The Sperm Acrosome: Immunological Analysis using Specific Polyclonal and Monoclonal Antibodies Directed Against the Outer Acrosomal Membrane of Boar Spermatozoa

An antiserum to the purified porcine outer acrosomal membrane (OAM) was raised in female Balb/c mice and was characterized by means of an indirect ELISA. The hyperimmune serum reacted selectively with the acrosomal cap of the sperm head and showed an extremely good cross reactivity with bull and human spermatozoa when assayed by indirect immunofluorescence. Immunoelectron microscopy using the protein A-gold method further confirmed the specificity of the anti-OAM-antiserum for the OAM. In an effort to identify the OAM antigens recognized by the hyperimmune serum and to analyse the extent of cross reactivity on a molecular level, the SDS-extractable proteins were separated by SDS-PAGE, transblotted and immunoprinted using an 125J-conjugated anti-mouse-antibody. To facilitate functional and structural analysis of distinct OAM-proteins monoclonal antibodies were generated by hybridization of mouse myeloma cells with the splenocytes of female Balb/c mice immunized with the purified OAM. One fusion resulted in about 100 anti-OAM-antibodies secreting hybridoma cultures, of which about 30% showed cross reaction with human and bull spermatozoa. Four stable cell lines were selected for this study secreting antibodies directed against the outer acrosomal membrane of boar spermatozoa. Whereas the polyclonal immune mouse serum stained the entire acrosomal cap, the four hybridoma antibodies generated a patch-work-like immunofluorescence pattern over the acrosome. HPLC-ELISA of the solubilized OAM revealed first information on the nature of the corresponding membrane antigen.     

孕足月胎膜早破与头位难产的相关性

目的：探讨足月妊娠胎膜早破与难产的关系。方法：选择262例足月妊娠胎膜早破患者作为观察组,另随机抽取本院同期262例无胎膜早破的健康孕妇作为对照组,比较两组难产率的发生情况。结果：观察组难产率为45.0%,明显高于对照组的22.9%（P〈0.01）。两组的难产因素差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：胎膜早破与难产有相关性,应及早处理,防止母儿并发症的发生。     

羊栖菜多糖对S180荷瘤小鼠红细胞相关生化功能影响的研究

 目的分析羊栖菜多糖对S₁₈₀荷瘤小鼠红细胞相关生化功能影响的研究。方法建立肿瘤动物模型,分高、中、低剂量腹腔给予羊栖菜多糖7 d,采集红细胞,制备红细胞悬液,运用激光共聚焦扫描技术测定荷瘤小鼠红细胞内[Ca²⁺]的变化;运用相关试剂盒测定红细胞膜表面唾液酸含量和Na⁺,K⁺-ATPase及Ca²⁺,Mg²⁺-ATPase活性的变化;用流式细胞仪分析红细胞膜电位水平的变化;采用高效毛细管电泳法测定红细胞电泳合淌度的变化。结果羊栖菜多糖能降低荷瘤小鼠红细胞内[Ca²⁺],升高膜表面唾液酸的含量,增强膜表面Na⁺,K⁺-ATPase及Ca²⁺,Mg²⁺-ATPase的活性,提高红细胞膜电位水平,提高红细胞的电泳合淌度。结论羊栖菜多糖可调节或恢复S₁₈₀荷瘤小鼠红细胞多种生理生化功能。     

加减大黄廑虫丸抑制血管生成的实验研究

目的探讨加减大黄廑虫丸对血管生成的抑制作用。方法鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）法检测加减大黄磨虫丸对血管生成的影响；采用MTS比色法观察不同浓度的加减大黄磨虫丸对血管内皮生长因子（VEGF）诱导的ECV-504细胞增殖的影响；Tran—swell小室检测不同浓度的加减大黄廑虫丸对ECV-304细胞移行的影响；Matrigel实验检测不同浓度的加减大黄磨虫丸对ECV-304细胞内皮管腔形成的影响。结果加减大黄磨虫丸中、低浓度组能够抑制鸡胚CAM血管生成；MTS比色法显示，0．05—0．20g/ml浓度的加减大黄鹰虫丸对VEGF诱导的ECV-304细胞增殖具有抑制作用，而更低和更高浓度的加减大黄廑虫丸则无抑制作用。Transwell小室实验显示，加减大黄廑虫丸浓度为0、12．5、25．0和50．0mg/ml时ECV-504细胞移行数分别为208．67±17．16、132．67±16．50、78．33±13．50和18．67±6．66；Matrigel实验显示，加减大黄磨虫丸浓度为0、12．5、25．0和50．0mg/ml时ECV-304细胞内皮管腔形成数分别为25．67±1．53、22．33±1．53、16．33±2．52和2．33±1．53，可见抑制细胞移行和管腔形成的作用随浓度增大而增强。结论加减大黄廑虫丸具有明显抑制血管生成的作用。     

