积雪草苷对增生性瘢痕成纤维细胞结缔组织生长因子及RhoA/ROCK-Ⅰ调控信号的影响

 目的 研究积雪草苷对增生性瘢痕成纤维细胞结缔组织生长因子（CTGF）的影响及RhoA/ROCK-Ⅰ信号通路在其中的作用。方法 分离培养人增生性瘢痕组织来源的成纤维细胞,应用积雪草苷300 μg·mL-1及RhoA的下游效应器Rho激酶的特异抑制剂Y-27632对实验细胞进行干扰实验。分为对照组、积雪草苷组、Y-27632组、积雪草苷+ Y-27632组。运用荧光定量PCR（SYBR Green）及免疫荧光细胞化学的方法检测各组瘢痕成纤维细胞中RhA、ROCK-Ⅰ、CTGF mRNA与蛋白表达。结果 积雪草苷300 μg·mL-1能抑制RhoA、ROCK-Ⅰ、CTGF的mRNA与蛋白表达,与对照组比较具有统计学意义（P＜0.05）;Y-27632能阻碍积雪草苷的作用,积雪草苷（300 μg·mL-1）+ Y-27632组,CTGF的mRNA与蛋白表达明显高于单纯积雪草苷组（P＜0.05）,与对照组及Y-27632组比较无显著性差异（P＞0.05）;Y-27632组与对照组比较RhoA、ROCK-Ⅰ、CTGF的mRNA与蛋白表达没有统计学意义。结论 积雪草苷300 μg·mL-1能抑制RhoA、ROCK-Ⅰ、CTGF的mRNA与蛋白表达;而且可通过RhoA/ROCK-Ⅰ信号通路抑制瘢痕成纤维细胞中CTGF mRNA与蛋白表达。这可能是积雪草苷治疗瘢痕的作用机制之一。     

用酶解预处理-微波法提取积雪草总苷

采用酶解预处理微波法提取积雪草中的积雪草总苷。对酶解预处理温度、酶解时间、液固比、微波辐射时间等影响因素进行了单因素考察。根据考察结果选择酶解预处理温度、液固比、微波辐射时间3个因子进行二次回归正交试验设计。确定了酶解预处理微波提取积雪草总苷的最佳工艺条件,建立了具有良好预测性能的提取模型。正交试验结果表明积雪草总苷提取的最佳工艺条件为：酶解温度45 ℃,液固比36,酶解时间30 min,微波辐射110 s。在此条件下积雪草总苷的得率为27.10%。该方法与传统提取法比较,具有提取速率快、目标成分得率高的特点,是较为理想的一种提取方法。     

Dermal fibroblast-associated gene induction by asiaticoside shown in vitro by DNA microarray analysis

BACKGROUND: Asiaticoside, isolated from Centella asiatica, promotes fibroblast proliferation and extracellular matrix (ECM) synthesis in wound healing. The precise mechanism, however, in molecular and gene expression levels is still unclear. OBJECTIVE: Using cDNA microarray technology, the alteration of gene expression profiles was determined for human dermal fibroblasts in vitro in the presence of asiaticoside (30 microg mL(-1)). Fifty-four genes, with known functions for cell proliferation, cell cycle progression and synthesis of ECM, were significantly upregulated in our 'genome-nest' expression profile at various time points. Furthermore, the mRNA levels and protein production of certain genes responsible for ECM synthesis (e.g. encoding type I and type III collagen proteins) were evaluated by Northern blot and radioimmunoassay, respectively. RESULTS: We found that there is a close correlation between the gene profile, mRNA and protein production in the response of the cells to asiaticoside stimulation. CONCLUSIONS: This information could be used for exploring the response of the target genes to asiaticoside in fibroblasts.     

