基于网络药理学和分子对接法探寻清宣止咳颗粒治疗儿童新型冠状病毒肺炎活性化合物

目的:探寻清宣止咳颗粒治疗儿童新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的活性化合物。方法:借助中药系统药理学分析平台(TCMSP)检索清宣止咳颗粒中桑叶、薄荷、苦杏仁、桔梗、白芍、枳壳,陈皮、紫菀、甘草的化学成分和作用靶点。通过UniProt、GeneCards等数据库查询靶点对应的基因,进而运用Cytoscape 3.7.2构建化合物-靶点(基因)网络,通过DAVID进行基因本体(GO)功能富集分析和基于京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,预测其作用机制。结果:化合物-靶点网络包含141个化合物和相应靶点292个,关键靶点涉及PTGS2、ESR1、HSP90AA1、CALM1、AR等。GO功能富集分析得到GO条目339个(P<0.05),其中生物过程(BP)条目244个,细胞组成(CC)条目33个,分子功能(MF)条目62个。KEGG通路富集筛选得到96条信号通路(P<0.05),涉及小细胞肺癌、非小细胞肺癌、T细胞受体信号通路等。分子对接结果显示槲皮素、山柰酚、木犀草素等核心化合物与新冠病毒的亲和力与推荐用药相似。结论:清宣止咳颗粒中的有效活性成分可能通过作用于PTGS2、HSP90AA1、ESR1等靶点调节多条信号通路从而抑制新型冠状病毒肺炎作用。     

基于网络药理学预测中药在抗卡波西肉瘤血管生成治疗中的潜在有效成分及分子作用机制

【摘要】 目的 基于网络药理学方法分析中药抗卡波西肉瘤血管生成的潜在有效成分及分子作用机制，预测中药在抗卡波西肉瘤血管生成中的关键靶点和信号通路。方法 根据既往网络药理学研究结果，利用中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）获取虎杖、桑白皮、土茯苓、紫苏子的主要化学成分和靶点；通过GeneCard、OMIM、DrugBank、TTD数据库检索获取血管生成及卡波西肉瘤治疗靶点，构建韦恩图，得到卡波西肉瘤与抗血管生成药物成分相互作用的靶点；利用STRING 11.5平台构建蛋白质互作模型；应用Cytoscape3.6.0软件构建成分-靶点网络，并进行可视化。同时利用Metascape平台对核心靶点进行基因本体（GO）功能富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。最后将得到的主要活性成分和核心靶点进行分子对接验证。结果 抗卡波西肉瘤血管生成药物的核心成分为白藜芦醇［连接度（degree）142］、槲皮素（degree：141）、山柰酚（degree：56）、木樨草素（degree：56）、β-谷甾醇（degree：37）、花生四烯酸（degree：36）、柚皮素（degree：36）等，核心靶点是前列腺素内过氧化物合酶2（PTGS2）。利用KEGG分析筛选出抗卡波西肉瘤血管生成相关的重要通路为癌症信号通路；GO分析显示在生物学过程中靶点主要集中在细胞迁移的正调控。分子对接结果显示白藜芦醇、槲皮素、山柰酚和木樨草素与PTGS2均有较好的亲和力，其中槲皮素和木樨草素与PTGS2结合能力最高，结合能分别为-9.4、-9.5 kcal/mol。结论 本研究表明中医药百科全书数据库所录入的4种中药可能通过调控癌症信号通路，作用于PTGS2等靶点发挥抗血管生成作用，从而预测了中药抗卡波西肉瘤血管生成的可能作用机制。     

Phyllanthus emblica (Amla) methanolic extract regulates multiple checkpoints in 15-lipoxygenase mediated inflammopathies: Computational simulation and in vitro evidence

Amla (Phyllanthus emblica) has long been used in traditional folk medicine to prevent and cure a variety of inflammatory diseases. In this study, the antioxidant activity (DPPH scavenging and reducing power), anti-inflammatory activity (RBC Membrane Stabilization and 15-LOX inhibition), and anticoagulation activity (Serin protease inhibition and Prothrombin Time assays) of the methanolic extract of amla were conducted. Amla exhibited a substantial amount of phenolic content (TPC: 663.53 mg GAE/g) and flavonoid content (TFC: 418.89 mg GAE/g). A strong DPPH scavenging effect was observed with an IC₅₀ of 311.31 µg/ml as compared to standard ascorbic acid with an IC₅₀ of 130.53 µg/ml. In reducing power assay, the EC₅₀ value of the extract was found to be 196.20 µg/ml compared to standard ascorbic acid (EC₅₀ = 33.83 µg/ml). The IC₅₀ value of the RBC membrane stabilization and 15-LOX assays was observed as 101.08 µg/ml (IC₅₀ of 58.62 µg/ml for standard aspirin) and 195.98 µg/ml (IC₅₀ of 19.62 µg/ml for standard quercetin), respectively. The extract also strongly inhibited serine protease (trypsin) activity with an IC₅₀ of 505.81 µg/ml (IC₅₀ of 295.44 µg/ml for standard quercetin). The blood coagulation time (PTT) was found to be 11.91 min for amla extract and 24.11 min for standard Warfarin. Thus, the findings of an in vitro study revealed that the methanolic extract of amla contains significant antioxidant, anti-inflammatory, and anticoagulation activity. Furthermore, in silico docking and simulation of reported phytochemicals of amla with human 15-LOXA and 15-LOXB were carried out to validate the anti-inflammatory activity of amla. In this analysis, epicatechin and catechin showed greater molecular interaction and were considerably stable throughout the 100 ns simulation with 15-lipoxygenase A (15-LOXA) and 15-lipoxygenase B (15-LOXB) respectively.     

基于肉瘤基因信号通路探讨槲皮素对乳腺癌MCF-7细胞的作用机制

目的：探讨槲皮素通过RAS/RAF/MEK1信号通路对乳腺癌MCF-7细胞的作用机制。方法：将乳腺癌MCF-7细胞分为空白对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、极高剂量组，采用CCK-8细胞活力检测法测定不同组别的MCF-7细胞24 h、48 h、72 h的细胞活性；采用流式细胞术检测不同组别MCF-7细胞的凋亡率；采用蛋白质印迹法检测不同组别MEK1、RAS、YAP蛋白的表达；采用免疫荧光染色观察雌激素受体、孕激素受体染色情况。结果：与空白对照组比较，低剂量组、中剂量组、高剂量组及极高剂量组的MCF-7细胞活力均出现下降，呈浓度依赖，不具有时间依赖性，差异有统计学意义（P<0.05）；乳腺癌细胞MCF-7的晚期凋亡率明显增加，差异有统计学意义（P<0.05）；低剂量组、中剂量组和极高剂量组MCF-7细胞的MEK1、RAS、YAP蛋白的表达出现不同程度下降，差异有统计学意义（P<0.05）；低剂量组、中剂量组、高剂量组及极高剂量组的MCF-7细胞中雌激素受体、孕激素受体表达增加，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：槲皮素具有针对乳腺癌MCF-7细胞的抗肿瘤作用，且具有浓度依赖性，其机制可能与对RAS/RAF/MEK1信号通路的抑制有关。