丙泊酚对大鼠缺血再灌注肾NF-κB、TNF-α表达的影响

目的 研究丙泊酚对大鼠肢体缺血再灌注损伤后肾组织中肿瘤坏死因子-α（tumornecrosisfactor-α，TNF-α）、核因子-κB（nuclear factor-κxB，NF-κB）表达的影响。方法 24只SD雄性大鼠，随机分为假手术对照组（A组），肢体缺血再灌注组（B组）和丙泊酚干预组（C组），每组8只。采用免疫组织化学方法检测TNF-α、NF-κB的表达，行图像分析半定量。结果 B组大鼠肾组织中TNF-α、NF-κB的表达明显高于A组（P〈0．05），C组明显低于B组（P〈0．05）。结论 肢体缺血再灌注后有明显肾损伤，丙泊酚对肢体缺血再灌注肾损伤有一定程度的保护作用，其机制可能与下调大鼠肢体缺血再灌注损伤肾组织中TNF-α、NF-κB的过度表达有关。     

组织工程化表皮膜片构建及其在供皮区的应用研究

目的构建组织工程化表皮细胞膜片并应用于供皮区创面治疗。方法利用患者少量自体或同种异体正常皮肤分离、培养、扩增的表皮细胞,接种于壳聚糖明胶膜构建成表皮细胞膜片;将膜片移植于治疗组供皮区创面、适度加压,同时设立对照组:空白材料对照以及传统油纱布对照覆盖创面。于术后5～10d、30d、90d行大体观察、组织学检查、广谱角蛋白、外皮蛋白、层粘连蛋白、免疫组织化学检测以及Ⅰ、Ⅲ型胶原比值测定(偏光显微镜、RTPCR)。结果利用自体及异体表皮细胞和壳聚糖明胶膜能够构建出人表皮细胞膜片,应用于临床供皮区创面治疗15例,经过3个月随访,疗效肯定。移植膜片创面愈合时间(8.1±1.3)d,空白材料对照区为(16.2±3.8)d,空白油纱布对照区为(23.0±5.8)d。移植膜片存活良好,结构较完整、术后30d及90d观察:12例无明显增生,3例有轻度增生(20.0%),而空白油纱布对照区11例遗留增生性瘢痕(74.4%,χ2=8.127,P<0.01)。结论表皮细胞-壳聚糖明胶膜片能促进供皮区创面早期愈合并减少后期瘢痕增生,具有良好治疗效果。     

低血容量性休克大鼠心肌细胞Ca2+浓度及膜电位的变化

目的 旨在探讨低血容量性休克大鼠心肌细胞Ca2 浓度及其膜电位的变化.方法 选用Wistar大鼠84只,随机分成休克高渗复苏组(HES组)、生理盐水复苏组(NS组).建立休克模型,按7个时相(休克前、休克、复苏后5、15、30、60、90min)处死大鼠.取心室肌细胞培养传代,用Fluo-4/AM为游离钙荧光探针、JC-1荧光染色,流式细胞仪分别检测不同时相心肌细胞Ca2 浓度及线粒体膜电位.结果 HES组在休克、复苏后5、15、30min各时间点心肌细胞Ca2 浓度较休克前明显升高,其膜电位较休克前显著降低(P＜0.01);在复苏后60、90min心肌细胞Ca2 浓度及线粒体膜电位与休克时比较差异有显著性意义(P＜0.01);NS组在休克、复苏后各个时相与休克前比较心肌细胞Ca2 浓度均明显升高,其膜电位明显下降(P＜0.01);复苏后各时间点与休克时比较差异无显著性意义(P＞0.05);HSE组和NS组在休克后60、90min心肌细胞Ca2 浓度及其膜电位差异有显著性意义(P＜0.01).结论 低血容量性休克可诱发大鼠心肌细胞Ca2 浓度升高,线粒体膜电位下降,导致心肌细胞电生理活动障碍;高渗盐溶液不但可改善低血容量休克时心肌细胞Ca2 浓度,而且能有效地稳定其线粒体膜电位;而生理盐水对心肌细胞Ca2 浓度及其膜电位的作用不显著.     

尔肾康对肾病综合征大鼠模型系膜增殖的影响

目的：观察中药尔肾康对肾病综合征大鼠模型系膜增殖的影响，探讨其治疗机制。方法：选取Wistar大鼠，采用阿霉素慢性肾病模型，分别用强的松和中药合强的松进行治疗，并设对照组，连续给药12周，测定24h尿蛋白定量、血生化及血、尿TNF—α，观察肾脏病理变化。结果：中药合激素组24h尿蛋白定量呈明显低值，与模型组相比有极显著性差异（P〈0．01），与激素组相比较有明显差异（P〈0．05）；中药合激素组明显降低大鼠血、尿TNF—α浓度，与激素组比较也有明显差异（P〈0．05）；中药合激素组同激素组比较有显著升高白蛋白作用（P〈0．05）；病理切片发现，中药合激素组与模型组、激素组比较，肾小球轮廓清晰，系膜细胞和系膜基质增生不明显，肾小管内未见有蛋白管型。结论：尔肾康有明显抑制系膜增殖的作用，机理可能是促进白蛋白的合成，减少白蛋白在肾小管处的分解，抑制TNF—α的分泌。     

左旋盐酸苯环壬酯鼻腔喷雾剂的局部安全性评价

 目的对制备的左旋盐酸苯环壬酯鼻腔喷雾剂进行局部安全性评价。方法以蟾蜍上颚黏膜纤毛为模型考察纤毛毒性,以大鼠鼻黏膜形态学检查评价局部刺激性。结果左旋盐酸苯环壬酯鼻喷剂纤毛毒性及对局部刺激性均较小。结论左旋盐酸苯环壬酯鼻喷剂局部用药较安全,具有良好的应用前景。