积雪草甙对成纤维细胞DNA合成与胶原蛋白合成的影响

采用放射性同位素标记法研究积雪草甙对体外培养的小鼠成纤维细胞DNA合成和胶原蛋白合成的影响。结果表明,积雪草甙在一定剂量范围内能促进小鼠成纤维细胞DNA合成和胶原蛋白合成,并呈剂量依赖关系。     

积雪草苷对平阳霉素诱导的大、小鼠肺纤维化的保护作用

  目的：观察积雪草苷对平阳霉素诱导的大、小鼠肺纤维化的保护作用,并探讨其作用机制。  方法：①小鼠实验:将KM小鼠随机分为对照组、模型组、阳性对照(醋酸泼尼松,5 mg/kg)组和积雪草苷低剂量(40 mg/kg)、高剂量(80 mg/kg)组,每组10只。除对照组外,其他各组小鼠采用一次性气管注入平阳霉素(5 mg/kg)的方法诱导肺纤维化模型。造模次日,各组灌胃给予相应的药物干预,连续28 d。末次给药后,分离肺组织;测定肺指数;ELISA检测肺组织白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β含量;PCR检测肺组织转化生长因子-β₁(TGF-β₁)mRNA表达。②大鼠实验:将SD大鼠随机分为对照组、模型组、阳性对照(醋酸泼尼松,4 mg/kg)组和积雪草苷低剂量(20 mg/kg)、高剂量(40 mg/kg)组,每组10只。除对照组外,其他各组大鼠采用一次性气管注入平阳霉素(5 mg/kg)的方法诱导肺纤维化模型。造模次日,各组灌胃给予相应的药物干预,连续28 d。末次给药后,分离肺组织;测定肺指数;HE染色后光镜下观察各组大鼠肺组织形态学变化;ELISA检测肺组织IL-6、TNF-α、IL-1β含量;PCR检测肺组织TGF-β₁mRNA表达。  结果：①小鼠实验:模型组小鼠肺指数,肺组织IL-6、TNF-α、IL-1β含量及TGF-β₁ mRNA表达均较对照组显著升高(P<0.01)。与模型组相比,阳性对照组与积雪草苷低、高剂量组小鼠的肺指数及肺组织IL-6、TNF-α、IL-1β含量显著降低(P<0.05,P<0.01),积雪草苷低、高剂量组小鼠肺组织TGF-β₁ mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。②大鼠实验:模型组大鼠肺指数,肺组织IL-6、TNF-α、IL-1β含量及TGF-β₁ mRNA表达均较对照组显著升高(P<0.01)。与模型组相比,阳性对照组与积雪草苷低、高剂量组大鼠肺指数显著降低(P<0.05,P<0.01),肺组织TGF-β₁ mRNA表达水平显著降低(P<0.01);阳性对照组和积雪草苷高剂量组大鼠肺组织IL-6、TNF-α、IL-1β含量较模型组显著降低(P<0.05,P<0.01),积雪草苷低剂量组TNF-α、IL-1β含量较模型组明显降低(P<0.05)。③HE染色观察显示,模型组大鼠肺泡结构破坏,成纤维细胞增生,伴有大量炎症细胞浸润;积雪草苷低、高剂量组和阳性对照组大鼠上述病变均有改善,炎症细胞浸润和肺泡萎陷减轻。  结论：积雪草苷对平阳霉素诱导的大、小鼠肺纤维化具有保护作用,其机制可能与下调TGF-β₁mRNA表达、抑制炎症细胞因子激活有关。     

积雪草总苷及其制剂的含量研究.Ⅱ.积雪草总苷中积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B含量的HPLC法测定

应用流动相中添加β-环糊精法,建立了HPLC法测定积雪草总苷中的积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B的含量.采用C_(18)色谱柱,以乙腈-4 mmol/L β-环糊精溶液(25:75)流动相,检测波长204 nm.积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B均在2～20μg范围内线性关系良好,平均回收率分别为99.25%、98.41%和100.15%,RSD分别为1.12%、1.21%和1.20%.     

