更为重要的作用 ,且不同部位毛细胞与超声感受的频率选择性可能有一定关系     

氧自由基与耳蜗毛细胞的DNA损伤

在内耳中有关氧自由基的研究已经较多，但关于氧自由基与毛细胞DNA损伤的研究在起步阶段。本文就氧自由基与耳蜗毛细胞的DNA损伤作一综述。     

豚鼠耳蜗单离外毛细胞的外向整流钾电流

目的 :观察豚鼠耳蜗单离外毛细胞 (OHC)的电生理特性 ,记录不同长度OHC的外向整流钾电流 ,分析区分外向整流钾电流所包含的通道电流成分 ,研究外向整流钾电流的动力学特征。方法 :采用酶消化法及机械分离OHC。运用全细胞膜片钳技术 ,在电压钳下记录K+ 通道电流。结果 :OHC的全细胞膜电容为 (30 .96±2 .79) pF(n =2 9) ,零电流电位 (30± 2 .1)mV(n =16 ) ,反转电位为 (- 5 1.6 7± 1.84 )mV(n =9)。不同长度OHC的外向整流钾电流存在系统差异 ,短OHC表现出大的钾电导 ,长OHC则相反。 10 0 μmol/L的氯化镉 (Cd Cl2 )抑制了OHC外向整流钾电流的最大电流幅度的 6 0 % ,且改变了电流的动力学特征 ,对峰电流的影响明显大于稳态电流 (P<0 .0 1,n =5 ) ;1mmol/L的四氨基吡啶 (4 AP)抑制了最大电流幅度的 4 3% ,没有改变电流的动力学特征。外向整流钾电流的激活符合Boltzmann方程 ,V1/ 2 =(- 11.0 7± 0 .2 6 )mV ,S =(6 .6 2± 1.74 )mV(n=13)。结论 :外向整流钾电流包含有钙离子激活的钾离子电流、外向延迟整流钾电流和A型电流     

钙蛋白酶在正常豚鼠耳蜗中的定位表达

目的 研究钙蛋白酶(calpain)在正常豚鼠耳蜗中的定位与表达.方法 应用免疫组织化学SABC法结合显微图像分析技术,观察耳蜗组织中calpain的表达;同时采用电生理指标听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)检测豚鼠的听力.结果 calpain免疫反应活性主要见于耳蜗血管纹、螺旋韧带、螺旋神经节及毛细胞,螺旋神经节的染色较深;其中,calpain 1表达多见于螺旋神经节细胞的胞浆中,而calpain 2免疫染色几乎出现在整个螺旋神经节细胞中.结论 calpain在正常豚鼠耳蜗的多种细胞中都有表达.     

增龄对年龄相关性听力减退大鼠听觉神经通路形态学的影响

目的 探讨年龄相关性听力减退大鼠听觉神经通路组织形态随增龄的变化.方法 通过乙酰胆碱酯酶染色耳蜗基底膜铺片,蜗核、听皮层石蜡切片甲苯胺兰染色,比较3月龄和18月龄大鼠耳蜗底回的传出神经末梢数,蜗核、听皮层的神经元数量.结果 18月龄大鼠耳蜗底回传出神经末梢较3月龄大鼠减少36%(P＜0.0 1),缺失以2、3排外毛细胞为主;蜗核神经元减少24%(P＜0.01);但听皮层神经元两组之间无显著差异(P＞0.05).结论 年龄相关性听力减退大鼠听觉神经通路随增龄而退变.