UPLC-MS法测定大鼠血浆中积雪草苷的浓度及其药代动力学研究

目的建立测定积雪草苷血浆药物浓度的超高效液相色谱-电喷雾离子化-质谱(UPLC-ESI-MS)联用的分析方法,探讨其在大鼠体内的药动学。方法SD大鼠8只,单剂量静注(40mg·kg-1)积雪草苷,用UPLC-MS法测定给药后的血浆中药物浓度,并用DAS软件求算其药代动力学参数。结果积雪草苷的血药浓度在0.038～7.6mg·L-1范围内线性关系良好,最低检测限为38μg·L-1,提取回收率大于95%,日间、日内RSD均小于10%。大鼠单剂量静注积雪草苷40mg·kg-1后,血药浓度-时间曲线呈二室模型。主要药动学参数AUC(0-t)、T12β、CL、Vd分别为:(81443.67±57156.81)μg·L-1·min-1、(23.44±9.60)min、(0.19±0.07)L·min-1·kg-1、(8.92±6.68)L·kg-1。结论该方法操作简便、快速、灵敏、专属性强,可用于积雪草苷的体内大批量样品定量分析及药代动力学研究。     

RP-HPLC测定积雪苷缓释片释放液中的2个指标成分

目的建立可同时测定积雪苷缓释片释放液中的2个指标成分——积雪草苷(asiaticoside,AS)和羟基积雪草苷(madecassoside,MS)的RP-HPLC。方法以DIAMONSIL C18(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,乙腈-甲醇-水(22∶35∶50)为流动相,柱温控制在25℃,流速0.8 mL.min-1,检测波长为204 nm,建立了可同时用于释放液中的AS和MS分离测定的RP-HPLC。结果方法学评价结果显示,积雪草总苷中MS和AS的峰面积与浓度之间呈良好的线性(浓度范围均为2~200μg.mL-1,r=0.999 9),方法的回收率MS为99.9%~101.0%,AS为100.3%~103.1%(n=6),日内日间精密度小于1.9%。结论本方法可同时测定积雪苷缓释片释放液中的2个指标成分。方法专属性强,快速简单,重现性好。     

积雪苷霜软膏对豚鼠皮肤色素沉着的预防作用

目的观察积雪苷霜软膏对紫外线照射攻击后豚鼠皮肤色素沉着的预防作用。方法试验豚鼠以320nm中波紫外线(UVB)照射一日1次(照射时间60分钟)共30日;试验豚鼠造模同时分别涂赋形剂(模型组)、维A酸乳膏(维A酸组)和积雪苷霜软膏(积雪苷霜软膏组)预防,观测皮肤组织酪氨酸(Tyr)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量变化,并运用Elivision~(TM) plus免疫组化法和图像分析法观测黑色寨细胞在表皮中的分布及分泌功能情况。结果各模型组豚鼠皮肤黑色素沉着增加,皮肤Tyr、MDA含量明显升高,SOD含量降低。积雪苷霜软膏组豚鼠皮肤Tyr、MDA水平显著降低,SOD水平升高;豚鼠表皮黑色素沉着面积减小、黑色素沉着程度降低。结论积雪苷霜软膏对紫外线照射攻击豚鼠所致皮肤色素沉着有一定的预防作用。     

积雪草苷抗大鼠免疫性肝纤维化作用研究

目的：研究积雪草有效成分积雪草苷抗纤维化的作用。方法：建立猪血清致大鼠免疫性肝纤维化模型,设正常对照组、模型对照组、γ干扰素组、积雪草苷高剂量组(0.9 g.kg-1)、积雪草苷中剂量组(0.3 g.kg-1)、积雪草苷低剂量组(0.1 g.kg-1),检测大鼠血清中谷丙转氨酶( ALT )、 谷草转氨酶( AST )以及肝组织中羟脯氨酸 ( Hyp) 的含量,HE及Masson染色观察肝组织病理学变化,并且对纤维化程度进行半定量评分。结果：积雪草苷能显著降低大鼠血清中的 ALT、AST水平以及肝组织中的Hyp水平;积雪草苷各剂量组均能减轻大鼠肝组织的纤维化程度,其中高剂量组尤为显著 (P < 0.01) 。结论:积雪草苷具有抗免疫性大鼠肝纤维化的作用, 且呈现出一定的量效关系。